DB11 T 379-2006 豆芽中4-氯苯氧乙酸钠 6-苄基腺嘌呤 2,4-滴 赤霉素 福美双的测定

31 备案号：19170 京 市 地 方 标 准 3792006 豆芽中4,4霉素、福美双的测定 62,4in 006 2006京市质量技术监督局 发布 3792006 次 前 言.1 范围.2 4.3 6.4 2,4,4留量的测定 .5 赤霉素残留量的测定.6 福美双残留量的测定. 3792006 言 本标准由通州区质量技术监督局提出。 本标准起草单位：北京市海淀区产品质量监督检验所（国家食品质量安全监督检验中心）。 本标准主要起草人：曹红、金瑛、刘艳琴、许华、王浩、田艳玲、林立。 3792006 1豆芽中42,4霉素、福美双的测定 1 范围 本标准规定了豆芽中4,4霉素、福美双的测定方法。 本标准适用于豆芽中4,4霉素、福美双的残留量分析。 2 4- 氯苯氧乙酸钠残留量的测定 理 试样中的4酸性条件下用固相萃取柱将样品中的4其与基体干扰物分离，再用甲醇洗脱并用高效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法峰面积定量。 剂与材料 氧化钠（ 酸（ 酸（ 醋酸（ 醇（ 氧化钠溶液（）：于水并稀释至1000 铁氰化钾溶液：称取 10.6 g 亚铁氰化钾N)6 3于少量水中，并用水稀释至100 酸锌溶液：称取 22.0 n(溶于少量水中，然后加入 3 酸盐缓冲液（）：水溶解，并定容至1000 50 %密称取4量99%）0.1 g(g)，用甲醇溶解并移入 100 释至刻度。相萃取小柱（3 m L /500 柱，用时先经10 用10 持萃取柱润湿状态待用。 标准所用水为经纯水制备系统制备后的水。 器与设备 效液相色谱仪（带紫外检测器，配B 声波仪。 度计。 织捣碎机。 析步骤 样制备 称取捣碎混匀的豆芽样品20 g（精确至0.1 g）于100 入40 后分别加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液各5 匀，超声提取30 氢氧化钠溶液稀释至 3792006 2 刻度，过滤。取50.0 后以3 mL/用3.0 用甲醇洗脱并定容至3.0 液相色谱分析。 准曲线的制备 甲醇稀释至刻度。、的标准使用液，供液相色谱分析。 谱条件 色谱柱：B .6 50 m）（或相当型号色谱柱）。 检测波长：228 流动相：甲醇+磷酸盐缓冲液（50+50）(V/V)。 流速：1.0 mL/柱温：30 。 定 保留时间定性，标准曲线法定量。标样及试样图谱见图1及图2。 算 按式（1）计算。 = m （1） 式中： X试样中4位为毫克每千克（mg/ A从标准曲线上求出的试样液中4位为微克（g）； f试样的稀释倍数； m试样的取样量，单位为克（g）； 计算结果保留两位有效数字。 密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。 测限 在本试验条件下，mg/图1 4氯苯氧乙酸标样色谱图 3792006 3图2 豆芽样品中4氯苯氧乙酸色谱图 3 6- 苄基腺嘌呤残留量的测定 理 豆芽中残留的6效液相色谱法测定，以保留时间定性，外标法峰面积定量。 剂与材料 酸（ % 乙酸溶液。 腈（ 醇（ 化甲醇溶液：每100 （60+40）(V/V)中加入乙酸50L，混匀。 密称取6 g（g）（含量于100 甲醇溶解并定容至刻度。此溶液每毫升相当于 相萃取小柱（3 00 柱，用时先经 10 醇洗脱活化，再用 10 持萃取柱润湿状态待用。 标准所用水为经纯水制备系统制备后的水。 器与设备 效液相色谱仪（带紫外检测器，配B 心机（4500 r/ 转蒸发仪。 织捣碎机。 析步骤 样制备 称取捣碎混匀的豆芽样品10 g（精确至0.1 g）于50 入15 然后以4500 r/清液转入100 品再用15 次离心，合并上清液。