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实验20受体细胞的制备及外源基因导入原则转基因是将异种DNA分子引入其他细胞行，使受体细胞获得新的遗传性状的手段。转化过程中使用的受体细胞通常是限制性-修饰系统缺陷的突变体，即不包含限制性内切酶和甲基化酶的突变体，通常用R-，M-符号表示。受体细胞经过电击法、CaCl2、MgCl2等几种特殊的化学试剂法，细胞膜的通透性发生变化，成为具有外源DNA的载体分子可以通过的易感细胞。在特定条件下，它与受体细胞混合绝热，将含有外源DNA的载体分子注入受体细胞。进入细胞的DNA分子通过克隆、表达、基因信息的转移，受体细胞出现了新的遗传形态。在选择性培养基上培养变形细胞，就会筛选出具有异种DNA分子的受体细胞。本实验以E.coliDH5菌株为受体细胞，将受体菌处理为MgCl2，使其处于易感状态，然后与pUC19质粒共热，实现转化。具有抗氨苄西林功能的pUC19的Ampr适当稀释所有转换后的受体细胞，在含有氨苄西林的平板培养基中培养，只有转化体存活，而未转换的受体细胞因没有氨苄西林抵抗力而死亡。试剂1.1，E.coli DH5受体细菌：R-，M-，AmpsPuc 19质粒3.5LB徽章4.100g/ml氨苄西林含氨苄西林的LB平板徽章6.TSS将10%PEG8 000、5%DMSO、20mmol/L MgSO4分别溶解在100ml LB培养液中，经过除菌过程。1磅，含20mmol/L葡萄糖设备1.恒温共享器2.电热恒温培养基灭菌操作超级清洁表4.电热恒温水浴箱紫外分光光度计6.离心机塑料离心管8.吸管程序1.大肠杆菌受体细胞的制备(1)在新激活的E.coli DH5细菌板中选择单个群体，接种35mlLB液体培养基，在37 到原木生长器官之间振动12小时左右进行培养。在5ml LB液体培养基上接种50l，在37 振动12h。培养液开始混浊，就停止培养。(3)在1个1.5毫升塑料离心管中加入1ml细菌，丢弃12，000rpm离心2分钟沉淀细菌。(4)将细胞挂回100l TSS缓冲液。2.细胞转基因(1)在上述细胞悬浮液中添加pUC19质粒DNA (50ng以下)。此管是转换实验组。其他管道通过单击表继续N0 .质粒DNA/l(pUC19)受体细胞/l无菌水/l1TSS/l样品2100对比度11002对比22100(2)轻轻摇动每个样品，放在冰上10分钟。(3)在37 振动培养含20mmol/L葡萄糖的0.9ml TSS溶液1小时。抛弃5000r/min离心5min，900l，均匀混合沉淀物。(4)在含有100g/ml氨苄西林的LB平板培养基上铺上
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