DB3205T 201-2011 荷花种质资源保存及提纯复壮技术规范

B 05 苏州市农业地方标准 201花种质资源保存及提纯复壮技术规范 2012 03 01 发布 2012 03 01 实施 江苏省苏州质量技术监督局 发布 201 前 言 荷花因兼具观赏、净化水环境等功能，在休闲农业、绿化美化、环境净化等方面具有广阔应用前景。荷花主要以种藕进行无性繁殖，种质容易退化。目前苏州市各类生态园及湿地系统中荷花得到广泛应用，但普遍存在品种杂乱、种性退化等问题，荷花种质资源保存与提纯复壮尚缺少技术规范。 为规范荷花种质资源保存与提纯复壮技术，防止荷花种质资源流失与品种退化，推动标准化荷花种质保存与提纯复壮技术应用，根据中华人民共和国标准法，特制订本标准。 本标准编写按 准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写。 本标准由苏州市农业委员会提出。 本标准起草单位： 苏州市农业科学研究院、苏州市相城区荷花湿地公园开发有限公司。 本标准主要起草人：李静会、徐正庭、李欣、姜红卫、徐君、杨雪星。 201 荷花种质资源保存及提纯复壮技术规范 1 范围 本标准规定了 荷花种质资源保存及提纯复壮 的 术语和定义、种质资源种植保存技术 、 荷花 种质资源试管苗保存技术 、 荷花 种质资源 分藕 提纯复壮 技术 、 荷花 种质资源 组培 提纯复壮 技术 。 本标准适用于 荷花种质资源保存及提纯复壮 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件 的 应用是必不可少的。 凡是 注日期的引用文件， 仅注日期的版本 适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本 (包括所有的修改单 )适用于本 文件 。 285 农药安全使用标准 8321.(1 9) 农药合理使用准则 (所有部分 ) 837莲藕栽培技术规程 3 术语和定义 下列术语的定义适用于本标准。 花 本标准中荷花指观赏花的莲藕品种。 花种质资源 携带不同遗传物质的莲植物的统称，包括野生种、地方品种、选育品种、品系、特殊遗传材料。 4 种质资源种植保存技术 种质资源圃建设 环境条件 临近水源，远离污染源，附近无高大树木、建筑物等，有充足的阳光。 资源圃规格 资源圃由若干个品种池组成，一份资源种植一个池，池的数量由需要保存的种质资源数量决定。单个品种池长、宽各为 3m，面积为 24品种池间完全隔断，间隔在 上。为防止漏水和便于操作，资源圃品种池一般采用半地下式， 2/3 在地下， 1/3 在地上。资源圃主体一般为混凝土或砖砌结构，亦可根据立地条件和投入规模选用其他建池材料。 池底 池底土壤先拌和生石灰，分层用机械整平 压实，再铺 10 凝土抹平，切割好伸缩缝。简 201 易条件也可在机械密实后用 51224格实心砖平铺，再抹 水泥砂浆。 池埂 池埂宜用空心砖砌成。共用进水口的品种池池埂高为 2530溉时水能越过池埂流通。不共用进水口的品种池埂高为 4050种池之间的池埂宽度 围排水沟池埂宽为 200埂表面抹 水泥砂浆。 灌水沟和排水沟 灌水沟与排水沟分开，一般灌水沟在中间，排水沟在四周，保证每个品种池水能灌 溉进去，遇到大雨时水能越过池埂进入排水沟排出。进水也可用管道连通到每个品种池。