免疫血液学红细胞血小板配血试验.ppt

,免疫血液学,-红细胞血小板输血前交叉配血试验,一、人类白细胞抗原,人类白细胞抗原代表个体特异性与移植排斥有关的抗原称为组织相容性抗原或移植抗原-MHS编码MHS的基因组称为主要组织相容性复合物(MHC)人类的MHC是首先在白细胞上发现的，称为人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen，HLA),HLA的研究历史,最早发现人类白细胞抗原者为Dausset-1954年HLA不仅仅是白细胞特异性同种抗原。它是分布广泛的组织抗原。,HLA的分型命名,血清学分型命名具有临床意义的HLA基因有A、B、C、DR、DQ、DP等位点(Loci)，每个位点又有若干等位基因，这些基因的产物便是HLA抗原。临床意义比较大的HLA-A、B、C称为类抗原HLA-DR、DQ、DP称为类抗原。,HLA的遗传,单体型遗传存在基因重组多态性现象连锁不平衡,HLA抗体及抗体检测,临床上HLA抗体多由妊娠、输血或器官移植等免疫产生,HLA在医学中的应用,一、HLA与输血HLA与非溶血性输血反应HLA与血小板输注二、HLA与器官移植(一)肾移植(二)骨髓移植三、HLA与亲子鉴定,二、血小板血型,一类是与其他细胞表面或组织共有的抗原，称血小板相关抗原另一类为血小板特异性抗原,血小板血型,相关抗原：主要与红细胞的ABO血型系统以及人类白细胞抗原(HLA)有关特异性抗原：由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板独特的遗传多态性，在其他细胞和组织上不能发现,血小板血型,血小板表面存在红细胞ABO系统的A抗原和B抗原,可能是从血浆中吸附上的。是否还存在其他红细胞血型抗原尚在探讨之中在我国，通常进行ABO同型血小板输血,配合性血小板输注,ABO同型血小板抗体的筛选交叉配合试验：确保供受体的血小板型和HLA型的配合,血小板血型,血小板特异性抗原具有独特的型特异性，并构成血小板膜结构中的一部分血小板特异性抗原有6个血型系统24个抗原，正式命名为HPA-1、HPA-2、HPA-3、HPA-4、HPA-5、HPA-15,血小板血型的临床意义,一.血小板输注无效性(PTR)二.输血后紫癜(PTP)三.新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAITP)四.血小板的自身免疫作用-特发性血小板减少性紫癜(简称ITP),血小板同种抗体与输血,1.ABO血型的选择一般需要做主侧或次侧的交叉配血，最好输注ABO血型配合的血小板2Rh血型的选择D阴性的患者，最好要避免用D阳性献血者的浓缩血小板。对育龄妇女可以注射Rh免疫球蛋白,三、输血前免疫血液学检查,目的:供者与患者的血液,输血前免疫血液学检查,内容：患者的病史、标本的核对及处理供受双方ABO、Rh血型鉴定不规则抗体的筛选和鉴定交叉配血试验报告和发血,标本,一、标本采集二、红细胞悬液的配制三、标本的保存,标本,一、标本采集1红细胞标本-ACD或CPD、(Na2-EDTA)抗凝静脉血少数患者有一种自身抗体-不宜用抗凝血液作为红细胞抗原标本,2血清标本一般实验避免使用血浆配血试验用血清不超过72小时,二、红细胞悬液的配制1、红细胞悬液常用浓度有2、5和102、2的悬液一般用于滴定抗体效价，5的悬液常用于血型鉴定和交叉配血试验，10的悬液则用于测定抗体的亲合力。,三、标本的保存1血清标本不稀释的血清标本如加有防腐剂可在4保存数月,在-20以下可保存数年如用生理盐水稀释的血清只限当天使用2红细胞标本一般试验用的凝血标本要在5天之内使用，以不溶血为准。如用保存液可保存3周用盐水配制的红细胞悬液只能在当天使用,供受双方ABO、Rh血型鉴定,ABO血型正反定型Rh血型鉴定,试管法,玻片法,抗A、抗B以外的所有抗体统称为不规则抗体。常见于多次输血的人群,不规则抗体的筛选和鉴定,不规则抗体的筛选和鉴定,患者血清+试剂筛选红细胞盐水介质聚凝胺介质（最为常用）抗人球蛋白介质（最为常用敏感）酶介质法,交叉配血试验,受者血清+供者红细胞受者红细胞+供者血清方法,主侧,次侧,盐水介质聚凝胺介质抗人球蛋白介质酶介质法,红细胞抗原抗体反应过程,抗原抗体的靠近：红细胞抗原位点带负电荷，抗体Fab端带正电（Kell系统抗原带正电荷）抗原抗体的结合：静电引力、氢键、疏水键及范德华力,影响红细胞抗原抗体反应的因素,离子强度：反应液中的电解质会增加溶液的介电常数，减弱抗原抗体间的静电作用。降低离子强度可以显著增加抗原抗体结合速率。