研究仙灵骨葆对兔膝骨性关节炎治疗作用

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/7研究仙灵骨葆对兔膝骨性关节炎治疗作用摘要目的研究仙灵骨葆XIANLINGGUBAO,XLGB对兔骨性关节炎关节软骨及软骨下骨的保护作用。方法30只3个月龄雄性日本大耳白兔，随机分为对照组SHAM、盐水组ACLTNS和仙灵骨葆组ACLTXLGB，每组各10只。盐水组和仙灵骨葆组行右膝关节前交叉韧带切断术ANTERIORCRUCIATELIGAMENTTRANSACTION,ACLT造成膝骨性关节炎模型。术后仙灵骨葆组125MG/KGD灌胃盐水组则给予等剂量生理盐水。6周后处死动物，取股骨测量骨密度，之后脱钙制片，行HE染色、MANKIN评分及BMP2、MMP13免疫组化染色取右膝胫骨近端包埋，制成硬组织切片，用于骨组织形态计量学测量。结果1MANKIN评分仙灵骨葆组显著低于盐水组。2股骨远端骨密度及胫骨近端软骨下骨骨量仙灵骨葆组均显著高于盐水组。3免疫组化仙灵骨葆组MMP13的表达显著低于盐水组，BMP2的表达显著高于盐水组。结论仙灵骨葆125MG/KGD灌胃能够部分阻止骨关节炎兔关节软骨的退变，其作用机制可能与下调MMP13的表达，上调BMP2的表达，同时增加软骨下骨骨量，改善其微观结构有关。关键词仙灵骨葆骨性关节炎软骨细胞软骨下骨BMP2MMP13骨关节炎OSTEOARTHRITIS，OA是一种以关节疼精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/7痛、晨僵及功能损伤造成的活动受限为临床特征的慢性疾病。其病理学特点为降解代谢胜于合成代谢关节软骨的变性，表现为糜烂、溃疡和脱失、软骨下骨硬化和骨赘的形成。流行病学数据显示1在中老年人群中,骨关节炎是一种发病率较高的、非常普通的肌肉骨骼疾病，但目前还没有找到真正能够治愈的方法和药物1。研究发现24，仙灵骨葆XLGB对成骨细胞和破骨细胞都具有显著的调控作用，并能改善骨小梁三维结构5，可能存在对OA治疗的巨大潜力。本研究旨在观察仙灵骨葆对骨关节炎模型兔关节软骨的保护作用，同时检测软骨下骨量及骨关节炎发生促进因子MMP13及骨关节炎发生保护因子BMP2的表达，以期进一步探讨其可能的作用机制。1材料与方法动物分组与处理健康3个月龄雌性日本大耳白兔30只购自北京维通利华公司，批号SCXK京，20050002。随机分为三组对照组SHAM、盐水组ACLTNS和仙灵骨葆组ACLTXLGB。盐水组和仙灵骨葆组行右膝关节前交叉韧带切断术ANTERIORCRUCIATELIGAMENTTRANSACTION,ACLT。造模术后，ACLTXLGB组行每日1次仙灵骨葆贵州同济堂公司灌胃125MG/KGD，ACLTNS组给予等量生理盐水灌精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/7胃。SHAM组只打开右膝关节，不行前交叉韧带切断术,缝合膝关节。标本采集和处理三组实验动物于6周后处死并取材。将胫骨近端固定于70酒精，冠状面锯开胫骨，脱水固定，经甲基丙烯酸甲脂包埋，作5M切片，GIEMSA染色。采用骨组织形态计量学方法测量软骨下骨骨小梁。股骨远端测量骨密度，股骨髁置于4多聚甲醛中固定，15EDTA2NA溶液脱钙，石蜡包埋，作4M连续切片。行HE染色、BMP2和MMP13免疫组化染色。免疫组织化学SABC法4M连续切片，平铺于涂有多聚赖氨酸的载玻片上，烤片4H，脱蜡至水。3过氧化氢冲洗10MIN，PBS冲洗3次5MIN，复合酶37修复10MIN。滴加抗兔BMP2和MMP13多克隆一抗抗体购自武汉博士德，37湿盒孵育2H。滴加生物素化二抗购自武汉博士德，高敏过氧化物酶复合物，DAB显色，苏木素复染，脱水透明，中性树胶封片。