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文档简介

大肠杆菌的生长曲线由：名教师孙运军、名研究生何浩和张晨的左星黄同龙测量。目标要求：1。通过光密度测量了解大肠杆菌的生长规律，并绘制生长曲线。2.了解光电比浊法测量细菌数量的原理。基本原理是将一定量的细菌接种到恒定体积的液体培养基中。在适当的文化条件下，人口会有规律地增长。以培养时间为横坐标，细胞数或生长率的对数为纵坐标绘制的曲线称为细菌生长曲线。曲线包括四个阶段：滞后期、指数期、稳定期和下降期。本实验用分光光度计测量不同培养时间的细菌悬液的光密度，并绘制生长曲线。光吸收的基本定律：朗伯-比尔定律A=kbc(k是摩尔吸收系数，B是液体层的厚度，C是溶液的浓度)。朗伯-比尔定律的含义是，当一束平行的单色光通过均匀的非散射溶液时，其吸光度与溶液浓度和液体层厚度的乘积成正比。硫酸亚铁溶液在650纳米处的吸光曲线，大肠杆菌悬液的吸光规律：实验表明，OD600在0.10.65范围内的大肠杆菌悬液基本符合朗伯-比尔定律，即吸光度与菌液浓度成正比。大肠杆菌梯度稀释的吸光曲线。2.培养基：LB液体培养基。3.仪器和耗材：722分光光度计、恒温振荡器、无菌试管、无菌吸管。操作步骤1，准备100毫升LB液体培养基，分装1个试管(5ml/管)，将剩余的培养基装入250毫升三角瓶中，在121灭菌20分钟。2.取11个无菌大试管，分别用标记物标记培养时间，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20小时。3.将2.5毫升大肠杆菌培养液(培养12小时)转移到装有5毫升无菌吸管的液体培养基的三角瓶中。混合均匀后，分别取5 mL混合溶液，放入11个有标签的无菌大试管中。4.将接种后的试管放入37(200转/分)的摇床中振荡培养，在相应时间取出试管并放入冰箱中，最后一起测量OD600值。5.在光密度测量期间，未接种的LB液体培养基被用作空白对照，并且测量从先前取出的培养液中顺序进行。用LB液体培养基稀释高细胞密度的培养液，然后测量，使OD600值在0.1-0.65范围内。不同培养时间的菌液，注意事项：选择规格一致的试管；每个试管的液体体积应相同(5ml/管)；将混合细菌悬液加入试管后，应快速读取外径值。保护比色皿的透明表面免受磨损和手指的直接接触。未测试样品时，分光光度计应及时打开盖子。实验结果，1。将测得的OD600值填入下表。绘制大肠杆菌生长曲线，OD600值，培养时间/小时。
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