进水沟或孔的底边高于品种池底面 1015水沟略低于品种池土层高度。 土壤 品种池中土层厚度 在 1520质疏松肥沃，土壤有机质含量较高， 为 水稻土、 菜园土 均适宜种植 ，品种池中土壤 3 年须更换一次 。 资源圃田间栽培管理技术 土壤准备 前一年冬前将土壤翻耕，拌好有机肥，拌腐熟粪肥 45000kg/500kg/季充分冻融，早春土壤过 筛后入池。 上水 宜于种藕定植前 3d 5d 上水充分浸泡土壤，耙平泥面。 基肥施用 在冬前有机肥充足的情况下基肥可以不施，有机肥不足可以适量施用基肥，宜于定植前 15d 施少量15:15:15 复合肥，用量 0.8 kg/1.0 kg/ 种藕选择 种藕必须是藕身健壮、无病虫害，具有顶芽、侧芽和叶芽的完整藕，并严格区分品种。 种藕贮运 应符合 837定。 定植 定植时间 应在日平均气温达 15以上 时开始定植。苏州地区在 3 月下旬至 4 月中旬定植。 定植方法 种质资源圃内每池按 1 支 /藕以 20 25角斜插入土，藕头入泥 515梢翘露泥面。种藕种植时保持池面基本无水。 资源圃田间管理 追肥 于定植后每隔 25d 30d 追肥，第 1 次在 1 片 2 片立叶长出时，第 2 次在封行前，第 3 次在结藕前。每次施腐熟粪肥 22500kg/50kg/225kg/15:15:15复合肥 300kg/375kg/ 201 施 肥前将水位降低，追肥时氮磷钾配合使用。施肥后应及时浇水冲叶，防止灼伤叶片。 水层管理 水层管理遵循前期浅、中期深、后期又浅的原则。不同时期的适宜水深分别为：定植期至萌芽阶段35长中期开始抽生立叶至封行前 510行期至结藕期 1025藕期至枯荷期510藕留地越冬期间 35 病虫害及杂草防治 主要病虫草害 危害荷花的主要病害有莲藕腐败病、褐斑病；虫害有斜纹夜蛾、莲缢管蚜、莲潜叶摇蚊、稻食根叶甲、克氏原螯虾及椎 实螺、福寿螺；主要草害为杂草。 防治原则 坚持“预防为主，综合防治”的植保方针，优先采用“农业防治、物理防治和生物防治”措施，配套使用化学防治措施的原则。严禁使用高毒高残留农药。农药使用应符合 285 和 8321.(19)规定。 防治方法 莲藕腐败病 应选用抗病品种、栽植无病种藕，尽量减少人为造成地下茎伤口。于种植前 3d 5d，每公顷施生石灰 750或 种藕用 50%多菌灵可湿性粉剂 800 倍液或 70%甲基硫菌灵可湿性粉剂 800 倍液浸泡 1 莲藕褐斑病 一 般 每公顷用 50%多菌灵可湿性粉剂 1:1000 倍液，于发病初期喷雾 1 次 ， 或 75%百菌清可湿性粉剂 1:600 倍液，于发病初期喷雾 1 次 ；病情严重时交替用药 。 斜纹夜蛾 可 用黑光灯或频振式杀虫灯诱杀成虫，或用糖 6 份、醋 3 份、白酒 1 份、水 10 份及 90%敌百虫 1 份 （重量比） 调匀配成糖醋液诱杀成虫；人工摘除卵块或扑杀幼虫；分散后的幼虫每公顷用国产 剂 500 800 倍 液 喷雾防治，或 5%定虫隆（抑太保） 1500 倍液喷雾 1 次 ； 病情严重时交替用药 。 莲缢管蚜 清除水生杂草，特别是水生寄生植物。宜用黄板诱杀有翅成虫 ， 或 50%抗蚜威可湿性粉剂 1:1200 倍液喷雾。 莲潜叶摇蚊 如 用 90%晶体敌百虫 800 1000 倍液 喷杀，前期摘去受害较重的叶片，隔 1 周喷 1 次，连续喷 3 次。 