标本采集包装运输与实验室检测

埃博拉出血热（EVD）标本采集、包装、运输与检测,中国疾病预防控制中心2014年12月,埃博拉出血热(Ebolahemorrhagicfever)是由埃博拉病毒(Ebolavirus)引起的一种急性传染病人主要通过接触病人或感染动物的体液、分泌物和排泄物等而感染。临床表现主要为突起发热、出血和多脏器损害，病死率可高达50%-90%本病潜伏期为221天，通常为810天2014年，在几内亚、利比里亚和塞拉利昂等西非国家发生历史上最严重的埃博拉出血热暴发疫情,埃博拉病毒简介,为指导医疗机构和疾病预防控制机构工作人员对埃博拉出血热相关标本的采集、包装、运输和检测工作，保证生物安全,培训目的,埃博拉出血热留观、疑似或确诊病例：标本采集的个人防护生物安全要求包装的要求运输的方式实验室检测方法,培训内容,中华人民共和国传染病防治法病原微生物实验室生物安全管理条例可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定卫生部人间传染的病原微生物名录国际民航组织危险物品航空安全运输技术细则中国疾病预防控制中心关于规范埃博拉出血热病例标本接收和检测结果反馈等工作的通知中疾控应急发2014322号,知识要点-国内的法律法规及管理办法,应遵守医院感染管理规范和病原微生物实验室生物安全管理条例等相关生物安全规定在标准预防的基础上，应采取避免飞沫和接触感染的预防措施,标本的采集,采样人员应该接受埃博拉病人采血规程的培训培训内容PPE的规范使用采血要求及注意事项采血时，需2名采血人员同时在场,标本的采集-人员要求,工作服一次性工作帽双层医用手套防渗透防护服(连帽，猴服)医用防护口罩(N95及以上)+护目镜或防护面屏或普通外科口罩+正压头盔工作鞋+一次性防水靴套或长筒胶靴防渗漏防护服(反穿式),标本的采集-个人防护,应提前将所有采血物品准备齐全，并配备：洗手的设施备用手套消毒液锐器盒,标本的采集-物品准备,一般发病后2周内，可在患者血标本中检测到病毒核酸和抗原，发病后310天的标本核酸和抗原的检出率高留观病例、疑似病例诊断埃博拉病毒感染应采集发病3天以后的血标本,标本的采集-采集时间,用分离胶无菌真空促凝管采集静脉血，每管3ml留观病例、疑似病例采集4管2管送指定的具有埃博拉出血热检测资质的实验室进行检测2管保存于样本采集单位或所在省级疾控中心,标本的采集-采血管种类及采血量,采集后的处理方式应用封口膜封闭管口，消毒后由协助者将病人信息填写在采血管上，放入试管架中退入潜在污染区，将采血管放入50ml离心管内离心管消毒后，放入第二层包装尽快送检如不能立即送检，则置于4下保存，填写标本采集登记表保存方式全血采用冷藏运输，血清采用冷冻运输,标本的采集,恢复期标本采集确诊病例采集恢复期血标本2份，每份2管采集时间应间隔不少于48小时，送国家疾控中心病毒病所进行埃博拉病毒相关检测，用于指导病例管理恢复期血标本，并不限定必须于出院前采集可采集发病2周后或出院(死亡)前标本,标本的采集,采取A类包装，符合UN2814要求容器或包装材料应达到国际民航组织危险物品航空安全运输技术细则（Doc9284包装说明PI602）规定的A类包装标准,标本的包装,三层包装第一层为自封袋或50ml离心管第二层为防水、防漏的安全壳容器第三层为运输包装包装要求样本应用吸水纸等包裹，固定在自封袋或离心管内在坚固、防水、防漏的第二层安全壳容器中，用吸水纸等填充物将内有标本的自封袋或离心管固定好，装入第三层包装第二层和第三次包装之间应放置冰排等制冷材料安全壳容器和外包装须与IATA危险物品条例包装制度650相符合,标本的包装,包装中的注意事项用0.5%有效氯消毒50ml离心管表面，并在潜在污染区放入第二层包装第二层包装用0.5%有效氯浸泡消毒15min后，擦拭干净带入清洁区，放入外层包装,标本的包装,样品清单填写标本说明两份，写明标本的基本信息、运送者及接收者地址等将标本说明密封在塑料袋里，用胶布分别粘贴于最外层包装的内侧和外侧标本相关信息需留档以便查验，方便实验室操作人员查对标本数量,标本的包装,收取标本由医院所在地的疾病预防控制机构到医院收取标本。