上清液用旋转蒸发仪蒸发，以去除甲醇，剩余水相以3 mL/用3.0 用甲醇洗脱并定容至5.0 机膜滤过后，供液相色谱分析。 准溶液系列的配制 .0 3792006 4 2.0 .0 甲醇稀释至刻度。配制成浓度依次为0 、的标准溶液系列，供液相色谱分析。 谱条件 色谱柱：B .6 50 m）（或相当型号色谱柱）。 检测波长：267 流动相：甲醇+乙腈+1%乙酸溶液（60+5+35）(V/V)。 流速：1.0 mL/柱温：30 。 定 保留时间定性，峰面积外标法定量。标样及试样图谱见图3及图4。 算 按式（2）计算。 10001000=（2） 式中： X试样中6位为毫克每千克（mg/ A从标准曲线上求出的试样溶液中6位为微克（g）； f试样的稀释倍数； m试样的取样量，单位为克（g）； 计算结果保留两位有效数字。 密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 测限 在本试验条件下，mg/ 2 3 4 5 6 7 0102030405060 6苄基腺嘌呤标样色谱图 3792006 5 2 3 4 5 6 7 0204060801001201406豆芽样品中6苄基腺嘌呤色谱图 4 2,4- 滴（2,4留量的测定 理 试样中2,4三氟化硼甲醇溶液将2,4胶渗透色谱净化除去干扰物质，以气相色谱电子捕获检测器测定。根据色谱峰保留时间定性，外标法峰面积定量。 剂与材料 腈（ 醇（ 己烷（ 己烷（ 酸乙酯（ 的酸性水溶液：用50稀硫酸调节水的化钠（ 0 g/水硫酸钠：650 灼烧4 存于干燥器中。 氟化硼乙醚溶液：47 (V/V)。 生剂(14 三氟化硼甲醇溶液)：量取29.5 甲醇定容至100 ,4密吸取1 ,4度100g/L），用甲醇溶解并定容至100 ,4标准所用水除另有规定外，均为蒸馏水。 器与设备 相色谱仪：配有电子捕获检测器。 胶渗透色谱净化系统。 织捣碎机。 温水浴锅。 转蒸发器。 动振荡器。 空分析用20 套的铝盖和密封垫（或密封紧密的密封瓶）。 析步骤 取 称取捣碎混匀的豆芽样品50.0 g（精确到0.1 g）于具塞锥形瓶内，加入20 3792006 6 荡提取30 滤，滤渣用20 并滤液于250 上述分液漏斗中加入15 荡混匀，静置40 层，提取乙腈层，用旋转蒸发器除去乙腈，用5生化 加5 玻璃瓶加盖密封，在65 水浴中保持45 出玻璃瓶迅速置于冰浴中冷却，将衍生反应液转移至盛有10 50g/正己烷提取二次，每次5 并有机相，经无水硫酸钠脱水，旋转蒸发器挥至近干，用乙酸乙酯:环己烷（1:1，V/V）定容至10,45,4无水硫酸钠脱水，旋转蒸发器挥至近干后，用正己烷准确定容至5,4胶渗透色谱净化 选择凝胶渗透色谱柱规格（200 2 mm ，柱填料为00动相乙酸乙酯:环己烷（1:1，V:V），流速为4.7 mL/样量5 品收集时间11 5 生化后样品按照上述条件净化，将约20 正己烷准确定容至5 相色谱条件 气相色谱仪：附电子捕获检测器（ 色谱柱：30 m250 m 载气: 高纯氮,纯度 载气流速：1.0 mL/进样方式：不分流。 程序升温：柱初始温度50 ，保持1 25 /，保持20 进样口温度: 250 。 检测器温度: 300 。 定 分别吸取2,4照 保留时间定性，色谱峰面积外标法定量。标样及试样图谱见图5和图6。 算 按式（3）计算。 1000100020 =（3） 式中: X 2,4位为毫克每千克（mg/ A 样液中2,4生物)峰面积； 标准工作溶液中2,4生物)峰面积； C 标准工作溶液中相当于2,4生物)浓度,单位为微克每毫升（g/ m 取样量，单位为克（g）； V 样液的定容体积，单位为毫升（ 密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10。 测限 3792006 7在本试验条件下，豆芽中2,mg/1溶剂峰 22,4未知峰 图5 2,4溶剂峰 22,4未知峰 图6 豆芽样品中2,4 赤霉素残留量的测定 理 豆芽中赤霉素经提取后，先经乙酸乙酯液液萃取初步净化，再利用凝胶渗透色谱（目标化合物与基体干扰物分离，达到分离和净化的目的。