稻食根叶甲 冬季排干积水，促使越冬幼虫死亡，清除野生寄主，减少成虫取食及产卵场所。用茶籽饼粉 300kg/ 克氏原螯虾（龙虾） 在定植前 7d 每公顷用 氰菊酯乳油 3000 倍液均匀浇泼 1 次，水深保持3 椎实螺、福寿螺 于定植前 7d，每公顷 可 施用灭螺鱼安（ 20硫酸烟酰苯胺粉） 2%三苯醇锡粒剂 1520于田间，水深保持 3 杂草 定植前，结合耙地清除杂草；定植后至封行前，人工拔除杂草，清理绿萍与苔藓。 采收莲子 资源圃品种池中荷花结的莲子要及时套袋采收（或在成熟前套袋），随熟随采，防止散落到池中， 201 或者在成熟前将莲蓬剪除，防止品种混杂。 种 藕 出圃 种 藕 出圃时间为种藕生长休眠期，一般在二月中下旬。起挖后将藕鞭剪掉，留主藕、子藕和孙藕。 对种藕进行 分品种、 分类 、 分级贮藏 ： 一般将种藕直接假植在水池中，有条件 可 将种藕放入温度为5 8 、 湿度为 90 95的冷库中储存。 5 荷花 种质资源 试管苗保存技术 外植体取材 取材时间：在 莲藕萌发期（ 2 月 4 月）或结藕期（ 10 月 12 月）取材 ；取材要求：选取 符合原品种特性 、 无明显病虫害症状的大田植株，挖出莲藕茎段，切取 23的饱满顶芽。 外植体表面消毒 切取莲藕的顶芽，在自来水下洗净，并用洗衣粉溶液浸泡 15流水状态下冲洗 1 h 以上，转入无菌操作室。在无菌条件下，外植体先用 75的乙醇浸泡 30s，再用 汞浸泡 5菌水冲洗 5 次，每次 30s 以上，将材料置于无菌烧杯中备用。 茎尖 剥 取 将解剖镜置于超净工作台 上 ，用 75%酒精擦拭 2 遍，打开超净工作台风机与紫外灯，消毒 2h。将表面消毒的材料置于灭过菌的滤纸上，用消毒的镊子和手术刀在解剖镜下剥离外层幼叶，切取 端带 2 个叶原基的茎尖组织。 分化培养 将 剥取的茎尖组织 接种在 经 高温消毒（ 121 ， 15过的 分化培养基（ 0.5 3蔗糖， 脂粉） 上 ， 封口后 置于 252 ，光照 15002000天光照 12h 的条件下培养，经过 1 个 月 2 个月分化 培养可 获 得 试管苗 。 继代培养保存 在超净工作台 上 操作，将分化试管苗的丛芽切割，分为单芽或带 1 个腋芽的茎段，在无菌状态下转入高温消毒 过的继代 培养基（ 3蔗糖），置于 202 ，光照 1500000天光照 12h 的条件下培养， 继代 周期为 90d，待新芽形成后，重复上述步骤。 生根培养 将 试管 苗切成带 2片 3片叶或 1个 2个腋芽的茎段接入生根培养基（ 3%蔗糖 ）中，培养 20d 左右可以长出较多的根。 炼苗移栽 将已长根且长势正常的试管苗拿到室外，闭瓶炼苗 5d 7d 后再敞瓶炼苗 2d。 将试管苗取出洗净根部附着 的 培养基，栽入 23的浅水灭菌基质（ 70%泥土 +30%泥炭土），覆盖有透气孔 的 塑料薄膜，在温度 20 25 、遮荫条件下培养 7d 10d，揭膜。喷洒适当营养液，经 3 周培养可移栽 至小池或缸中 种植，一般于 5 月 7 月移栽，前期晴天注意遮荫、雨天注意防止雨水冲刷。大田移栽成活后， 仔细对照该品种的品种特性，辨别 株型、长势、 花色、花型、花期、着花密度 、叶色等特征，通过品种鉴定 201 的种苗所结的种藕， 翌年春天可收获 作为该品种的 原种种藕。 