DB21∕T 2555-2016 海水 苯系物的测定 吹扫捕集气相色谱-质谱分析法VIP

51 宁 省 地 方 标 准 25552016 海水 苯系物的测定 吹扫捕集/气相色谱in by 016 - 01 - 05发布 2016 - 03 - 05实施 辽宁省质量技术监督局 发 布 25552016 I 前 言 本标准按照 本标准由辽宁省海洋水产科学研究院提出。 本标准归口单位：辽宁省海洋与渔业厅。 本标准主要起草单位：辽宁省海洋水产科学研究院。 本标准主要起草人：吴金浩、张玉凤、王摆、李爱、王召会、宋伦、周遵春、韩家波、王年斌。 本标准的附录 25552016 1 海水 苯系物的测定 吹扫捕集/气相色谱 范围 本标准规定了利用吹扫捕集/气相色谱苯、乙苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯等7种苯系物的方法原理、试剂及配制、仪器和设备、样品采集与保存、测定步骤、结果计算与处理、质量保证、方法检出限、准确度和精密度。 本标准适用于海水中7种苯系物的测定，测定范围为 50.0 2000.0 ，方法检出限为7.2 12.2 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 洋监测规范 第2部分：数据处理与分析质量控制 洋监测规范 第3部分：样品采集、贮存与运输 洋监测规范 第4部分：海水分析 39质 挥发性有机物的测定 吹扫捕集/气相色谱Y/T 洋监测技术规程 第1部分：海水 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 苯系物 单环芳烃，即分子式中只含有一个苯环的芳烃。本标准中苯系物包括苯、甲苯、乙苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯等7种物质。 内标物 样品中不含有、但其物理化学性质与待测物相似的物质。在样品分析之前加入，用于测量待测物和替代物的相对响应值。内标物不应是样品中的组分。 替代物 样品中不含有、但其物理化学性质与待测物相似的物质。在样品萃取前加入，并应按照分析样品其他组分的程序进行分析，用于监测每个样品分析步骤的执行情况。替代物不应是样品中的组分。 25552016 2 实验室试剂空白 一份高纯水按照样品的测定程序进行处理，用与处理样品时一样的玻璃器皿、仪器设备、溶剂、试剂、内标物、替代物。用于检查待测物或其他干扰物质是否在实验室环境、试剂和器皿中存在。 实验室加标空白 一份高纯水中加入已知量的待测物，把实验室加标空白当作一个样品进行处理，用于检查方法是否在控、实验室是否有能力在所要求的方法检出限内进行准确而精密的测定。 运输空白 样前在实验室将高纯水装入采样瓶中，密封，将其带到采样现场。采样时不开封，之后随样品运回实验室，按与样品相同的分析步骤进行实验，用于检查样品运输过程中是否受到污染。 全过程空白 样前在实验室将一份空白试剂水放入样品瓶中密封，将其带到采样现场。与采样的样品瓶同时开盖和密封，之后随样品运回实验室，按与样品相同的分析步骤进行试验，用于检查从样品采集到分析全过程是否受到污染。 4 方法原理 本方法是用吹扫捕集/气相色谱行测定。海水样品中的7种苯系物经高纯氦气（或氮气）吹扫后吸附于捕集管中，将捕集管加热并以高纯氮气反吹，被热脱附出来的组分经气相色谱仪（离后，用质谱仪（行检测。通过与待测物保留时间和标准质谱图或特征离子相比较进行定性，内标法定量。 5 试剂制备 白试剂水 二次蒸馏水或其他纯水设备制备的高纯水，用前加热煮沸10 却备用。 坏血酸 分析纯。 酸（1:1） 将一定体积的优级纯浓盐酸加入等量体积的高纯水中。 25552016 3 纯氦气 纯氮气 醇（色谱纯试剂。 系物混合标准溶液 购买市售有证书的标准溶液，由苯、甲苯、乙苯、对二甲苯、间二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯7种组成，g/g/准使用液 用甲醇稀释标准贮备液，配置含有待测物的标准使用液，g/g/下低温冷藏保存，存储瓶上顶空间尽量少，避免苯系物的损失。 标物、替代物标准溶液 选用氟苯为内标物，g/用对溴氟苯为替代物，g/标物、替代物标准使用液 g/标物）、g/代物），该内标物、替代物标准使用液要加入到样品、标准溶液及试剂空白中。 6 仪器和设备 品瓶 具有聚四氟乙烯棕色玻璃瓶清洗干净，放置烘箱里，130烘烤半小时，冷却备用。 扫捕集装置 使用自动进样器，并配备吹扫管至少能够盛放5 集管使用000捕集阱柱子或其他等效吸附剂。 相色谱有分流/不分流进样口，能对载气进行电子压力控制，可程序升温。