DNA的粗提取和物理性状的观察（实验）.ppt

讨论2 :如何证明他们是遗传物质？ 讨论3 :如何分离细胞内的这些物质？ 讨论1 :构成生物体的遗传物质是什么？ 1、提取生物高分子的基本想法是以一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物高分子；2、生物高分子主要指蛋白质、酶和核酸；3、提取DNA的基本想法是利用DNA和RNA、蛋白质和脂质等物理化学性质的差异， 提取DNA去除其他成分的方法(1)提取DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分利用在浓度不同的NaCl溶液中溶解度不同的特征，如果选择适当的盐浓度，则DNA充分溶解，杂质沉淀，相反氯化钠的物质量浓度为2 利用这个原理，可以把DNA溶解或析出到盐溶液中，如何通过控制NaCl溶液的浓度来使DNA溶解或析出到盐溶液中呢？ (2)DNA在酒精溶液中的溶解性DNA不溶解在酒精溶液中，但细胞中的某些物质可以溶解在酒精中。 利用该原理，可以进一步分离DNA和蛋白质，(3) DNA对酶、高温和洗涤剂的耐性，蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响，很多蛋白质经不住60-80C的高温，DNA在80C以上变性虽然可以除去脂质和蛋白质，但对DNA没有影响，1、在沸腾水浴中DNA遇到二苯胺就被染成蓝色，因此二苯胺作为鉴定DNA的试剂，有(2)DNA的鉴定、2、甲基绿(绿)、(1)实验材料的选择(其中选择23种实验材料)，2、原则：选择DNA含量相对高、容易提取的生物组织。 鸡血，3，合适的材料：动物细胞容易破碎，如鸡血球液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤收集滤液即可。 (2)破碎细胞，得到含有DNA的滤液，1，动物细胞，a :蒸馏水对鸡血球来说是低渗透溶液，水分大量进入血球内，使血球膨胀放出DNA。 讨论：为什么加入蒸馏水会使鸡血细胞破裂？ 2、植物细胞植物细胞首先要用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜，:提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液，分别研究洗涤剂和食盐的作用是什么a :洗涤剂有几个研究能溶解细胞膜，有利于DNA释放的食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA溶解，研磨不充分的话，对实验结果有什么影响的具体做法。 10mL鸡血蒸馏水20ml同向搅拌尼龙布3层过滤滤液，a :研磨不充分，核内的DNA不能完全释放，提取的DNA量少，对实验结果没有影响，看不到线状沉淀物，二苯胺检定不显示蓝色等，为什么反复溶解DNA 如果能除去滤液中的杂质，a :用高盐浓度的溶液溶解DNA，用能除去不能溶解在高盐溶液中的杂质的低盐溶液析出DNA，就能除去溶解在低盐溶液中的杂质。 因此，通过反复溶解和析出DNA，可以除去与DNA溶解度不同的各种杂质，建议1、向滤液中添加NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，添加蒸馏水，将NaCl溶液浓度调整为0.14mol/L，dn讨论：方案2和方案3的原理有什么不同？ a :建议2是用蛋白酶分解杂质蛋白质，分离提取的DNA和蛋白质的方案3中，利用DNA和蛋白质的耐高温性的差异使蛋白质变性，与DNA分离，方案2、滤液中直接加入若肉粉，使其反应1015分钟提案三、将滤液放入60750C恒温水槽中保温1015分钟。 为了精制提取的DNA，需要进一步处理滤液，研究该工序得到的滤液中可能含有什么样的细胞成分a :可能含有核蛋白、多糖类、RNA等杂质， 具体的方法是：方案30mL滤液35gNaCl向同方向搅拌的DNA溶解加入蒸馏水DNA析出过滤得到过滤物溶解于DNA-NaCl溶液DNA-NaCl溶解液方案30mL滤液若肉粉(木瓜蛋白酶) 静置1015分钟DNA滤液方案3:30滤液6075处理过滤，得到DNA滤液，(4)DNA的析出和鉴定，DNA的析出使用与滤液相同体积的冷却醇溶液(体积分率95% )，静置2-3min，则在溶液中白色线状物用玻璃棒向一个方向搅拌，卷起线状物，用滤纸吸取上面的水。 1、DNA的析出、鉴定DNA时，将物质浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml放入2个试管中，一方放入DNA丝状物，分别放入二苯胺4ml的试剂。 混合均匀后，将试管放入沸水中加热5min，冷却试管后，比较两试管溶液颜色的变化，比较溶解DNA的溶液是否蓝色，2，DNA的鉴定，1，以血液为实验材料时，每100ml血液添加3g柠檬酸钠，使血液凝固2 .放入洗涤剂后，动作又轻又软。 否则，容易产生大量的泡沫，不利于下一步的操作。 加入酒精和玻璃棒搅拌的时候，动作很轻，会进行DNA分子的切断，不会使DNA分子不能形成棉状沉淀。 3、二苯胺试剂如果不在使用中，就会影响鉴定效果。 调制鸡血球液加入柠檬酸钠，静置或粉碎离心细胞，放出DNA加入蒸馏水，向同一方向快速通水过滤，去除细胞壁、细胞膜等。 溶解核内DNA在2mol/L中加入NaCl，同时向同方向慢慢搅拌DNA析出在0.14mo