植物组培快繁程序.ppt

第三章植物组织培养及快速繁殖程序，植物快速繁殖应用组织培养技术，快速繁殖著名特产，短时间内繁殖更多植物。快速繁殖是目前植物细胞组织培养中应用最广、最有效的方法之一。第一，捐赠者植物培养和提取2，外植体杀菌接种3，培养4，家畜移植5，组织培养和快速繁殖计划的准备和实施，主要内容，第一，捐赠者植物培养和提取一般是什么样的细胞组织培养技术，开始阶段包括体外移植体提取、杀菌和接种文化等基本过程。外植体的环境和外植体类型影响以后培养的效果，灭菌、接种和培养条件的选择和控制与外植体的来源和类型有关。1，外植体的来源在自然环境下生长的植物有目的地在温室控制条件下生长的植物在无菌环境下在体外培养的植物的自然环境下生长的植物，通常有微生物，或者甚至与特定微生物有寄生关系，植物会有内生菌。从这些植物中提取的外植体在培养过程中繁殖微生物，影响培养效果。在自然环境生长植物、温室控制条件下生长植物、植物、大部分情况下，应使用温室或人工气候室控制培养植物材料作为外植源，减少培养过程中微生物感染的概率。同时，在控制条件下生长的植物很容易保持培养的材料之间的一致性，增加实验的重复性，培养技术规格。必须从自然生长的植物中提取的一些多年生植物或特殊材料，应尽量避免在过于潮湿、不干净的环境中生长的植物的使用。对于培养过程中可能会污染内生菌的材料，应尽量使用生长季节生长点部位作为早期培养材料。2，捐赠者植物管理来自外部种植材料，捐赠者植物管理非常重要，这与体外培养时的污染率密切相关。在植物管理上要注意。昆虫危害蚜虫、蚜虫、稻虱等许多昆虫，是许多植物病虫害的媒介，会引起植物组织的潜在感染。从预防疾病，特别是真菌和细菌性疾病的感染中，从过敏植物的外植体中提取的污染率远高于健康植物的外植体，必要时应使用化学药品预防疾病。给湿度调节捐赠者植物浇水时，要从根部供水，不能从上层浇水。这样会形成上半身容易感染的湿度环境。尽量降低温室湿度。采访前尽量保持植物干燥。3，材料提取；材料选择培养材料应选择具有代表性的主要植物，优秀的种质或特殊的基因型。快速繁殖应在植物生长最及时的阶段进行采访，花药培养应在花粉发育为单核时进行采访。从结实、没有病虫害的植物中挑选出适当发育的器官和组织。最好使用芽，后代性状比较稳定，携带细菌较少。选定材质的大小通常在0.5-1.0厘米之间。胚胎培养或解毒小于0.5厘米。材料太大，容易污染，材料太小，难以生存。1，预处理先修剪植物材料，去除不必要的部分，将准备使用的植物材料(explants)冲洗在流动的水中20-60分钟后备用。特别是不洁的外植物，用加入洗涤剂的水冲洗10-15分钟，然后用流动的水冲洗。第二，外植灭菌和接种，第二，表面杀菌(1)工人戴杀菌工作服、口罩。进入接种室之前，用洗涤剂清洗双手，操作前用70%的酒精或消毒液搓手。(2)工作中，手和台面一般用70%的酒精或消毒液擦拭。超净工作台使用前必须用紫外线灯杀菌，然后打开风扇。(3)接种用工具(解剖刀、剪刀、镊子)可以放在70-75%的酒精中，使用时可用于火焰燃烧灭菌，冷却后使用。(4)将explants放入超净工作台上，将70-75%酒精中5-60秒，0.1%氯化汞6-10分钟或10%的漂白剂熟化10-15分钟后，用3-5号无菌水冲洗。灭菌的时候要搅拌。一般使用杀菌剂及效果，(1)吸完材料后，用一只手拿镊子，一只手拿剪刀或解剖刀，适当地剪下材料。如果刀片被切成0.5厘米正方形的小块；茎切成含有一句话的段。细茎需要剥离，例如只有l-2个幼叶的茎尖大小。在接种过程中，要经常烧杀预防接种机构，防止交叉污染。(2)解开包皮，将培养瓶入口几乎水平地拿走，以免灰尘生病。(。把瓶子放在接近主灯火焰的地方，在火上转动瓶口，在棺材外面烧了几秒钟。3，外植体接种，(3)用镊子夹切下必要的组织、细胞、器官，放入培养容器中，轻轻放入。叶子直接贴在徽章上的话，最好放1-3。