glp1类似物exendin4对糖尿病肾病大鼠肾脏sod、8ohdg的影响(可编辑)

GLP1类似物EXENDIN4对糖尿病肾病大鼠肾脏SOD、8OHDG的影响单位代码分类号号学密级一类似物一对糖尿病肾病大鼠肾脏、的影响生究研嫠绍自师教导指兰亟堡扬煎熬援一一申请学位门类级别医堂亟登堂堂笪上一名称业专凼型堂一向至型蕉屋疸盟茎型点监遢型址方研究院学在笠鱼压匡堂瞳所年月同学位论文独创性声明本人声明,所呈交的学位论文系导师指导下本人独立完成的研究成果。文中任何引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明,愿意承担以下责任和后果、交回学校授予的学位证书、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报、本文按照学校规定的方式,对因不当取得学位给学校造成的名誉损害,进行公开道歉。、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名亟雌学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅本人授权山西医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,署名单位仍然为山西医科大学。保密论文在解密后应遵守此规定日期论文作者签名兰望年一月丛乙日指导教师签名日期纽兰年丘月改善较低剂量治疗组更明显,其差异具有显著性。与对照组相比,其余两组疗前后的总胆固醇、高密度脂蛋白有差异,但差异无统计学意义,具体结果见表及图、。表各组大鼠生化指标的变化义士,土分组/尿蛋白/士士士土士虽羼注与组相比较,”,与低剂量治疗组相比较厶钎归磐扎筋加惦日对照组低剂量治疗者高剂量治疗组图各组大鼠血糖数值与对照组相比较,与低剂量治疗组相比较,”印口尿蛋白加对照组低剂量治疗者高剂量治疗组图各组大鼠小时尿蛋白比较与对照组相比较,与低剂量治疗组相比较,”山西医科大学磺士学位论文团对照组口低剂量治疗者囚高剂量治疗组图各组大鼠血脂比较与对照组相比较,与低剂量治疗组相比较,”染色观察各组大鼠肾脏的病理变化通过染色镜下观察,对照组肾脏组织可见明显肾小球萎缩,基质增生,毛细血管袢受压,肾小管管壁增厚,管腔狭窄等典型的改变。上述病理改变在低剂量治疗组和高剂量治疗组中有不同程度的减轻,以高剂量治疗组减轻更为显著,见图。图各组大鼠肾脏染色对照组倍低剂量组倍高剂量组倍各组大鼠肾组织、的蛋白表达水平免疫组织化学法观察大鼠肾脏组织、的蛋白表达水平,其表达部位均位于肾小球系膜细胞区、肾小管上皮细胞及间质去,黄色或棕黄色颗粒即可为染色阳性,染色结果见图二、三,统计学分析结果见表、图、。坐堕墨苎奎兰堡圭主垒丝兰一一图蛋白表达水平对照组倍低剂量组倍高剂量组倍图蛋白表达水平对照组倍低剂量组倍高剂量组倍表治疗后各组大鼠肾组织、的平均光密度值士一,士一一一分组例数一一组低剂量治疗组士高剂量治疗组士叫一一注与组相比较,与低剂量治疗组相比较。仃朝,坐堕墨壁查兰堡圭兰垡丝苎一木撑团组口低剂量治疗组因高剂量治疗组姆趟龆米轷图治疗后各组大鼠肾组织、的平均光密度值山西医科大学硕士学位论文讨论近年来,随着生活生活的不断进步,人们生活方式的转变,糖尿病患者的数量急剧增加,随之而来的是糖尿病肾病,的患病率的逐年升高,如果缺乏正规的治疗,糖尿病肾病易演变成为终末期肾病,后者既是糖尿病患者死亡的主要原因之一,又是肾脏疾病引起死亡最常见的原斟。其发病机制甚为复杂,虽已证实多种致病基因及病理生理环节参与其发病,但具体机制尚不十分明确,如何更好的预防及治疗糖尿病肾病是目前临床工作迫切需要解决的问题,学术界为此投入了巨大的人力物力试图解决这一问题。