器官移植和HLA配型

临床免疫学检测，吉林医药学院检测学院，器官移植和HLA分型检测技术，MHC，主要组织相容性复合体，人白细胞抗原，humanleukocyteantigen，HLA，/HLA复合体，/MHC分子，/MHC抗原， HLA的结构HLA-ii系分子，HLA-I系分子，公元4世纪罗马教会，自我移植，同种同基因移植，同种异基因移植，异种移植，移植物抗原刺激接受者的免疫系统/接受者组织抗原刺激移植物中免疫细胞诱发的免疫应答有移植排斥反应，同种异型移植排斥反应，第1节MHC基因和遗传特征(构成MHC基因MHC基因特征MHC基因的意义，一、MHC基因的构成，(一)定位第6号染色体短臂(6p21.31 )全长3600kb，共计224基因座，128表达产物。 (二)基因区经典类基因： b、c、a部位经典类基因： DP、DQ、DR部位：I类基因区，HLA复合体3600kb长224基因座，ii类基因区，ACB，DRDQDP，MHC-ii类分子，MHC-I类分子，二，二MHC是共显性表达，、人中所有基因座等位基因都是相同的概率： 12623823812459385650611019，人中MHC抗原是相同的概率： 69246210281109，(二)单体型和连锁不均衡， 含义：器官移植选择捐献者顺序自身，卵双胞胎，兄弟姐妹，父母，亲戚，无关，父母和孩子相同的概率：父母和孩子相同的概率：孩子之间相同的概率：孩子之间不同的概率：0100%P%，1 .单体型第二节HLA和器官移植，三种HLA分子，、次组织相容性抗原ABO血型抗原系统的其他组织特异性抗原，主要组织相容性抗原、决定移植“成功”的抗原，一、器官移植的类型(1)自体移植(autograft )皮肤、骨髓、软骨和骨(2) 同种同基因移植(syngraft)(3)同种异基因移植(allograft )同种异基因移植(4)异种移植(xenograft )，一方面，同种异异型排斥反应的识别机制受体对t细胞供体的MHC分子进行直接和间接识别。 (1)直接识别机制：直接识别，接受者t细胞，接受者t细胞直接识别的目标结构，同种异型抗原的直接识别及其效果，(2)间接识别接受者t细胞接受接受接受者APC加工处理的供应者MHC分子在急性排斥反应中、晚期及慢性排斥反应中发挥重要作用。 识别方式，间接识别，同种异型抗原的间接识别，二，同种异型移植排斥反应的类型和效果机制，(一)根据宿主抗移植物反应(hostversusgraftreaction) HVGR )反应的发生时间和病理强度，1，超急性排斥反应(术后到数小时) 2，急性排斥反应3、慢性排斥反应(术后几个月到几年)和超急性排斥反应的示意图；(2)移植物的抗宿主反应(graftversushostreaction，GVHR )可分为更严重的排斥反应的原因；(2)移植物中成熟的t细胞多；(3)受体具有免疫功能三、预防和治疗同种异体移植排斥反应，(一)寻求适合受体MHC的供体组织和器官是目前最有效的方法。 1、ABO血型抗原相容性2、HLA抗原相容性提供者和受试者HLA-A、b吻合的部位越多生存率越高根据上述，HLA-DR、DQ尽可能匹配HLA-DR类型对生存率有很大影响。(二)免疫抑制药1、抑制t细胞的药物环孢素A(CsA )、FK-506、Rapamycin2、脱氧胍等抗生素类的t细胞的生长周期3、激素4、可溶性CK受体、抗CK抗体和抗粘着分子抗体，阻断协同刺激信号，阻止t细胞的功能不诱导特异性免疫抑制剂对移植抗原的毒性副作用(致死性感染和肿瘤)的理想方法是诱导特异性耐药性。 新方案：诱导凋亡诱导t细胞无应答(anergy )中，包括输入可溶性CTLA-4和CD40L-CD40、CD2-CD58等信息传递阻断。 第三节应用HLA分型检测技术、分子生物学分型、血清分型技术、细胞分型技术、20世纪60年代、20世纪80年代、20世纪70年代、一、血清分型技术、1 .原理、HLA特异性已知的分型血清和应测定的淋巴细胞反应，通过补体依赖细胞毒性实验检测HLA抗原特异性。 典型技术：定型板法(微量细胞毒实验)、反应、结果测定、1 .