电子轰击（离源，一秒内能从35 有动/自动调谐、数据采集、定量分析及谱库检索等功能。 细管柱 30 mm（固定相：聚乙二醇20000）；或其他等效能的毛细管柱。 25552016 4 携式冷藏箱 容积20 L。 7 样品采集与保存 有样品应采集平行样，每个样品应尽可能地充满采样瓶，水样中不留任何空间。每批样品需要一个全过程空白。 样前向每个采样瓶中加入适量抗坏血酸，每40 后采集水样至满瓶，小心避免将抗坏血酸冲出，每40 滴（1:1）盐酸溶液（使海水样品即将带聚四氟乙烯衬垫的螺旋盖密封盖好。样品充满或封瓶时，水样尽量不留任何空间。 集后的样品应密闭、低温保存，苯系物在海水中不稳定，采集后立即送至实验室进行分析，若来不及测定，将样品置于4冷藏保存，可放置48 h。 8 测定步骤 扫捕集参考条件 吹扫捕集采用氮气为吹扫载气，吹扫温度为20 ，吹扫流量为40 mL/扫时间为7.0 吸温度为250，时间为1.0 焙温度为280 ，时间为2.0 品瓶：40 扫管：10 品定量环：5 动进样。 谱参考条件 色谱柱：0 mm）；载气：高纯氦气，载气流速为1.0 mL/温程序：初始温度35（0 以5/进样口温度：180；进样方式：分流进样，分流比60:1。 谱参考条件 离子源：子能量70 子源温度230C，四级杆温度150C；灯丝延迟2.0 描方式：选择离子扫描。 作条件优化 据仪器厂商的要求对质谱仪进行调谐，直到调谐报告达到要求。 天分析之前，取1L2 C/则需对质谱仪的一些参数进行调整和清洗离子源。 25552016 5 表1 对溴氟苯离子丰度标准 质荷比 离子丰度标准 质荷比 离子丰度标准 95 基峰，100%相对丰度 175 质量174的5%9% 96 质量95的5%9% 176 质量174的95%105% 173 小于质量174的2% 177 质量176的5%10% 174 大于质量95的50% 质工作站软件在对应的保留时间窗口内能识别标准曲线工作液中的每个化合物，否则，系统需要重新调整。 制校准曲线 制至少5个浓度的标准系列溶液，其中一个接近但高于方法的检出限（或在实际工作范围的最低限处，其余标准曲线的点要对应样品的浓度范围。每个标准曲线系列溶液中含有相同浓度的内标物，替代物的浓度与待测物的浓度一致。 容量瓶中加入适量的高纯水，利用微量注射器分别移取一定量的标准使用液（替代物标准使用液（空白试剂水中，配制待测物和替代物浓度分别为50.0 ，200.0 ，500.0 ，1000.0 ，2000.0 的标准系列。标准系列溶液在容量瓶中不稳定，只能保存l h 2 h；将标准系列溶液储存于具聚四氟乙烯内衬垫螺旋盖的棕色玻璃样品瓶中，且上部不留空隙，4下低温避光则能保存24 h。 吹扫管中，使每点的内标物浓度均为400.0 ，按照实验条件（以相对保留时间（或保留时间）和标准物质质谱图比较进行定性，采用选择离子扫描模式（集上述标准系列，由低浓度至高浓度依次进行分析，记录标准系列待测物、内标物及替代物的保留时间、特征离子的响应值，并计算平均相对响应因子或绘制标准曲线。在本标准规定的条件下，分析测定含内标物、替代物以及7种苯系物的标准溶液，得到其标准选择离子流图，见图1。各组分的保留时间及定量离子见表2。 25552016 6 说明： 1苯； 2氟苯； 3甲苯； 4乙苯； 5对二甲苯； 6间二甲苯； 7邻二甲苯； 8苯乙烯； 9对溴氟苯。 图1 苯系物标准选择离子色谱图 表2 本标准中待测物、内标物及替代物的保留时间及定量离子 序号 化合物中文名称 化合物英文名称 保留时间(定量离子 (m/z) 定性离子 (m/z) 化学文摘号 1 苯 7 78, 51 71 氟苯 6 70,50 462 甲苯 1 92, 65 108 乙苯 1 106, 105 100 对二甲苯 1 106, 105 106 间二甲苯 1 106, 105 108 邻二甲苯 1 106, 105 95 苯乙烯 04 78, 51 100 对溴氟苯 74 95,176 460 计算平均相对响应因子法 000 5000 10000 15000 20000 时间 响应值 1 2 3 4 5 6 7 8 9 25552016 7 数据软件调出所有校准曲线溶液的选择离子质谱图，标准系列第 替代物）的相对响应因子（按照式（1）进行计算。 )()( （1） 式中： 标准系列中第替代物）的相对响应因子； 标准系列中第替代物）定量离子的峰面积或峰高； 标准系列中内标定量离子的峰面积或峰高； 标准系列中内标物的浓度，。 标准系列中第替代物）的浓度，； 算每个待测物和替代物的平均相对响应因子(按照式（2）进行计算。 1 （2） 式中： 待测物（或替代物）的平均相对响应因子； 标准系列中第替代物）的相对响应因子； n标准系列点数，5。 