越来越多的证据表明,糖尿病导致的体内氧化与抗氧化的失衡在糖尿病肾病发生。发展中起到了十分关键的作用关于人们对氧化应激的认识可以追溯到年前人们对衰老这一现象的理解。英国学者认为,衰老的本质是由于自由基攻击生命大分子引起的细胞损伤,这种损伤同时可诱发肿瘤及其他多种疾病,即所谓的自由基衰老学说。直至年,美国学者等【】首先提出了氧化应激的概念,同时指出了的学说中所存在的种种缺陷,从此人们对氧化应激有了一个初步的认识。氧化应激是指机体各种有害刺激的作用下产生大量的活性氧簇,和活性氮簇这类具有高反应性、高活性的物质,一旦这类物质的数量超出了机体抗氧化系统所能承受的范围,氧化及抗氧化系统之间的动态平衡被打破,引发一系列的不良后果。这类物质主要包括超氧阴离子、羟自由基和过氧化氢等及一氧化氮、二氧化氮和过氧化亚硝酸盐等活性氮簇,这些物质可与体内的脂质、蛋白质、核糖核酸等生物大分子发生反应,引起病理生理改变。同时,体内还存着一类物质,这类物质可起到清除自由基、减轻氧化损伤的作用,可以认为这类物质构成了机体的抗氧化系统。体内的抗氧化系统可分为两类一类是酶抗氧化系统,包括超氧化物歧化酶,、谷胱甘肽过氧化物酶,、过氧化氢酶,等另一类是非酶抗氧化系统,包括维生素、维生素、硫辛酸、类胡萝卜素、褪黑素、谷胱甘肽、微量元素铜、锌、硒等。大多数的时间里,这两个系统之间处于一个动态平衡的状态,一旦这一平衡被打破,则会引起一系列病理生理改变,并最终导致疾病。近年来,氧化应激与疾病的关系逐渐成为临床科研的一个热点,研究主要集中在氧化应激与衰老、肿瘤、糖尿病及细胞凋亡等方面。有一种学说认为氧化应激是包括糖尿病、胰岛素抵抗、心血管疾病等多种疾病在内的共同始动因素,这就是著名的“共同土壤”学山西医科大学硬士学位论文说】。随着这方面的研究深入,目前这一学说的正确性己得到了学术界的公认。同时,糖尿病也可导致氧化应激反应的加重,氧化应激反应的加重反过来加速细胞的凋亡、胰岛功能的破坏,形成恶性循环。这一结果不仅会导致难以控制的血糖升高,同时也会加速糖尿病各种慢性并发症如糖尿病肾病的出现,最终导致终末期肾病。有研究报道,高糖环境下培养的内皮细胞较正常环境下培养的内皮细胞会产生更多的活性氧簇,其机制是高血糖时体内可产生大量的电子供体,这些物质明显增加了线粒体膜两侧的电化学势能,超氧化物的产生也随之增加【】。因此,线粒体是产生活性氧簇的主要部位,糖尿病时过量活性氧簇的产生主要是线粒体膜两侧电化学是能增加导致的功能紊乱。而过量的可通过糖基化终末产物途径、多元醇途径、己糖胺旁路、途径等多条途径参与组织损伤,并最终导致糖尿病肾病【。电子传递链复合体抑制剂、解偶联,蛋白,和锰超氧化物歧化酶可抑制该类物质,从而延缓糖尿病肾病的进展。高糖状态下,糖基化终末产物主要是来自于单糖与机体内大分子物质通过非酶反应结合,与其特异性受体结合后,产生的生物学效应主要包括降低的酶活性、改变蛋白质的分子结构、释放某些细胞因子及损伤核酸分子等【。梭甲基赖氨酸大量沉积于肾小球系膜区及毛细血管壁被认为是糖尿病重要始动因素之一【,而这一物质就来自于糖基化终末产物作用下的蛋白质非酶糖化。活性氧簇还可以通过增强多元醇途径而消耗大量还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸,使得体内某些具有抗氧化功能的物质生成减少,从而使机体能容易遭受过氧化损伤【】己糖胺旁路主要通过上调细胞因子转化生长因子,的表达,从而参与肾脏的病理改变的过程【而蛋白激酶,可激活丝裂原活化蛋白激酶,通路,导致系膜细胞的细胞周期紊乱,长时间停留于促进系膜细胞增生的期,结果导致加速糖尿病肾病的进展【。