染料拒绝法、台望蓝、伊红、碘化吡啶7-AAD、2 .流式细胞术、染料拒绝法的判定标准、2 .血清单位型可检测抗原(SD抗原)、HLA-系分子3360、HLA - DR、DQ(B细胞为靶细胞)3.方法学评价、操作简便、节约试剂、结果可靠、不需要再现性好的特别设备，时间长的批次抗血清结果经常不同，优点、缺点、二、细胞单位型技术(LD抗原)、一.原理、混合淋巴细胞培养， 细胞增殖检测(mixedlymphocyteculture，MLC )，单向MLC双向MLC，阴性分型法，阳性分型法1 .单向MLC，刺激细胞： HLA型分型细胞(预处理，失去增殖能力)反应细胞：受试者外周血单核细胞(具有增殖能力)，淋巴球形转3H-TdR混入法MTT还原法，(1)阴性分型法，刺激细胞，HLA-DP1，受体者t淋巴细胞，增殖弱HLA-DP1非HLA-DP1增殖强，同型结子细胞仅表达HLA-DP1，照射处理，(2)阳性分型法，t敏化细胞，非除了HLA-DP1增殖强、刺激细胞HLA-DP1、DP抗原以外，其他HLA抗原相同，照射处理是2 .双向MLC、基因型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养的情况下，由于两者HLA不同，所以通过相互刺激可以刺激对方三、分子生物学分类技术，(一)基本技术，一.限制性片段多态性分析(restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP )，2.PCR/SSP3.PCR-SSCP分类法4 .序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应(PCR-secrentesespecificoligonucletide，PCR-SSO )，5 .基于序列的HLA分类法(二)集成技术，(三) PCR-SSCP分型法，原理：对ssDNA进行无改性剂的聚丙烯酰胺凝胶电泳，可形成序列不同的空间阵列，导致电泳迁移率不同，识别单一碱基的差异，检测DNA多态性和突变(单链非变性电泳迁移分析)，病例介绍了链球群感染后肾炎、肾功能衰竭后肾脏移植的一例。 男，14岁。 初诊的3个月前，曾因感冒发烧。 第一次就诊的原因是：头痛，无力，眼皮浮肿。 实验室检查：蛋白尿，尿红细胞阳性。 抗炎治疗一周，稍好一点，回到学校，正常饮食。 2月以后，恶心、乏力感、眼睑浮肿加重，24小时尿量减少，变成蛋白管型。 住院治疗2个月，肾功能衰竭加重，每周透析3至4次。 活检中发现肾小球体内CIC沉淀，抗人IgA、IgG阳性。 建议：申请肾移植手术。 亲属在自主制作HLA的合身性的同时，向无关的人们申请寻找捐献者肾。 半年后检查分配给适当的供体肾的身体，满足手术要求，进行肾移植手术。 术后服用临床观察和移植排斥抑制药，补充EPO。 定期去医院测定血药浓度，测定免疫功能。(移植后8年后生存状态良好，但长期服用抗移植拒绝药。 病例介绍了连锁细胞群感染后肾炎、肾功能衰竭后肾脏移植的一例。 肾移植前选择提供者的检测项目：传染性疾病病原学检测ABO血型合身性HLA符合双方要求选择淋巴细胞混合培养阴性肾源的原则： ABO血型完全相同者优先，选择最佳HLA合身性提供者器官，提供者没有传染性疾病。 移植后的临床观察：1.T细胞总数、CD4/CD8的比例、IL-2及其受体的测定、排斥反应的发生和免疫抑制剂治疗效果的评价2 .根据需要进行肾组织活检3 .测定血中浓度，指导合理用药，减少肝脏、肾脏毒性和免疫抑制。 1.ABO血型抗原一致，2.HLA合身性主要是HLA-DR，a，B3 .混合淋巴细胞反应：阴性4 .受体血清细胞毒性实验：阴性受体血清供体细胞，移植前免疫学检查，HLA匹配和移植排斥反应，生存率：3位6基因一致时，移植肾的10年生存率4基因为45%，3基因在40% 1不匹配时为33%，HLA拟合有助于减少移植物的同种异型抗原性，提高移植物的长期生存率，HLA-A、b、DR拟合有助于肾脏移植后10年生存率，6基因5基因4基因3基因不匹配，3种二次组织相容性抗原ABO血型抗原系统其他组织特异性抗原，主要组织相容性抗原