荧光免疫层析技术的原理与进展ppt课件

，荧光免疫色谱的原理和进展，介绍：罗敏，1，荧光免疫色谱的基本原理色谱的原理，混合物中各成分的物理特性差异(如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分布系数等)断层扫描系统由固定相和流动相组成。的(MobilePhase)。2，固定相是固体物质或固体物质的固定成分。流动相是可以流动的物质，如水或各种溶剂。色谱工艺：要分离的混合物通过流动相的固定相时，由于混合物各成分的物理和化学性质的差异，与固定相的相互作用弱的成分在流动相移动时受阻的效果小，前进的速度快。与固定相交互作用强的成分前进的速度慢。实现混合物中各成分的分离。3、免疫层析免疫层析是基于断层扫描和抗原-1抗体特异性免疫反应的新型免疫检测技术。4、免疫层析将检测线和控制线固定的杆状纤维色谱材料作为固定相，检测液通过流动相毛细管作用在色谱上移动检测对象物质。被测定的物质在t线引起特定的免疫反应。自由物质在c线引起免疫反应。免疫层析的基本原理图，5，荧光，荧光物质吸收产生光的能量，电子从基态转移到激发态，回到基态后以发射光的形式释放能量，这就叫做荧光。发射光谱和激发光谱，发射光谱是指固定的激发波长，在不同波长记录的样品发出荧光的强度。这里的光谱是指固定地检测发射波长，用不同波长的激发光记录样本的相应荧光发射强度。6，荧光效率，定义：荧光物质分子将光能转换为荧光的比率计算公式：荧光效率=，荧光寿命，荧光物质刺激后产生的荧光在一定程度上减少所需的时间定义。各种荧光物质的荧光寿命不同。7，荧光猝灭，定义：荧光物质，由特定的物理和化学因素释放荧光减弱或衰退荧光猝灭。荧光猝灭因素：紫外线照射、高温、部分硝基化合物、重氮化合物等。8，免疫层析将检测线和控制线固定的杆状纤维色谱材料作为固定床，检测液通过移动床通过毛细管作用在色谱上移动检测对象物质。被测定的物质在t线引起特定的免疫反应。自由物质在c线引起免疫反应。免疫层析的基本原理图，9，10，竞争法，被测试物质的特定抗原和t(检测线)行的同种抗原是与标记性抗体竞争结合的过程。11，竞争法，12，三明治法，将被测试物质的特定抗体(抗原)与t线抗原a(抗原a)和荧光标记抗原(抗体)的特异性结合起来，形成t线中抗体a抗原b形式的三明治结构的过程。13，双抗体夹心法，14，双抗原夹心反应模式阳性检测(左)和阴性检测(右)，15，使用荧光免疫层析检测条对测定物进行定性或定量检测。16，17，由于金粒子之间的静电斥力，在水中保持比较稳定的状态，被称为稳定水溶性胶体的胶体金，18，胶体金具有明亮的颜色和高电子密度，能吸附生物分子，不影响生物分子的活动，因此可以作为免疫反应中抗原或抗体的标记位置或用于定性和定量研究的生物分子的标记物。色谱测试条表明金粒子的直径大部分为20 40 nm，为深红色。19，胶体金标记蛋白是蛋白质被动吸附在金粒子表面的过程。因为蛋白质分子在金粒子表面紧密结合，形成蛋白质层，从而切断胶体金粒子的相互接触，使胶体金保持稳定状态。20、胶体金作为标记的优点如下：几乎所有蛋白质分子都可以显示的简单过程，效率高，体积少，成本低，基本上不改变标记蛋白质的活性。稳定无毒，使用方便，保质期长。直径不同的纳米金可用于多个标记。结果判断需要普通光学仪器或直接肉眼观察。21，标记应用，22，试验怀孕纸，23，24，应用(定量)，08天津大学精密仪器及光电工程与天津进出口检验检疫局，便携式仪器开发合作。竞争法是指农药残留的定量检测，25，2镧，镧，又称稀土金属元素的镧，元素周期表中原子编号57-71的所有元素。26，2个不同的镧离子(分别是光吸收器和发射器)被掺杂到亚微米大小的陶瓷粒子(主矩阵)中，构成了产生荧光的特殊物质的类。 UCP (up-converging phospor，UCP)粒子。27，UCP粒子主要由三种成分组成：硫化氧(Y2O2S，GdO2S)、氟化物(YF3，GdF3)和硅酸盐(YSi2O5，YSi3O7)。吸收者Yb3 Er3 Sm3发射者Er3 Ho3 Tm3，28，UCP的独特优点，高灵敏度，报告UCP的灵敏度可能达到胶体金的100倍。高稳定性，UCP的发光信号不受检测环境或样品腐蚀或标记本身崩溃等影响，可以长期保管和重复。易于使用、安全、无毒，可适用于定量分析和多重分析，可在一般实验室或现场轻松应用。29，中科院将UCP试纸读数仪用于免疫活动检测，将半导体激光器用作光源，将CCD用作光接收器，步进电机移动控制条的设备，UCP应用案例，30，军事医学院将传染病，31，Vibrio cholerae-霍乱-霍乱-霍乱，32，3量子点，量子点(quantumdots，QDs)，主要是主族 (例如CdSe)， (例如InP，InAs，GaSe)，34，较大的斯托克斯位移和窄对称荧光光谱峰。用相同的激发光同时产生不同大小的量子点，从而产生不同的发射光谱，从而实现多个样品的同时检测。QDs荧光特性稳定，长期保存，多次受刺激。35，生物相容性好的物理结合化学偶联，36，量子点是新的荧光标记，目前免疫层析中需要应用相对UCP，胶体金未报告。张菊、拉威化等量子点标记免疫色谱测试条，以ractopamine的快速检测J，2009年CdSe为标记，快速定量检测ractopamine(酚胺-肾上腺素作用剂)。华君、福陶等，CdTe/ZnSe核壳量子点免疫色谱测试条测试clenbuterol研究，2010，clenbuterol检测-，也称为“Clenbuterol”，在免疫色谱中使用有机纳米粒子的荧光发射对依赖于粒子本身的化学发光组中无机纳米粒子的波长没有可调节的大小效应。38，5纳米磁性粒子、纳米磁性粒子(MNs)也称为超顺子粒子，它结合了磁性粒子和纳米材料的优点，具有小粒子大小、超顺磁性和比表面积等特性。39，典型的是磁性材料氧化铁。在表面引入活性基，将结合反应与酶、抗体等生物分子结合，形成生物标记。超顺磁性。40，6碳纳米管、碳纳米管(CNTs)的结构可以看作是石墨的六角形网格结构稍微弯曲而形成的空间拓扑。41、CNTs作为生物分子标记的原理与胶体金相似，明显的黑色在定性或准定量检测中肉眼可见。42、目前，