如:离子强度由0.17M降到0.03M时，抗D和D阳性红细胞的开始结合速率增加1000倍。,红细胞表面电荷及其相互之间的距离,低离子强度作用原理,当溶液中缺少离子时，抗原抗体之间的静电作用力强当溶液中离子增多时，抗原抗体之间的静电作用力弱,聚凝胺技术,（1）低离子聚凝胺交叉配血技术,原理：聚凝胺（Polybrene），一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果使抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。,1红细胞间有一定间距,2加入聚凝胺后，可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异性凝集,3加入枸橼酸钠，可以中和聚凝胺,4红细胞的非特异性凝集消失,聚凝胺交叉配血技术示意图1,聚凝胺,枸橼酸钠,1红细胞上已有不完全抗体致敏,2加入聚凝胺后，缩短红细胞之间的距离，让不完全抗体可以同时与两个红细胞结合使其特异性凝集,3加入枸橼酸钠中和聚凝胺,4由于不完全抗体的结合，红细胞的特异性凝集不消失,聚凝胺交叉配血技术示意图2,聚凝胺,枸橼酸钠,不完全抗体,试验分步原理,血清,红细胞悬液,加入LIM,混合液,试验分步原理,Polybrene分子连接到红细胞上,加入Polybrene,试验分步原理,离心,Polybrene拉近红细胞间的距离并造成凝集,1个IgG分子同时连接两个红细胞,试验分步原理,加入重悬液减弱了Polybrene的作用,加重悬液,试验分步原理,已被血型抗体致敏的红细胞不会散开,阳性结果,试验分步原理,未被血型抗体致敏的红细胞很快散开,阴性结果,注意事项,按比例加样致敏时间观察非特异性凝集观察结果关于冷凝集,聚凝胺方法的特点,灵敏：灵敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。速度快：实验时间5分钟左右。准确：准确度高于酶试验。不适合于Kell系统抗体的检测，但黄种人群中Kell系统抗体极罕见。操作要求较高,（2）微柱凝胶技术,微柱凝胶技术,凝胶技术的原理,凝胶技术的原理：,A、反应室：下端底孔很小，液体在孵育过程中不会流入下方微柱中。B、试剂或盐水层：红细胞在离心力作用下穿越该层，红细胞与反应室中的血清分离并与该层液体中的试剂反应。C、粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂或盐水层”相同。,1）敏感：在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。2）结果可保存凝胶试验的结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。3）操作技术要求较低：凝胶试验的操作主要是简单的加样和判读，孵育、离心过程都有专门的设备。其中能被人为改变的因素较少。4)无需洗涤的抗球蛋白试验：,优点：,缺点：,凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。高度敏感有时也会造成不便：有报导应用凝胶试验后，1/300的库血直抗阳性。,2不完全抗体可以结合在红细胞表面,但是不能和两个红细胞同时结合（致敏）。,3加入抗人球蛋白,（3）抗人球蛋白交叉配血法示意图,1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体),2.加入供者血小板,3.试剂红细胞和血小板特异性结合,4.加入受者的血清,如有抗血小板抗体,则和血小板发生特异性结合,5.凝胶柱中的抗人球蛋白捕获抗血小板抗体,导致试剂红细胞凝集。,（4）血小板配血实验原理示意图（阳性）,1.试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体),2.加入供者血小板,3.试剂红细胞和血小板特异性结合,4.加入受者的血清,如血清中无抗血小板抗体,则凝胶柱中的抗人球蛋白不发生特异性结合，试剂红细胞仍呈单个分布。,血小板配血实验原理示意图（阴性反应）,发血程序（常规和紧急情况）,1.常规情况下发血的一般程序(1)临床申请(2)血液新鲜程度的选择(大量用血和新生儿)(3)血型的选择(ABO、Rh、新生儿换血、不规则抗体筛检)(4)交叉配血(5)发血，做好记录,发血程序（常规和紧急情况）,2.紧急情况下发血的一般程序(1)快速检血型，选ABO、Rh同型血(2)标记