真菌(1-3)-β-D葡聚糖

附件是检测1种真菌(1-3)-D葡聚糖的标准操作程序1.目的规范真菌(1-3)-D葡聚糖检测的操作程序，确保结果的准确性。2.原则在实验条件下，来源于某些真菌细胞壁的(1-3)-D葡聚糖可以特异性激活试剂盒试剂的酶促凝集系统，从而改变反应溶液的透光率。通过使用(1-3)- -D葡聚糖标准建立-D葡聚糖的生物效应和透光率变化之间关系的标准曲线，可以定量测定人血液中的(1-3)- -D葡聚糖含量。试剂湛江安多斯生物有限公司真菌(1-3)-D葡聚糖检测试剂盒套件包装规格：20个/箱。试剂盒组成：-g试剂冻干粉，0.25毫升/支，10支-g试剂复合溶液无色液体，0.3毫升/支，10支样品稀释瓶无色液体，0.9毫升/支，20支试剂溶液复溶后应在10分钟内使用。如果本试验中有任何剩余，剩余的试剂溶液可以冷冻并在-20以下储存一周。试剂溶液不能反复冷冻和解冻。4.检测设备：LKM动态试管检测仪。5.实验设备：250 l无热原吸头、20-200 l移液管、75试管恒温器、涡流混合器、塑料试管架、无热原真空采血管(肝素抗凝剂)。6.样本收集和检验要求6.1样本收集要求6.1.1采集过程需要无菌操作，使用指定的肝素抗凝、无菌和无-葡聚糖的血液采集容器；6.1.2早晨用药前，应空腹从常规医院的患者处采集血液，透析前应从血液透析患者处采集血液。6.2样品检验和保存要求样品应在收集后半小时内离心，并在4小时内进行测试。如果当天无法及时检测到样品，应将离心后的血浆转移到不含-葡聚糖的容器中，并在-20以下冷冻，以便在一周内使用。7.实验操作7.1试验开始前，打开LKM动态试管检测器，预热它，一段时间后发出蜂鸣声。试管检测器的温度达到37以备后用。7.2取装有本试剂盒的无热原真空采血管，取受试者静脉血1 2 ml，400 g离心10分钟；7.3取100 l富含血小板的血浆，将其加入样品稀释瓶中，在涡流混合器上轻轻混合，然后将其插入75的试管恒温器中并加热10分钟。7.4加热10分钟后，从75的试管恒温器中取出样品稀释瓶，并让其冷却至室温，即1:10稀释。发布的样品测试溶液；7.5取一个-G试剂并打开；7.6取一份-G试剂的重复溶液，打开后用移液管向-G试剂中加入0.25毫升，轻轻摇匀，澄清，得到试剂溶液备用；7.7打开检测软件，连接LKM动态试管检测仪，进入临床检查数据采集界面，点击“开始”按钮，检测软件进入待采集状态；7.8取配有本试剂盒的专用反应试管，先取100 l制备好的样品试液加入反应试管，然后加入50 l试剂溶液，每个样品试液平行于两个试管；7.9加入样品后，依次拿起试管，在涡流混合器上轻敲试管，以均匀混合试管中的溶液。然后将每个试管逐一插入LKM动态试管仪。反应开始，在37下反应持续75分钟。在反应结束前填写测试相关信息。7.10反应完成后，检测软件将自动处理数据，计算样品测试溶液中(1-3)-G葡聚糖的测量值，进入“临床检查数据报告”查看测试结果，进入“临床检查数据分析”查看反应曲线。8.假阳性因素8.1 (1-3)-D葡聚糖污染。(1-3)-D葡聚糖容易污染非试剂制造商提供的血液收集管、反应试管和吸头。8.2一些纤维素透析膜污染，如血液透析、腹膜透析等。试验前注射香菇多糖、脂肪乳等药物8.3克；8.4手术后使用纱布。9.假阴性因素9.1不敏感细菌：一些真菌，如接合细菌(毛霉、根霉)9.2定殖真菌：研究表明，定殖真菌不会导致患者血液中(1-3)-D葡聚糖的增加，即使其被严重定殖。因此，阴性G试验可以区分真菌定植或侵袭性感染。10.结果分析表1结果分析表检测结果结果分析d100.5pg毫克/毫升负面结果；如果患者的宿主因子持续72小时，将再次进行测试。100.5151.5毫克/毫升积极的结果；在6-24小时内检查并确认。宿主因素的存在表明需要药物治疗。11.反应曲线分析表2反应分析曲线真菌正态曲线真菌异常阳性曲线真菌的正常阳性曲线呈倒“S”形，曲线末端的RT值较低。真菌的异常阳性曲线呈“S”形。曲线的前部突然下降，曲线的后部变平，曲线末端的rt值更高。1.真菌异常阳性曲线通常是临床用药造成的干扰。建议消除干扰，重新测试。2.对于具有短时限(700秒)和高测量值(6000皮克/毫升)的阳性结果，应进行反应曲线分析。3.为了对患者负责，建议分析所有阳性结果的反应曲线。12.笔记12.1预热收集在进行试验之前，必须将LKM动态试管检测器预热约30分钟，使其达到37的工作温度，然后打开检测软件连接试管检测器，在样品添加反应前点击“开始”按钮，使软件进入待收集状态。12.2取样和保存可检测样品：血液、尿液、腹水等。(2)采集要求：采样过程需要无菌操作，用无热原真空采血管采集血液；(3)保存：样品应在收集后半小时内离心。如果在4小时内不使用，分离的血浆应在-20以下的冰箱中储存30天。12.3样品预处理和样品添加反应带血无热原真空采血管应在400g离心10分钟；(2)取分离后的血浆上清液的中部；(3) 75C加热需10分钟，加热后冷却至室温；(4)插管应一次插入到末端，插入后不能触摸；每个样品的平行两根试管必须插入仪器的连续两个孔中；插入管反应后可填写相关试验信息，但必须在试验结束前填写，否则数据将不会保存。13.临床意义13.1 G试验可早期快速诊断侵袭性真菌疾病(IFD)，并可用于真菌感染的早期筛查。13.2适用于检测侵袭性感染，如念珠菌属、曲霉属、尘肺、镰孢菌