种完种子后，把喷嘴在火焰中再烧了几秒钟。然后及时盖上瓶盖或盖子。注意：所有操作必须在不远离主井灯的情况下，将瓶口严格保持在操作区域内。工具必须立即灭菌，以避免交叉污染。员工操作时，不必要的对话被禁止。第三，是指培养、分离和分化、愈伤组织形成或再生植物，将分离植物材料放入培养室(有光、温度条件)进行进一步分化的过程。1，培养意义，2，培养方法，(1)固体培养法利用琼脂固化培养基培养植物材料。现在最常用的方法。这种方法设备简单，容易，但养分分布不均，生长速度不均匀，经常发生褐化中毒。(2)液体培养法利用没有添加固化剂的液体培养基培养植物材料。由于液体含氧量少，一般需要用搅拌或振动的培养液、往复式切片机或旋转切片机进行培养，这种方法通常以50 100r/min的速度定期浸泡，以确保培养基均匀，并保证氧气供应。培养阶段，第一代培养，继代培养，根培养，3，培养阶段，(1)第一代培养，目的：获得无菌材料和无性生殖线。无性生殖线：指一个外植体传代增殖，具有相同遗传物质的植物群。芽、不定芽、胚状体、原球茎等。培养基：诱导或分化培养基。徽章多CTK，IAA少。类型(根据发展方向):簇芽增殖型器官发生型胚发生型胚发生透视发生型，根，芽，胚发生，根，芽，愈伤组织，芽，根，芽，外植体，试管苗， 第一代，下一代，簇芽增殖类型，器官发生类型I，脱分化，分化，愈伤组织，芽，芽簇切割芽诱导愈伤组织，外植体大小一般为0.5厘米的圆柱形或方形块，添加敷料和天然提取物有利于诱导和保持，生长良好的愈伤组织一般为硫磺或白色或浅绿色，老化为黄色或褐色，脱分化因植物种类、长期和生理状态而有很大差异。谷类植物的脱分化更困难。精细的组织脱分化更容易。成熟的组织更难。火器脱分化更容易；茎叶困难。，诱导期，诱导期与植物种类，生理状态有关。诱导期与环境因素有关。母体在弱光下生长的外植体容易诱导，分割频率高。增加O2，快速释放二氧化碳有助于细胞分裂。添加调节剂，分裂效果好。合成代谢快。分割期，特征：快速细胞分裂，结构松散，组织不足，颜色明亮透明。分化期，特征：形成肿瘤结构的外观和内部分化；出现多种细胞。石龙瑞胚轴培养胚胎发生过程、体细胞胚发生类型、外植、愈伤组织、小孢子、自由单细胞、器官、胚胎体、试管苗、体细胞胚发生类型、双极，2。胚胎血管组织和外部植物血管组织没有解剖学联系，3 .胚胎型血管组织的分布呈独立的“y”形，4 .数量多，速度快，结构完整，幼苗出现率高，原球茎：由缩短，珠粒状，胚胎细胞组成，类似于柔软茎的器官。protocorm引用类型，1 .在第一代培养中，explants有多少条路径？正常的愈伤组织一般是什么颜色？柔道的特点是什么？要讨论的问题：目的：无根的繁荣(生产上兴旺的一方根深蒂固)。扩张方法：指数增长，可以切断茎，分离芽、胚体和原球茎。培养基：基本培养基或分化培养基，本质：增殖培养物。(2)继代培养，(3)岳母和根培养，根培养基：1/2或1/4毫秒基本培养基；CTK加或减NAA添加适当的。糖浓度1-1.5%。培养条件：提高3000-10000lx的亮度。结实的幼苗，根方法和途径，芽基50或100ppmIBA液体4-8h；在含IAA的培养基中培养4-6d。移向含有活性炭的根培养基。其他方法，如果很难生根的话，在培养基上放上滤纸腿，或者，在其他方法上生根，延长增殖培养时间，降低增殖率，减少CTK量，容易生根的植物，切下粗大的嫩枝，直接扎根在营养碗里。胚胎不生根成长。但是强壮的幼苗生根所需的只是体外培养的第一步，就像在体外培养和栽培植物一样，在生长过程中也受到多种环境因素的影响。培养条件是体外培养能否成功的关键。影响试管苗生长的主要因素是在适当的条件下，光、温度、湿度、氧气等。(4)培养条件，光，1)亮度影响外植体细胞的增殖、组织和器官分化。一般培养室的照明强度需要10005000lx。部分愈伤组织诱导在光照下具有促进作用；强光，壮苗生长；光线弱，树苗长得弱，所以路长得好。