6 荷花 种质资源 分藕 提纯复壮 技术 方法 采用改良混合选择方法，即单株选择、分系比较、二圃制（株系圃、原种圃 )。 种藕来源 单株选择 提纯用种藕来源从株系圃中选优或从育种单位购买，第一年种植到种质资源圃进行初选。花期初选，从 种质资源圃 里选取 生长强势、无退化表现、并 符合原品种特性 植株作为母株。选择数量依原种圃面积而定，初选数应比决选数增加一倍。结实结藕期决选，将健壮并具有该品种典型开花与结实结藕 特征的单株品种池中所结的全部种藕单独贮藏，作为株系圃的种藕。 株系圃 株系圃一般为若干个面积不低于 1种植缸组成，各池（缸）间距不低于 二年，将贮藏的全部种藕分品种分株单独种植，一池或一缸一藕，做好标识。生长期间进行多次品种特性观察，结合指示标志、抗血清法鉴定，严格淘汰病毒株和变异株系，对各品种株系苗期、开花期、结实结藕期综合观察甄别与检测，精选出的 1 株 2 株健壮、生长势强且符合品种典型特性的株系做好标志，所结种藕作为提纯复壮后的新种藕，下 一年种植到种质资源圃中，余下的种藕去杂去劣后混收，作为该品种的原原种，用于繁殖生产原种。 种质资源圃 第三年，在株系圃中精选出的植株所结的种藕，已是提纯复壮后的新种藕，淘汰原种质资源圃中的种藕，用复壮后的新种藕种植到种质资源圃中，当年在种质资源圃中再选优良单株，下一年种植到株系圃中。 隔离条件 品种间用品种池隔离，各池根系不相连通。同品种池连续几年种植，满 3 年更换一次土壤。 去杂去劣 定植前 原种圃与株系圃，定植前都需要先挖出上年残留植株，清理掉落的种子。 生长期 及时清除花色、花形、叶色、叶形等性状与所繁品种明显有异的植株。花期每 3d 5d 巡查一遍，结实期每 5d 7d 巡查一遍，莲子成熟前及时套袋，防止种子掉落，成熟时及时采收，或者在成熟前将莲蓬剪除。 枯荷期 挖除田块内保持绿色的个别植株。 挖采期 剔除皮色、芽色、藕头与藕条形状等与所繁品种有异的藕支及感病藕支。 201 定植与栽培管理 参照 种藕采收与储藏 参照 7 荷花 种质资源 组培 提纯复壮 技术 方法同 5。在 根培养后和 苗移栽前进行病毒检测，淘汰带毒苗，未检测出的其余试管苗， 1 个月后再检测一次，确认无病毒可作为原种苗保存和繁殖。 201 荷花种质资源保存及提纯复壮技术规范 编制说明 一、任务的来历及工作简要过程 苏州是典型的江南水乡，湖泊众多，湿地资源丰富，随着湿地资源的快速开发利用，荷花因兼具观赏、净化水环境等功能，在休闲农业、绿化美化、环境净化等方面具有广阔应用前景。目前我市各类生态园及湿地系统中荷花得到广泛应用，但普遍存在品种杂乱、种性退化等问题，导致观赏性下降，迫切需要收集、保存与提纯复壮 荷花种质资源，防止种性退化。我市尚无荷花种质资源保存与提纯复壮技术规范。 2011 年由苏州市农业委员会提出，苏州市农业科学研究院、苏州市相城区荷花湿地公园开发有限公司负责起草了荷花种质资源保存及提纯复壮技术规范。经过广泛征求专家意见，查阅了大量相关资料，根据实际情况进行了多次修改，于 2011 年 11 月完成了荷花种质资源保存及提纯复壮技术规范苏州市农业地方标准的起草工作。 二、编写过程进行的主要调查及数据来源 本标准制订前，我们已从全国各地收集荷花种质资源，建设荷花种质资源圃，并且开展了荷花种质资源保存和 提纯复壮的相关研究，已初步摸索和总结出一套荷花种质资源保存和提纯复壮的技术方案