观察指标HE染色观察采用MANKIN法评分，免疫组化切片观察染色情况，骨密度测量并记录三组标本股骨远端1/3骨密度精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/7和内R1外R2侧髁软骨下骨软骨下CM间的骨密度。GIEMSA染色切片用LEICADMLB2荧光/光学显微镜及LEICADC300数码摄像系统进行观察与摄取图像在20倍物镜下取软骨下骨板至骨骺上骨板间骨小梁为观察范围，每个切片随机选3个视野，测定骨组织形态计量学相关指标参数。统计学分析实验数据建立EXCEL数据库，采用SPSS统计软件进行单因素方差分析，两组间采用独立性“T”检验，以XS表示，以P免疫组化BMP2、MMP13染色切片结果MMP13免疫组化染色，关节软骨细胞阳性表达的胞浆和胞外基质被染成棕黄色。SHAM组胞浆和基质着色区域少，着色浅ACLTNS组胞质和胞外基质着色区域广泛，着色深，箭头所示为阳性细胞表达ACLTXLGB组胞浆和胞外基质着色范围较少，局限于软骨表层，阳性细胞较少且着色较浅，箭头所示为阳性细胞表达图2。BMP2免疫组化染色，关节软骨细胞阳性表达的胞浆和胞外基质染成棕黄色。SHAM组，阳性细胞胞浆和基质着色区域较少，着色浅，箭头所示为阳性细胞表达ACLTNS组，胞质和胞外基质着色范围较少，局限于软骨表层且着色较浅ACLTXLGB组，胞浆和胞外基质着色区域广泛，着色深，箭头所示为阳性细胞表达图3。骨密度测量结果精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/7ACLTXLGB组较ACLTNS组，股骨远端DBMD股骨远端1/3骨密度骨密度升高，差别显著P2陈虹，张秀珍淫羊藿甙对大鼠成骨细胞分泌细胞因子的影响J同济大学学报医学版,2005,2583李淑梅,宋利格,张秀珍淫羊藿甙对大鼠成骨细胞功能及OSTERIX表达的影响J同济大学学报医学版,2005，68114吕明波,刘兴炎,葛宝丰,等淫羊藿苷对破骨细胞活性的影响J中国骨伤杂志，2007,85295315QINL,ZHANGG,HUNGWY，ETHERBFORMULA“XLGB”PREVENTSOVXINDUCEDDETERIORATIONFOMUSCULOSKELETALTISSUESATTHEHIPINOLDRATSJJBONEMINERMETAB,2005,2355616翟吉良,翁习生,邱贵兴骨关节炎模型的建立及选择J中国矫形外科杂志,2007,118438457李任增,张柳,高晓增降钙素对兔骨关节炎关节软骨的保护作用J中国矫形外科杂志,2006,21211238刘志翔,张柳,张楠降钙素对兔骨关节炎软骨基质金属蛋白酶1的影响J中国矫形外科杂志,2006,22174117439张楠,张柳,郑桓,等降钙素在体内和体外实验中对兔关节炎关节软骨的保护作用J中国矫形外科杂志,精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创6/72008,1666910张大威,程岩,张金超,等淫羊藿苷对破骨细胞的分化及骨吸收功能的影响J中国药理学报,2007,446346711李志骨性关节炎与细胞因子相关性研究进展J甘肃中医学院学报,2005,4535512WANGXB,PAULA,MANNERA，ETALREGULATIONOFMMP13EXPRESSIONBYRUNX2ANDFGF2INOSTEOARTHRITICCARTILAGEJOSTEOARTHRITISANDCARTILAGE,2004,1296397313王玉彬,陈安民,郭风,等基质金属蛋白酶家族在骨关节炎软骨组织中表达的研究J中国矫形外科杂志,2007,185385514杨丰建,愈永林,乔健,等兔骨关节炎模型的建立以及关节炎软骨组织中MMP1/MMP13的表达J复旦学报医学版,2007,456356715GRUNDERT,GAISSMAIERYC,FRITZJ,ETMORPHOGENETICPROTEINBMP2ENHANCESTHEEXPRESSIONOFTYPEIICOLLAGENANDA