此外,过量的,表达的上调担引,而后者在糖尿病肾病发展可造成血管紧张素过程中起到的作用不言而喻。由此可见,糖尿病时氧化应激导致糖尿病肾病是一个复杂的病理生理过程,高糖时产生的可与其他物质互为因果,共同参与糖尿病肾病的发生发展。因此,体内的水平可客观地反应体内氧化应激的严重程度,并可作为判断预后的一项重要指标。但由于具有高反应性,可以迅速的与周围物质反应,故直接准确检测体内数量在技术上还存在很多困难。目前体内氧化应激的定量描述主要依赖于与山西医科大学硕士学位论文脂质、核糖核酸、蛋白质等物质发生反应后的氧化产物的测定。羟基脱氧鸟苷是受到氧化攻击后的产物,其产生的原因是由于攻击了鸟嘌呤的第位碳原子而形成的碱基修饰产物。近年来受越来越多的关注,不仅是由于与正常人相比,糖尿病。肾病患者,尤其在伴有肾功能异常的患者体内的水平是显著增高的,反映了糖尿病及患者体内氧化应激水平的增高刃】,还因为该物质可直接从尿液中检测,且检测成本相对较为低廉,因此可能会成为今后临床评价氧化应激水平的一项重要指标。体内清除自由基的生物酶在氧化应激反应的过程中大量消耗,因此,这些酶的定量检测也可从一个侧面反,是体内清除自由应氧化应激的严重程度。超氧化物歧化酶基的重要生物酶,但其作用不仅限于清除体内氧自由基。有研究表明,糖尿病大鼠成模及周时,其肾组织内活性较对照组显著下斛引。另外,有人通过免疫沉降技术发现,糖尿病的大鼠肾脏组织内糖基化/非糖基化的比例明显升高,这一研究从侧面印证了肾脏组织活性的下降。因此,也可作用一个衡量机体或局部组织内氧化应激严重程度的指标。类似物最早是由生活在美国西南部及墨西哥北部地区的一种蜥蜴唾液中分离出来的,随着生物科技的不断发展,目前已经实现了生物合成及量产。其分子结构与高度同源,因此可产生许多类似于的生物学效应,主要有、刺激胰岛素分泌,且这种作用为葡萄糖依赖,即只在血糖异常升高时产生作用,因此可避免低血糖的发生,具有良好的临床安全性、可通过减少胰岛细胞的凋亡起到保护胰岛功能,延缓糖尿病进展的作用、减少糖异生,促进糖原合成,从而起到不依赖胰岛素的降糖作用、可直接抑制饥饿时胰高血糖素的分泌、抑制食欲,减缓胃排空。此外,一可能还具有营养神经、预防治疗阿尔茨海默病,及心血管方面的某些作用罐,因此,未来一的临床应用很可能不仅仅局限于糖尿病的治疗。但目前的研究主要集中在控制血糖、保护胰岛功能等方面,关于与糖尿病肾病的关系的研究还略显欠缺。基于目前糖尿病肾病的治疗现状,寻找一种有效治疗糖尿病肾病的新途径显得十分重要,而。由于其受体在体内的广泛分布,可产生广泛的生物学效应,这可能会成为解决这一问题的突破口。本实验中治疗组糖尿病大鼠与对照相比,一般状况较好,血糖、时尿蛋白定量、血脂等生化指标均有不同程度的好转,肾脏组织病理改变明显减轻,说明通过一为期周的治疗,实验动物糖尿病肾病的进展确实被延缓了。而通过免疫组化技术观察,治疗组肾脏组织水平明显降低,说明可减轻氧化应激引起的山西医科大学硕士学位论文损伤,与对照组相比,治疗组表达水平明显增高,说明在病程中,治疗组大鼠的肾脏组织消耗更少的,即抗氧化酶,也可从一个侧面印证了经过一的治疗,大鼠肾脏组织局部氧化应激水平的明显下降。综上所述,确实可以通过降低肾脏组织局部氧化应激的水平,减轻其诱导的组织损伤,从而起到预防及治疗糖尿病肾病的作用。关于一抗氧化的机制,一方面来自于血糖的改善,另一方面,肾脏中可能存在的特异性受体,直接与该受体结合,产生一系列生物学效应,这些效应可阻断或减少自由基的产生,抑或抑制引起组织损伤通路中的一个或几个环节,避免过量自由基造成的组织损伤,减少有害物质在肾小球的沉积,从而起到肾脏保护的作用。