不同波长的光影响细胞的分裂和器官的分化。2)光质，白光促进天竺葵愈伤组织生长，蓝光无效。红光促进杨树愈伤组织的生长，蓝光阻碍生长。3)光照时间由植物的生物学特性决定；照明的长度是试管中花的形成的重要因素，一般最好给周期性的照明。大多数植物喜欢8-10小时的黑暗。光周期的长度因植物种类而异。胡萝卜组织培养中，随着日照长度的增加促进生长。1)大多数植物为23 32，一般控制为252。低于15或高于35对生长不利。(2)根据植物种类和外植体，最佳温度也不同。像百合20；玫瑰25-27；西红柿28 。温度，湿度，1)瓶内湿度：一般为100%，主要受培养基含水量和密封膜渗透性的影响。培养基坚硬有助于外植体接触，插入培养基，生长缓慢。膜太通风会降低瓶内湿度。湿度太低会使培养基水分大量流失，渗透性提高，影响材料对营养素的吸收，阻碍外植体的生长。湿度太高会滋生杂菌，造成很多污染。通常是70%到80%。，2)环境湿度：1)培养基适用于pH 5-6.5，一般为5.8，0.1米NaOH和HCl溶液。pH值，2) ph影响培养基的硬度。Ph 6.5培养基变硬；Ph 5.0培养基不易凝固。3)灭菌前培养基的pH值比标准高0.2-0.3个单位。气(必要条件)、1)培养瓶内氧气的适宜性与密封材料有关。可用作棉塞或特殊密封塑料。通风最好的是棉塞，但棉塞容易干燥培养基，夏天容易产生污染。2)培养基的氧适宜性与培养基的种类和培养方法有关。固体培养基可以添加到活性炭中，增加通风，有助于根部。培养液体的时候，可以考虑振动的方法，以增加通风。2)2个以上大气压影响生长，5 6个大气压的生长将完全停止，6个大气压细胞无法存活。渗透压，1)1-2大气压力促进生长。复习考试：1。继代培养是什么意思？其目的和本质是什么？组培苗的生根方法是什么？Explants是如何形成的？4，家畜移植，高温和恒温高湿，弱光无菌，1，试管苗生态环境和自然环境的差异，2，试管苗的特性，弱生长，角质层低开发的光合差异叶片气孔数，弱活性根吸收功能逆境的适应性和抵抗力差，3，试管苗家畜在几天内与文化环境条件相似。后期逐渐适应了预期的栽培条件。方法：即纯化。在自然光下不打开2-3天，而是打开1-2天。试管苗移植方法、组织培养和家畜移植常用基质、组织培养和家畜移植插头、试管苗移植方法、试管苗移植、移植方法：除去试管苗，全部将轻洗培养基(前投手)种上，然后倒入细水，进入高湿度环境(90%以上)。移植地点：日光温室塑料温室饲养室注意：1 .保持树苗水分供需平衡。2.防止细菌繁殖。3 .给出一定的温光条件。4 .注意矩阵的比例，保持适当的通风。1)保持幼苗水分供需平衡。一周内：环境高，阴影好。一周后：树苗长大后逐渐湿了，拱的两端通风。半个月后：曝光，控水，光强增加。防止细菌繁殖，防止基质高压灭菌或3h烘焙灭菌或太阳杀菌。杀菌剂，消毒剂的适当使用。移植时少损害树苗。注水中加入0.1%的元素或价值1/2毫秒的元素液回收，促进幼苗生长。3)特定温度条件，适当根温：18-20，低温度加餐热线。移植初期的弱光此后逐渐增强光，转换为自然光。保持气质通气：选择粒状气质，不多浇水。4)注意基质的比例，保持适当通风，基质比例：简：质：池(腐殖土)=1: 1: 0.5简：池(腐殖土)=1: 1，如何提高试管苗的移植成活率？1、壮苗移植比弱苗移植成活率高2，生长素(NAA)为根3，低无机盐类浓度根效果好4，活性炭对柔软茎有益5，避免阳光直射，温度25-30，湿度85%以上6，试管苗从杀菌变成菌否则试管苗很难销售，外植病；器官形成和增殖；试管小植物瓶等试管苗的生产过程都是在无菌状态下进行的，所以试管苗的生产规模可以用无菌工作台的数量来衡量。试管苗生产规模的确定，一般一个单无菌工作台每年可生产10万至15万株树苗，1.2m0.6m2.0m 6层培养基每年可繁殖1万5至2万株试管苗。每年1