微生物培养技术ppt课件

.特集的微生物培养技术、微生物、非细胞生物：病毒、原核生物：细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、真核生物：真菌(酵母菌、霉菌)、菌落、1、概念：单一或少数微生物在适当的固体培养基表面或内部进行一定程度的生长、繁殖，具有肉眼可见的形态结构2、菌落是鉴定微生物的重要依据：不同微生物在特定培养基上生长的菌落一般具有稳定的特征，如菌落的大小、形状、边缘特征、隆起程度、颜色等。 细菌菌落、细菌菌落特征因种类而异，图为酵母菌电子显微镜下的形态结构，真菌：酵母菌和霉菌、青霉、一、微生物分离和纯培养，(3个技术的一个案例)，(1)培养基制备技术，(2)无菌技术，(3)接种技术，案例：大肠菌的分离和纯培养，(1)无菌技术，1 对实验操作的空间、操作者的服装和手进行清洁和消毒对微生物培养使用的器具、接种器具、培养基等进行灭菌实验操作时，灭菌处理的材料器具请不要与周围的物品接触。2，消毒，(1)定义：采用比较温和的物理或化学方法，只将物体表面或内部的一部分杀死对人体有害的微生物(不含孢子和孢子)，a，煮沸消毒法：100下煮沸5-6分钟，日常生活中常用的b，巴氏消毒法： 70-75下30分钟c、化学药剂消毒法：包括用酒精进行皮肤消毒的氯气消毒水源d、放射线消毒法，如紫外线、(2)消毒方法：(1)使用强烈的理化因素杀死物体内外的微生物，包括芽胞和孢子。 2、灭菌、(2)灭菌方法：a、燃烧灭菌，方法：用酒精灯火焰充分燃烧层(温度最高)直接燃烧(迅速彻底)，适用范围：接种环、接种针、金属器具(接种工具)试验管口或瓶口(接种中容易被污染的部位)，c、湿热灭菌方法：高压蒸汽灭菌P8 适用范围：吸管、培养皿(玻璃餐具)、金属器具(能经受高温，保持干燥的东西)，1，培养基定义：(教科书第9页)，2，营养构成：环境条件： pH，氧，二氧化碳，渗透压等，(2)培养基调制技术，基本营养成分：水，无机盐，碳源，氮源等固体培养基能在菌种分离、菌落鉴定等半固体培养基中观察微生物的运动液体培养基常用于发酵工业。 (1)按物理状态分类：固体培养基和液体培养基，半固体培养基。 3、培养基的分类、固体培养基、平板培养基(教科书第9页)、斜面培养基、固体培养基中没有凝固剂，例如琼脂、半固体培养基、没有运动，半固体培养基中也需要添加凝固剂琼脂，但添加量比固体培养基少。 (2)不同功能：培养基的选择和培养基的鉴定，加入青霉素的培养基：抑制细菌和放线菌的生长，分离酵母菌、霉菌等真菌。 不加氮的无氮培养基：分离固氮菌，定义(教科书第18页)，例如加入了高浓度食盐的培养基：分离金黄色葡萄球菌，鉴定培养基，根据微生物的代谢特性向培养基中加入某种指示剂或化学药品来调制，鉴定不同种类的微生物。 例如，在培养基中加入伊红和美蓝，就能鉴定大肠杆菌。 有大肠菌时，其代谢产物与伊红和美蓝结合，使菌落呈蓝紫色，具有金属光泽。(教科书第15页)，由于混合了化学成分已知的化学物质，成分明确，分类、鉴定等合成培养基的主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其他辅助物质。 合成培养基：天然培养基：(3)成分区分：称量合成培养基和天然培养基(P9，由化学成分不明确的天然物质混合而成，例如血清、组织提取液等) :正确地称量各成分。 牛肉膏比较粘，用玻璃棒捡起来，放在称量纸上就能称量。 牛肉膏和胨容易吸收湿气，所以称量时动作要快，计量后要立即盖上盖子。 由4 .培养基的制备顺序(10页)、(1).牛肉膏的胨培养基配合比例，计算出制备100mL培养基时各成分的用量。 (以牛肉膏的胨固体培养基为例)、(2) .溶解：加水加热，溶解牛肉膏，与称量纸一起在烧杯中加入少量水，加热。 牛肉膏溶解与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。 加入胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌溶解；加入琼脂；用蒸馏水定容至100mL。 为了防止烧杯在琼脂膏底部破裂，整个过程都用玻璃棒搅拌。 调节(3).ph，(4) .分注、绷带，(5) .灭菌，(6)斜面p1或倒平板p13，放置斜面-斜面培养基(P1 )将试管冷却到50左右，将试验管口部枕在高度约1cm的木棒或其他适当高度的物体上自然冷却，并对斜面的长度进行试验倒平板-平板培养基(P13 )，在火焰旁边右手拿着水壶，左手拔棉塞右手拿着水壶，为了使水壶的瓶口马上通过火焰左手在培养皿中空出间隙，右手把培养基放入培养皿中，马上盖上皿盖。 把平板倒过来放置，直到平板冷却凝固为止。 平板凝结后翻倒的原因：平板凝结后，盘子上水滴凝结，凝固了的培养基表面的湿度也高，平板翻倒了，能使培养基表面的水分更好地挥发，能防止盘子上的水滴落到培养基上被污染。 (三)接种技术，定义了：在无菌条件下将微生物进入培养基的操作过程。 3 .平板培养基的接种方法，平板划线法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，2 .斜面培养基的接种方法，目的：菌种的移动，扩大培养和保存，目的：细菌等微生物的培养，分离，斜面培养基的接种方法，接种准备，酒精灯的点火，斜面培养基的采集，菌种试管的采集，燃烧，迅速完全灭菌试验管口通过火焰杀23次试验管口的微生物，冷却接种环后采集菌种，不切培养基表面，在37下培养24小时，在平板培养基上接种的方法，1、平板刻划法，将混合的微生物或同一微生物集团中的不同细胞用接种环用划分线稀释到平板培养基表面，形成许多独立的单一接种准备，平板划线的操作，、平板划线的点，操作的第一阶段和每次划线前烧接种环的原因， a .操作的第一阶段的燃烧接种环是为了避免可能存在于接种环中的微生物污染培养物. b .刻划前烧接种环是为了杀死上次刻划结束后接种环中残留的菌种，在下一次刻划时接种环上的菌种在上次刻划的末端即使划线作业结束，也必须烧灼接种环的原因，划线结束后烧灼接种环会立即杀死残留在接种环中的菌种，防止细菌被环境和操作者污染。 灼烧接种环后，冷却后划线的原因是接种环的温度过高，不要杀死菌种。在第2次以后的刻划操作中，总是从上次刻划的末端开始刻划的原因，刻划后，线的末端的细菌数比线的开头少，每次从上次刻划的末端开始可以逐渐减少细菌数，最终得到单一细菌繁殖的菌落2、稀释涂布平板法，将菌液用一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布在琼脂固体培养基表面进行培养。 在稀释度足够高的菌液中，聚集的微生物分散在单一细胞中，能在培养基表面形成单一菌落，这就是单纯的培养物。 系列稀释操作，70%的醇，涂层平板操作工序，将菌液滴滴到培养基表面，1，微生物实验室培养的基本操作顺序，(1)器具的灭菌，(2)培养基的调制，(3)培养基的灭菌，(4)逆平板，(5)微生物接种，(6)在恒温槽中培养，(7)菌种的保存，(4) (1)牛肉膏培养基的制备、2、大肠菌的分离和纯培养工序、(2)培养基的制备调节熔融PH的分注； 灭菌逆平板(3)接种：平板划线法稀释涂布平板法。 (4)培养：倒置，37恒温槽，12和24小时。 (5)精制培养：跌倒，37恒温槽，24小时。 (6)菌种的保存：临时、长期保存法。 菌种保存，1，暂时保存：接种于固体斜面培养基，菌落生长后，在4的冰箱中保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法-20冷冻罐保存，二，测定微生物数量的方法，一.直接计数法，最常用的是显微镜直接计数法(方法，优点，缺点，适用条件)，一，基础知识，二，间接计数法：最常用的是稀释平板计数法，稀释平板法，稀释涂布平板法稀释混合平板法1、土壤取样、土壤悬浊液的调制、分解土壤中尿素的细菌的分离和计数、2、选择性培养基的调制：唯一氮源为尿素的培养基、尿素琼脂培养基、牛肉膏琼脂培养基、2、实践实例、3、样品稀释、细菌：一般为104、105、106倍的放线菌：一般103、104、105倍的稀释液真菌：一般选择102、103、104倍的稀释液，进行4、采样和平板接种(涂布平板或混合平板)，在以尿素为唯一氮源的培养基上加入苯酚红指示剂，指示剂变红5、培养和观察：细菌：在30370C的温度下培养12d； 放线菌：在25280C的温度下培养57d真菌：在25280C的温度下培养34d。 菌落数稳定时，选择菌落数为30300的平板进行计数。 以相同的稀释度，反复计数至少3片平板，求出平均值，根据与平板对应的稀释度计算样品中的细菌数。 每克样品的菌数=(C/V)MC:在某个稀释度下在平板上生长的平均菌落数V:是涂布平板时使用的稀释液的体积m :稀释的倍数，6，细菌数，菌落数的选择：一般选择的菌落数在30300的平板上计数如果只有一个稀释倍数的平均菌落数在此范围内，则两个稀释倍数乘以平均菌落数的平均菌落数均在30300之间，则由两者的菌落总数的比率来确定。 比率小于2时，应该取两者的平均，大于2时，应该取其中的小菌落总数。注意事项，三，培养基对微生物的选择作用，基础知识，一，纤维素和纤维素酶，一，分解纤维素的微生物的分离，纤维素为多糖纤维素酶是复合酶。 (二)、筛选、一、方法：刚果红染色法、原理：刚果红(CR )可以形成纤维素和红复合体，纤维素被纤维素酶分解后不能形成红复合体，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，根据是否产生透明圈来分解纤维素分解菌、常用的刚果红染色法有两种，一种是在有菌落的培养基上复盖1mg/mL的CR溶液，1015m