但是目前国内外研究的焦点集中在类似物的降糖作用及对胰岛细胞的保护作用,关于对其他器官影响的研究还不够深入,加强这方面的研究可能会对这类药物的应用提供新的思路。总之,本研究提示,不仅可以改善血糖、血脂等生化指标,还可以通过减少糖尿病肾病大鼠肾脏组织的氧化损伤,减轻肾脏组织病理改变,可能会起到延缓糖尿病肾病的作用,其具体的作用机制尚不十分明确,药物与受体的特异性结合可能参与其中。随着研究的不断深入,糖尿病肾病的治疗可能将不再是一道困扰我们的难题,如何降低糖尿病是肾脏组织氧化应激的水平可能会成为今后糖尿病。肾病治疗及预防的关键。结论、一类似物能有效改善糖尿病肾病鼠血糖、小时尿蛋白定量、血脂等生化指标。、类似物干预糖尿病肾病大鼠,可使肾脏组织上调、的表达下调。、类似物的这种作用呈剂量依赖。山西医科大学硕士学位论文参考文献【,【】,【,【,【,一【】,【,【,【,【山西医科大学硕士学位论文,【】,【】,【】,【】,【】,【陈玲,贾汝汉,丁国华,等缬草油对型糖尿病人鼠肾脏的保护作用及其机制探讨【】中华肾脏病杂志,【】,【】【】,【山西医科大学硕士学位论文,【】【常洁,姜宗培,余学清氧化应激及其在糖尿病肾病中的作用【】国际内科学杂志,【,/【】,一【,一一【】,鲫,【,/【】山西医科大学硕士学位论文综述糖尿病肾病的发生发展与氧化应激【摘要】近年的研究结果表明,糖尿病引起的体内氧化与抗氧化的失衡是导致糖尿病慢性并发症的重要原因。多种因素参与了糖尿病中的氧化应激损伤,促进了糖尿病肾病的发生发展。降低体内氧化应激水平将为糖尿病慢性并发症的预防和治疗提供新的方向和途径。本文将就近年氧化应激与糖尿病。肾病发生发展关系的研究做一综述。【关键词】糖尿病肾病氧化应激活性氧簇糖尿病。肾病,是糖尿病常见的微血管并发症,其患病率逐年提高,造成了巨大的社会经济负担。其发病机制较复杂,属多因素致病,多个致病基因或病理生理环境被证实可能参与其中。近些年,氧化应激在糖尿病肾病的发生发展过程中的作用逐渐引起学术界的重榭。氧化应激概述英国学者认为,衰老的本质是由于自由基攻击生命大分子引起的细胞损伤,这种损伤同时可诱发肿瘤及其他多种疾病,即所谓的自由基衰老学说。直到年,美国学者等首先提出了氧化应激的概念,同时指出的学说中所存在的缺陷,从此人们对氧化应激有了一个初步的认识。氧化应激是指机体各种有害刺激的作用下产生大量的高活性分子如和活性氮簇,超出了机体抗氧化系统所能承受的范围,氧化及抗氧化系统之间的动态平衡被打破,引发一系列的不良后果。包括超氧阴离子、羟自由基和等活性氮簇包括一氧化氮、二氧化氮和过氧化亚硝酸盐等。而体内的抗氧化系统可分为两类一类是酶抗氧化系统,包括超氧化物歧化酶,、谷胱甘肽过氧化物酶,、过氧化氢酶,等另一类是非酶抗氧化系统,包括维生素、维生素、仅一硫辛酸、类胡萝卜素、褪黑素、谷胱甘肽、微量元素铜、锌、硒等。氧化应激导致糖尿病肾病的机制持续高糖状态产生过量的主要由线粒体产生,糖尿病是过量的与高糖状态下线粒体功能的紊乱有着密不可分的关系。过量的电子供体可显著提高了线粒体膜内外电化学势能,使超氧化物生成显著增加了】。且高糖环境培养的血管内皮细胞产生过量的,可被电子传递链复合体抑制剂、解偶联蛋白和锰超氧化物歧化酶所抑制引。除此之外,高糖时肾小球足细胞中的脂肪氧化酶途径的激活也可产生,从而加山西医科大学硕士学位论文剧的体内氧化抗氧化的失衡引。过量引起糖尿病。肾病的机制有学者【提出,线粒体电子传递链过氧化物的过量产生可引起糖尿病肾病及多种血管损伤,。生成增加可引起途径、多元醇途径、己糖胺旁路及蛋白激酶途径的激活,造成组织损伤,最终导致。途径高糖状态下,糖与蛋白质、脂质和核酸的非酶反应形成,可产生酶活性降低、蛋白质交叉连接或降解、细胞毒途径的激活及核酸的损伤等一系列有害的生物学效应。