用反相高效液相色谱法测器进行色谱分析，采用标准物质的保留时间、辅助峰扫描光谱纯度对照两种方式对样品峰进行定性，采用外标法以峰面积计算定量。 剂与材料 醇（ 酮（ 酸乙酯（ 0硫酸溶液(V/V)。 50 3792006 8 水硫酸钠（ 乙酸（ 相萃取小柱：时先经10 用10 持萃取柱润湿状态待用。 霉素标准储备液：精密称取赤霉素（含量0.1 g（用甲醇溶解并定容至100 标准所用水除另有规定外，均为蒸馏水。 器与设备 效液相色谱仪（配 转蒸发仪。 织捣碎机。 动振荡器。 胶渗透色谱仪（ 析步骤 样制备 称取捣碎后样品50 g（精确到0.1 g）于锥形瓶中，加20 荡提取30 合物经布氏漏斗抽滤，残渣放回锥形瓶中，再用 100 布氏漏斗抽滤,之后分别两次用50 滤。 将上述多次提取的丙酮30 水浴上，用旋转蒸发器减压蒸发除去丙酮。剩下的试样水溶液用滤纸过滤，用50 20 滤液转入烧杯中，用50 %样液转入250 少量蒸馏水洗涤烧杯。然后用150 集乙酸乙酯提取液，并通过约15 30 水浴中旋转蒸发至干。用15 己烷+乙酸乙脂（1：1）(V/V)混合液充分溶解，准备待分析样品溶液10 入渗透色谱柱分离，作用时间13 速4.7 mL/集63 集凝胶渗透色谱（出液，于30水浴中旋转蒸发至干，再用2 液相色谱分析。 准溶液系列的配制 准确吸取标准储备液0 甲醇稀释定容至刻度。制成浓度依次为0 g/ 0 g/ 00 g/ 50 g/ 00 g/ 00 g/ 液相色谱分析。 谱条件 色谱柱： m，4.6 50 相当型号色谱柱）。 流动相：甲醇水（5545） (V/V) (溶液用冰乙酸调 流速：0.6 柱温：40 。 检测波长：206 定 用标准物质的保留时间辅助峰扫描光谱纯度对照两种方式对样品峰进行定性，采用外标法以峰面积计算定量。标样及样品中赤霉素图谱分别见图7和图8。 算 按式（4）计算。 3792006 910001000=（4） 式中： X样品中赤霉素的含量，单位为毫克每千克（mg/ C样品测定液中赤霉素的含量，单位为微克每毫升（g/ F稀释倍数； m样品量，单位为克（g）。 计算结果保留两位有效数字。 密度 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。 测限 在本试验条件下，mg/图7 赤霉素标样色谱图 图8 豆芽样品中赤霉素色谱图 6 福美双残留量的测定 理 豆芽中残留福美双与盐酸气相色谱法（定，以保留时间定性，外标法峰面积定量。 剂与材料 3792006 10 酸（ 盐酸溶液：量取42化亚锡（ 硫化碳（ 氯甲烷（ 酸取2 g 理水：经纯水制备系统制备的去离子水煮沸数分钟，冷却后待用。 美双标准溶液：精密称取福美双（纯度22.4 二氯甲烷溶解，并移入100 释至刻度。此溶液浓度为每毫升相当于224 器与设备 相色谱仪：带火焰光度检测器（滤光片。 密注射器：100 L。 温水浴或烘箱。 空瓶或具密封塞的250 织捣碎机。 析步骤 样制备 称取20 g（精确到0.1 g）经组织捣碎机匀浆处理的豆芽样品放入反应瓶中，加处理水至30 盐酸紧反口胶塞，用反应瓶架固定。将反应瓶置于80 的烘箱中反应2 小时，应完成后取出反应瓶，冷却至室温。抽取瓶内顶空气体进行定量测定。 准曲线的制备 分别准确吸取 1 L、5 L、10 L、50 L 福美双标准溶液于反应瓶中，g、g、g、g，应后抽取瓶内顶空气体供气相色谱分析。 谱条件 气相色谱仪：带火焰光度检测器（滤光片。 色谱柱：30 m250 m程序升温：柱初始温度50 ，保持1 25 /，保持2进样口温度：180。 检测器温度：200。 载气：高纯氮,纯度 载气流速： 氢气流速：40 mL/空气流速：450 mL/进样：进样量100L，不分流。 定 分别吸取福美双标准液