计算D）和相对标准偏差(）和式（4）。 1)(12） 100 （4） 在测定的浓度范围内，若任何待测物或替代物的平均响应因子的相对标准偏差超过20%，应重新分析校准曲线工作液或采取必要的措施提高响应因子的相对偏差小于20%，用平均相对响应因子进行定量分析，平均相对响应因子是所有校准曲线浓度最小二乘法绘制校准曲线 以待测物和相对应内标物的响应值比为纵坐标，浓度比为横坐标，用最小二乘法建立校准曲线。则需采取相应措施，重新绘制校准曲线。，也可以采用非线性拟合曲线进行校准，曲线相关系数需大于等于 用非线性校准曲线时，应至少采用6个浓度点进行校准。 准 用标准曲线溶液（行连续校核，评价仪器的灵敏度和线性变化情况。连续校准应每8 25552016 8 用与标准曲线相同的条件进行吹扫并分析连续校准溶液，内标定量离子的峰面积或峰高的变化量不应超过上一次连续校准的30%，或不应超过标准曲线平均值的50%。 准溶液中待测物和替代物的浓度与其真值的相对误差在30%以内。 验室试剂空白 验室试剂空白是指向高纯水中加入内标物和替代物，按照样品分析的步骤进行吹扫、捕集和仪器分析，实验室试剂空白分析值应低于方法检出限。 验室试剂空白至少每个工作日分析一次，且应在连续校准之后、样品分析之前完成。 品测定 测定前，先将样品瓶从冷藏设备中取出，使其恢复至室温。将样品按照次序放置于自动进样器中，到海水样品含内标物和替代物浓度分别为400 ，按照设置好的仪器条件（行测定。 在分析完标准或高含量样品后，应分析一个或多个空白试验样品以检查是否交叉污染，同时也起到清洗吹扫装置的目的。 9 结果计算与处理 测物的定性分析 待测物以相对保留时间（或保留时间）和标准物质质谱图比较进行定性。 测物的定量分析 根据待测物和内标物的选择离子质谱图对组分进行定量分析，有如下两种定量分析方法。 均相对响应因子定量法 一旦待测物被确认后，用选择离子的峰值对其进行定量。本标准方法采用内标定量法，按公式（5）计算待测物浓度： 式中： )()( （5） 式中： 样品中待测物的浓度，； 待测物定量离子的峰面积或峰高； 内标物定量离子的峰面积或峰高； 加入水样中的内标物浓度，； 待测物的平均相对响应因子。 准曲线定量法 25552016 9 10 质量保证 仪器维修、搬运、换柱或连续校准不合格时都需要重新绘制标准曲线。 验室质量控制首先要求进行实验室试剂空白、实验室加标空白、运输空白及全过程空白分析。实验室试剂空白是指向高纯水中加入内标物和替代物，实验室加标空白是指向高纯水中加入已知量的待测物、内标物和替代物。每批样品应至少测定一个运输空白和全过程空白，以确定样品在采样、运输和保存的过程中是否受到沾污。如果测定结果表明有不可忽略的沾污，应重复进行实验室试剂空白测定，以查明污染源进行消除。 验室的精密度和准确度：制备和分析57个加待测物的平行空白样，其浓度大概在校准曲线的中间范围内。加标平行空白样的准备方法是将适量含所有待测物的标准溶液加入100加入内标物和替代物。按样品的操作步骤分析。计算每个组分的测定浓度、平均浓度、回收率和精密度(相对标准偏差)，每种组分及替代物的回收率(以真值平均百分比表示)应在80%110%之间。重复分析的相对标准偏差应小于10%。 定方法的最低检出限：制备和分析至少7个加标空白，建议加标浓度范围为25.0 50.0 ，或者根据标准曲线的数据估计加标浓度，加标水平大概是估计最低检出限的35倍，按样品的操作步骤分析。最低检出限的计算公式为： St( （6） 式中： S重复实验的标准偏差； n重复实验的次数； t（自由度为信水平为99%时的个样品中的内标物和替代物的定量离子峰面积在一段时间内应相对稳定，其漂移不能大于50%。 天分析样品前，应进行实验室试剂空白分析以检测背景污染，并进行标准曲线校核，确认标准曲线的适用性。 11 方法检出限、准确度和精密度 表3给出了7种待测物的方法检出限。 25552016 10 表3加标浓度为50.0 下7种待测物的方法检出限(各实验室所测检出限（） 序号 化合物 中文名称 化合物 英文名称 1 2 3 本实验室 方法检出限 ） 1 苯 甲苯 乙苯 对二甲苯 间二甲苯 邻二甲苯 苯乙烯 法的重复性、再现性等精密度指标见表4、表5。 表4 低浓度海水样品精密度测试数据汇总表 单位： 序号 化合物中文名称 实验室号 重复性r 再现性R 1 苯 3 甲苯 3 乙苯 3 对二甲苯 3 间二甲苯 3 邻二甲苯 3 苯乙烯 3 0.0 iS 25552016 11 表5 高浓度海水样品精密度测试数据汇总表 单位： 序号 化合物中文名称 实验室号 重复性r 再现性R 1 苯 3 920 甲苯 3 乙苯 3 952 35 对二甲苯 3 间二甲苯 3 邻二甲苯 3 苯乙烯 3