蛋白非酶糖化生成梭甲基赖氨酸,可沉积在扩增的系膜区和增厚的肾小球毛细血管壁,在早期糖尿病肾病中发挥重要作用。发挥其生物学效应的主要途径是通过与其特异受体结合实现的。在各种肾脏细胞中均有表达,可激活核因子一曲,后者在高糖情况下可上调系膜细胞的表达,最终导致肾小球和肾小管的损伤【。除此之外,还可作为内皮粘附受体直接参与炎症,促进白细胞的集聚【】。在肾小管细胞,的激活可促使小管细胞转变为成纤维细胞,引起肾小管的萎缩及问质的纤维化。另外,的相互作用也可增加形成,进而通过血管紧张素转化生长因子。信号途径上调衣纤连蛋白的表达,分别引起系膜细胞肥大和肾小球硬化导致糖尿病肾病的发生,形成恶性循环。另外,可增力在系膜区和小管细胞的表达,从而刺激胞外基质蛋白的产生,主要包括纤维连接蛋白及,和型胶原等。同时可通过抑制基质金属蛋白酶,阻止胞外基质的降解。动物研究表明,糖尿病肾病早期血管内皮生长因子表达增高,拮抗可减轻糖尿病大鼠的高滤过、白蛋白尿及肾脏肥大,而可促进表达。多元醇途径多元醇途径的增强可以消耗大量,使得还原型谷胱甘肽和一氧化氮生成减少,自由基生成过多,氧化应激易感性增加。此外,该途径可使胞浆的比率增高,抑制三磷酸甘油醛脱氢酶的活性,导致丙酮醛的前体增多,从而引起生成增多。己糖胺旁路己糖胺旁路的增强主要通过增加造成肾脏损伤。葡萄糖转化成一磷酸果糖后,部分在谷氨酰胺果糖磷酸氨基转移酶作用下生成一磷酸葡糖胺抑伟后发现高糖诱导的的转录增加被抑制。磷酸葡糖胺可为需要乙酞氨基葡萄糖的物质提供底物,而乙酞氨基葡萄糖可修饰,刺激转录引。此外,己糖胺旁路增强还可上调一些刺激因子,反向激活启动子。途径细胞内高糖可是磷酸二羟丙酮增多,引起二酰基甘油增加,激活多个亚型,已经证明其抑制剂可缓解糖尿病肾病。可通过激活丝裂原活化蛋白激酶山西医科大学硕士学位论文通路,增抑癌基因的表达,而后者主要使系膜细胞在高糖情况下经过短期的增殖后,停止在细胞周期的期,其表达证据可促进系膜细胞的增殖【引。在内皮细胞,还可以通过激活来激活许多炎症基因。同时,细胞和动物实验也表明,。或可抑制高糖诱导的的激活其他大量的临床试验证实血管紧张素转换酶抑制剂或血管紧张素受体拮抗剂类药物可以显著延缓糖尿病肾病的发展,减少蛋白尿,因此在糖尿病肾病的发生,发展中的作用不言而喻。研究表明,可以诱导多种致炎因子,细胞因子和生长因子的表达,通过高滤过,肾小球超滤屏障非选择性孔径开放,修饰基底膜和使足细胞的表达下降来参与蛋白尿的形成。高糖刺激可引起间质细胞和小管细胞中肾素和的表达,造成肾脏局部】的高浓度,近来,试验研究发现参与高糖诱导的的上调。体内氧化应激水平的评价方法的代谢产物自由基具有高反应活性性,能够迅速与周围物质发生反应,决定了其半衰期短暂,这使得直接检测这些自由基的水平非常困难,而自由基与、蛋白质和脂类反应后的产物,可作为反映自由基水平或者氧化应激的标志物。脂质过氧化产物是目前应用较多的反映糖尿病。肾病氧化还原状态的指标,包括丙二醛、一羟基烯醇和一异前列腺素。但这个指标都不能非常准确地反映肾组织中脂质过氧化产物水平,丙二醛、羟基烯醇是前列腺素代谢的副产物,异前列腺素则受组织花生四稀酸代谢的影响,丙二醛是脂质过氧化的最终分解产物,丙二醛具有强交联性质,能与含游离氨基的蛋白质、核酸等交联形成碱,该交联物具有荧光性质,难溶于水,不易排除而堆积,以至妨碍蛋白质、核酸及细胞功能、加速组织老化。丙二醛等尚可进步氧化修饰低密度脂蛋白,使得低密度脂蛋白对细胞的毒性作用明显增强,与动脉硬化的发生显著相关,因此该物质对微血管并发症亦起一定作用。丙二醛是反映体内氧化应激状态较可靠、稳定的指标,因此,体内丙二醛含量可以通过反映脂质过氧化的程度,间接反映出细胞过氧化损伤的程度”。羟基脱氧鸟苷,是受