胶体金诊断试剂的临床运用

胶体金诊断试剂的临床应用,过去的10年中，各国的诊断制剂研制人员应用胶体金技术开发出了许多种使用方便的体外诊断试剂，最早面市的早早孕（HCG）检测试剂在国内外均得到了极为广泛的应用，HCG诊断试纸条已为千百万育龄妇女带来了极大的方便。目前，该种HCG检测试剂可以方便的从药品零售店获得，其简便的操作令使用者不经任何培训即可操作并能准确的判定结果。,目前市场上有数十种利用胶体金技术的产品可以购得，涉及恶性肿瘤、病毒性感染、细菌性感染的诊断及毒品和环境污染物的快速检测。涉及胶体金技术的专利美国有100多件，国内的也有数件，如果仔细的分析这些技术，我们不难发现有些专利并无太大的使用价值，他们多数为新型实验材料面市以前的专利，因此也就很少有人问津。胶体金诊断制剂目前应用较多的为胶体金免疫层析技术，而另外一种胶体金渗滤法，目前使用的较少。,胶体金渗滤试剂,胶体金渗滤法诊断制剂前些年国外研究的较多，但终因其操作复杂未能推广使用。国内前几年也曾经掀起一股研究胶体金渗滤制剂的开发热，但均停留在实验室阶段，到目前为止，无任何厂家向国家药品监督管理局新药审评中心申请生产此类试剂，对诊断试剂生产厂家来说，该种渗滤法诊断试剂未能被接受的另一个主要的原因是，规模化生产有较大的困难，对产品质量难于精确的控制，在产品质量就是企业生命的今天，很少有企业生产此种对企业形象不利的试剂。图1为胶体金渗滤法试剂的组装模式图。,滤纸,吸水纸,图1、胶体金渗滤试剂组装,塑料板NC膜,从图1可以看出，塑料板的中央有一圆形的小孔，小孔的下面贴有孔径0.45m的硝酸纤维素膜，将小孔封闭在NC膜圆孔上，预先点状包被抗原（或抗体），另外还需质控点（可与金标抗体反应的二抗），用BSA封闭NC膜。当待检血清（或其它样品）样品加到NC膜的上面之后，样品将渗透NC膜进入吸水纸，如果待检样品中有相应的抗体（或抗原），就会被锚定在膜上；接下来加入标记胶体金的抗体，在下行渗透的过程中，与已锚定在膜上的待检物质反应而将胶体金滞留下来，呈现出红色的斑点。阳性、阴性结果判定如下。,阳性,阴性,失效,胶体金层析试剂,胶体金免疫层析技术已得到越来越广泛的应用，其原理与胶体金渗滤法基本一致，只是将原来的渗滤改为了层析。就是此项今日看来微不足道的改动，带动了定性诊断试剂的革命。许多原来必须用仪器判定的实验，采用此项技术后变的十分简便。胶体金层析技术适用于定性诊断或检测，也可做半定量测定。用胶体金层析试剂做精确的定量测定目前仍有一定的困难，即便是相应的分析仪器对显色条带能作出精确的定量分析，采用胶体金试纸法定量还是有相当大的误差。因此试剂的研制者最好不要将胶体金层析试剂定位为定量检测试剂。,下图为胶体金层析试剂的图示，与渗滤法试剂相同的是，NC膜上亦预先包被有检测抗体（或抗原）的检测线，另外还喷有一条质控线。现以检测HbsAg的试纸条为例说明其工作原理。NC膜上的检测线喷涂的为抗HbsAg单克隆抗体，质控线喷涂的为羊抗鼠IgG抗体，用BSA封闭NC膜。将N膜粘贴在塑料垫片的中央。将浸有另一种抗HbsAg单克隆抗体胶体金结合物的玻璃纤维膜粘贴在NC膜的下端，上面再覆一层样品垫。在NC膜的另一端粘上吸水纸，这样试纸条就组装完成了。,HBsAg与结合在胶体金表面上的单克隆抗体结合，在流经NC膜的时，检测线上的单克隆抗体与结合有胶体金颗粒的HbsAg反应，并停留在检测线的位置，未结合HbsAg的胶体金颗粒继续向前流动，流至质控线位置时与胶体金表面的单克隆抗体与羊抗鼠IgG反应后停留在质控线的位置，而多余的胶体金抗体结合物及待检样品将继续流向吸水纸。,以上介绍的为双抗体夹心法测抗原，如果检测线上喷涂的为抗原，也可以测定抗体，如HIVI/II、HCV、梅毒抗体胶体金层析试纸等，检测人血清中的抗体时，质控线喷涂的为可与标金用抗体反应的单克隆抗体或多克隆抗体。如标金用的为鼠抗人IgG、IgM单克隆抗体，质控线克用羊抗鼠多克隆抗体。,目前利用双抗体夹心法开发成功的胶体金快速诊断试剂有HCG、LH、AFP、CEA、PSA、HBsAg、血红素（大便潜血）、2微球蛋白等检测试剂，这些试剂均已用于临床检测，特别是HCG、LH、血红素、2微球蛋白等试剂，检验样品为尿液或粪便悬液，较以血清为试样的试剂应用的更为广泛。,有关优生优育的五项微生物感染的检测，目前国外已有相应的胶体金诊断制剂，但均未获得FDA的正式生产批文，此类微生物感染检测试剂检测线喷涂的为相应的微生物抗原或重组抗原，可检测人血清中存在的IgG或IgM类抗体。,小分子化合物胶体金检测试剂,低分子量化合物（药品、毒品、及环境中化学污染物）检测用胶体金试剂的研制不能采用上述的方法，因为用这些分子量不到1000的化合物免疫动物后大多只能得到单一位点的抗体，即便是能得到数株，之间也会存在较大的交叉反应而不能同时使用。采用免疫学的方法检测这些化合物只能使用竞争实验，竞争实验用NC膜多采用层析速度稍慢型的，胶体金结合物与NC膜之间应加合适的样品垫。,将胶体金颗粒表面标记上化合物抗体，NC膜上的检测线喷涂的为含化合物的载体蛋白质，质控线喷涂的为二抗。试样中的化合物首先与胶体金颗粒表面的抗体反应，如果试样中化合物的量超过了某一限值，胶体金表面的抗体位点将不再有剩余，当胶体金颗粒层析经过检测线时，胶体金颗粒将不会停留在该线所