标本运输之前，应按相关生物安全规定，与样本接收单位生物安全管理部门联系，办理相关手续运送日期确定后，立即将运送时间和运输方式通知接收单位，做好接收准备,标本的包装,中国疾控中心检测的标本运输流程,省市内运送埃博拉出血热标本的运输流程,生物安全要求由专人专车运送，运送人员须有相关资质，且不得少于两人申请单位对与运送人员进行埃博拉病毒相关的生物安全培训在运送过程中采取相应的防护措施运输前仔细检查容器，要符合安全要求按照规定进行标本运输前的包装和送达后的开启,标本运输的生物安全要求,省市间标本运输跨省、自治区、直辖市运输疑似病例或留观病例样本时，应当将申请材料提交至运输出发地省级卫生计生行政部门进行初审对符合要求的，省级卫生计生行政部门应当在3个工作日内出具初审意见，并将初审意见和申报材料上报卫计委审批卫计委应当自收到申报材料后3个工作日内做出是否批准的决定符合法定条件的，颁发准运证书,省市间BSL-3实验室标本运输流程,WHO、美国CDC等其他国家及地区关于标本的采集、包装和运输的文件WHO的LaboratoryGuidancefortheDiagnosisofEbolaVirusDiseaseInterimRecommendations2014.9.19英国卫生署的PHEMicrobiologyServicesVHFSampleTestingQueries2014.9美国CDC的InterimGuidanceforSpecimenCollection,Transport,Testing,andSubmissionforPersonsUnderInvestigationforEbolaVirusDiseaseintheUnitedStates2014.10.20,知识要点-国外的情况,推荐用EDTA塑料采血管采集全血，最低量4ml保存聚茴香脑硫酸钠(SPS)或柠檬酸采血管中,或促凝采血管也可以尿液标本也是可以的，但需要尽快检测死亡者或无法采血的儿童采集咽拭子,知识要点-国外的情况-标本的采集,WHO和美国CDC包装形式均与我国一致，运输高致病性病原微生物菌（毒）种或样本的容器或包装材料应当达到国际民航组织危险物品航空安全运输技术细则（Doc9284包装说明PI602）规定的A类包装标准,知识要点-国外的情况-标本的包装,WHO关于运输主要依据GuidanceonregulationsfortheTransportofInfectiousSubstances2013.1.1，如果本国没有实验室可以做检测可将标本寄到LaboratoryGuidancefortheDiagnosisofEbolaVirusDiseaseInterimRecommendations2014.9.19所写的实验室美国则按照各州的规定运输标本,知识要点-国外的情况-标本的运输,WHO发布的安全采集埃博拉出血热疑似患者血液标本,WHO发布的如何安全运输埃博拉出血热疑似患者血液标本的流程（国内运输）,检测方法1.病毒核酸检测方法（1）实时荧光定量RT-PCR法（2）一步法常规RT-PCR方法2.埃博拉病毒抗原抗体检测方法（1）埃博拉病毒抗原检测方法（双抗体夹心法ELISA、胶体金快诊）（2）埃博拉病毒IgM抗体检测（抗体捕捉法ELISA）（3）埃博拉病毒IgG抗体检测方法（间接法ELISA）,标本的检测,埃博拉病毒的实验室检测相关活动严格按照人间传染的病原微生物名录的要求，在相应的生物安全级别实验室开展病毒培养在BSL-4实验室动物感染实验在ABSL-4实验室未经培养的感染材料的操作在BSL-3实验室灭活材料的操作在BSL-2实验室按照病原微生物实验室生物安全管理条例等相关规定要求，做好生物安全工作,实验室生物安全要求,埃博拉病毒检测机构应将所有阳性和部分阴性血清标本送中国疾病预防控制中心病毒病所进行复核检测实验室检测结果应及时反馈标本送检单位，并尽快上报上级主管部门,埃博拉病毒相关感染性标本的灭活，应在BSL-3实验室级生物安全柜内进行,标本的灭活处理,（1）TRIzol（或Tr