DNA重组技术的基本工具(讲课)解读PPT课件

-1，还记得我们吗？氢键磷酸二酯键DNA聚合酶限制酶载体，-，2，-，3，选择3，-，4，主题1。基因工程的基本内容，基因工程的概念，1.1基因工程的基本工具，1.2基因工程的基本操作程序，基因工程的历史，1.3基因工程的应用，1.4蛋白质工程的兴起，-，5，基因工程的概念：基因工程根据人们的愿望进行了严格的设计，通过体外DNA重组和基因改造等技术赋予了生物新的遗传特性，以满足人们的需要基因工程是在DNA分子水平设计和建造的，因此也称为DNA重组技术或基因拼接技术。-，6，昵称：操作环境：原理：操作水平：结果：基因工程是根据人们的欲望进行严格的设计，通过体外DNA重组和基因改造等技术赋予生物新的遗传特性，创造更适合人们需要的新生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平设计和建造的，因此也称为DNA重组技术或基因拼接技术。基因结合技术或DNA重组技术，体外，基因重组，DNA分子水平，生物的遗传性状定向改造，确保人类需要的品种。-，7，基因工程产品，-，8，基因工程概念，1.1基因工程的基本工具，基因工程史，(了解自学)，-，9，普通棉花抗虫棉，-，10，基因工程抗虫，-，11，解决抗虫棉栽培关键阶段所需的工具是什么？，分子手术刀 限制性核酸内切酶，分子缝线 DNA科他剂，-，12，1.1，DNA重组技术的基本工具，分子手术刀-分子缝线-分子运钞车，-，14，原核生物易受自然界外来DNA的入侵，但生物在长期进化过程中形成了一套完善的防御体系，以防止外来病原体的入侵。限制性内切酶是细菌的防御工具。外来DNA入侵后，利用限制性酶切外源DNA，维持自身安全。因此，限制性酶在原核生物中主要作用是切割外源DNA，使其无力，从而保护自己。限制酶在原核生物中的作用-，15，思考和探索P7，2，为什么限制酶会切断细菌本身的DNA？包含限制性酶的细胞或DNA分子没有这种限制性酶，或者通过甲基化酶将甲基化酶转移到识别序列的碱基上，从而防止限制性酶被切割的长期进化。细菌含有某种限制性内切酶并不能阻止自己的DNA中断，但可以防止外源DNA的入侵。-，16，限制酶识别特性，中轴双侧DNA的基本反向对称重复排序(gaattccgggcttagggccc，-，17，)，限制酶切割的DNA的单股切口上附着了几个相互补充的核苷酸，这种切口称为粘性末端。，-，23，SMA ，平端平面端，中轴切开，-，24，作用：结果：1，限制性核酸内切酶3354“分子手术刀”，DNA切割可以产生多少粘性(平)端？切割两个切口以形成四个粘性(平坦)端。如果用同一种限制性内切两个不同的DNA，会发生什么？看起来你可以通过制造相同的粘性(扁平)端并粘合其端来合成重组的DNA分子。想法？-，27，goback，gaat TC.CTT AAG.gaat TC.CTT AAG.ecor ，gaat TC.CTT AAG.gaat TC.CTT AAG.混合不同来源的DNA片段，不连接同种来源的DNA片段，生物a基因片段，生物b基因片段，gaat TC.CTT AAG.gaat TC.CTT AAG.酶切，-，28，1，作用：将DNA片段结合成新的DNA，2，作用原理：催化磷酸二酯键的形成，不是氢键，2，DNA连接酶 分子缝合针怎么了？将单核苷酸连接到现有核酸片段，形成磷酸二酯键，在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，作用对象，DNA克隆，基因转租，4，DNA连接酶和DNA聚合酶比较，-，33，3，类型，e，酶能在DNA的任何部分切割DNA吗？以下可以用四种限制性内切酶形成的DNA片段： DNA连接酶连接吗？和连接形成，和连接形成，和连接形成，和连接形成，反向对称，-，35，4，DNA连接酶有连接单链DNA的能力吗？迄今发现的DNA连接酶没有连接单链DNA的能力，原因尚不清楚，也许将来会发现连接单链DNA的酶。思考和探索P7，-，36，1，载体必须具备的条件：在宿主细胞中克隆和稳定保存的能力；有1个以上的限制性酶切，与外源基因连接。有特定的标记基因，便于审查。对受体细胞无害。第三，基因进入受体细胞的载体“分子转运车”，-，37，2，常用载体：质粒、噬菌体衍生物、动植物病毒等，-38，与复制插入对象基因一起克隆，切割部位，有标记基因，分布：有很多细菌、酵母和其他生物，-，39，工具3:携带体，1，所需条件：1以上限制性酶接触，在受体细胞中自我复制或整合到受体细胞的染色体DNA中，具有特定标记基因，有助于筛选怎么了？不是。用于基因工程的载体必须满足一定的条件，为了用于基因工程操作，必须人工改造。，连接思考和探索P7，-，41，2，7形成.acgt.tgca.4和8可以连接起来形成.gaat TC.CTT AAG.3和6可以连接形成.gcgc. GCGC . CGCG .1和5形成连接.ctg目录.GAC GTC。教材P7思考和探索1，-42，1，在遗传学中，切割包含载体和目的基因的DNA片段，()同种限制酶b .两种限制酶同工酶D .两种连接酶，反馈练习：-，43，2，质粒被选择为基因载体()a，限制酶的切割是GAATTC基本序列b，质粒是基因工程唯一的转运体c，重组技术中使用的工具酶是限制酶，连接酶，载体d，载体在宿主细胞内大量复制目的基因的过程可以称为“克隆”。审查标题-，45，5，以下是两种限制酶被切割后产生的DNA片段。考试分析： GC. aa TTC.GC.cttaacog.g.CG.g，(1)其中，和是通过一种限制性内切酶形成的末端，两者都用于重组一个DNA分子的DNA连接酶通常是。(2)和是另一种限制性内切酶形成的末端，两者都用来形成重组DNA片段的连接酶通常是。反馈练习：-，46，-，47，1.1944年在艾弗里等地进行肺炎球菌(o . avery)的体外转基因实验，证明DNA是生物的遗传物质，DNA是一种生物，1958年，梅雪松和斯塔用大肠杆菌作为实验材料，利用同位素示踪技术，实验证明DNA复制是以半保存方式进行的，1957年克里克提出了建立中心定律，-，49，3.1963年，尼伦伯格和马太进行了蛋白质体外合成实验，破译了编码氨基酸的基因编码。-，50，(1)基因转移载体的发现2)工具酶的发现3)DNA合成和排序技术的发明，技术的发明，基因工程的实施成为可能，1967年罗斯和赫林斯基发现细菌质粒具有自我复制能力，具有基因转移的携带工具，1970年艾伯特-，51，4)1972年Berg (P.Berg)将DNA实现为体外重组，首先在体外进行了DNA修饰研究，第一个人类工人成功地将DNA分子重组-52，1973年boyes和Cohen将重组后的DNA转移到大肠杆菌中，相应的mRNA 1973年科学家使用质粒作为基因载体，是基因工程发展史上第一次成功的基因克隆实验，1973年科恩首次构建了“基因工程细菌”，并创立了基因工程模型。1973年被称为“基因工程元年”，科恩被称为遗传工程发展史创