elisa法检测水产品中氯霉素的残留量 毕业论文

毕业论文（设计）题目ELISA法检测水产品中氯霉素的残留量指导老师专业班级生物技术及应用0701姓名学号2010年5月30日A1A0A2A3A4A5A6A0A7A8A10A11A9A13摘要采用酶联免疫吸附试验法对4个水产样品氯霉素的残留量进行检测，判断其是否符合国标限量要求，以便为其进入市场提供监测依据。研究主要利用溶剂萃取技术对样品进行预处理，再利用酶联免疫吸附试验法ELISA法测定样品中残留氯霉素含量；检测结果表明，4个水产样品（花莲、鲈鱼、甲鱼、南美白对虾）中氯霉素含量依次为0011、0011、0014、0009UG/KG，均低于国标限量值03UG/KG，符合动物源性食品出口欧盟和美国等国家的要求，可以进入市场。关键词ELISA法；水产品；氯霉素；残留量A1A0A2A3A4A5A6A0A7A8A10A11A9A13目录引言11材G7021G994G1214G3132G2111G4466验样品G211G21G4466验试剂G2113试验G1214G3132G21G21G7053法3G211样品预处理3G21G21酶联免疫检测33结果G994G2010G7524431标G1946G7366G13459的G2058G132843G21样品中氯霉素G8999G5242测定G2433G2164标G3250G6922G10587G4466验G254G5647结G994G16764G16782G26G2454G13783G7003G10498G27A1A0A2A3A4A5A6A0A7A8A10A11A9A13A12A14A15引言酶联免疫吸附试验（以G991G12628G12228ELISA），是酶免疫测定技术中G5224用G7380G5203的技术1。G14270G1186ENGVALL和PERLMAN（1971）G20330次G6265G17959G5326G12447酶联免疫吸附试验（ENZYMELINKEDLMMUNOSORBENTASSAYS,ELISA）以G7481，G11013于ELISAG1867G7389G5567G17907、G6947G5875、G7143于标G1946G2282等G1260G9869，G1363其G5483G2052G17817G17907的G2469G4649和G5203G8879的G5224用。G3534G7424G7053法是G4570G5062G11705的G6251G2419G6122G6251G1319吸附G3324G3278G11468G17745G1319（G13870G14531G1069G9923G5506量G2465G5224G7507）表G19766，G1363酶标G16772的G6251G2419G6251G1319G3324G3278G11468表G19766进行G2465G5224，用G8939G9080法G4570G9094G11468中的G9228G12175G6116G2010G8939G195122。ELISAG7053法的G3534G7424G2419理是酶G2010G4388G994G6251G1319G6122G6251G2419G2010G4388G1861G1227结合，G8504G12193结合G993G1262G6925G2476G6251G1319的免疫G4410G10317性，G1075G993G5445G2721酶的G10995物G4410G8975性。G8504G12193酶标G16772G6251G1319可G994吸附G3324G3278G11468G17745G1319G990的G6251G2419G6122G6251G1319G2469G10995G10317G5334性结合。G9416G2164G5225物溶G9094G2530，G5225物可G3324酶G1328用G991G1363其G6164含的供G8694G1319G11013G7092G14406的G17836G2419G3423G2476G6116G7389G14406的G8699G2282G3423，出G10628G20080G14406G2465G5224。G3252G8504，可G17902G17819G5225物的G20080G14406G2465G5224G7481判定G7389G7092G11468G5224的免疫G2465G5224，G20080G14406G2465G5224的G9157G8985G994标G7424中G11468G5224G6251G1319G6122G6251G2419的量呈正比。G8504G12193显G14406G2465G5224可G17902G17819酶联免疫检测G1214（酶标G1214）进行定量测定，这样就G4570酶G2282G4410G2465G5224的G6947G5875性和G6251G2419G6251G1319G2465G5224的G10317G5334性结合起G7481，G1363ELISAG7053法G6116为一G12193既G10317G5334又G6947G5875的检测G7053法。根据ELISAG6164用的G3278G11468G17745G1319ELISAG7053法可G2010为三大类G3423一是采用G13870G14531G1069G9923G5506量G7507为G17745G1319的ELISA，即我们G17902常G6164指的ELISA（G5506量G7507ELISA）；另一类是用硝酸纤维素膜为G17745G1319的ELISA，G12228为斑G9869ELISA（DOTELISA）；再一类是采用疏水性G13870脂布G1328为G17745G1319的ELISA，G12228为布ELISA（CELISA）。G3324G5506量G7507ELISA中，又根据其性质的G993同G2010为间接ELISA、双G6251夹心ELISA、双夹心ELISA、竞争ELISA、阻断ELISA及G6251G1319捕捉ELISA3。G7424次试验G6164要用G2052的是竞争性酶联免疫吸附试验（即竞争ELISA），ELISA测定的G3534础是竟争性酶联免疫G6251G2419G6251G1319G2465G5224，G6164G7389的免疫G2465G5224都G3324G5506孔中进行4。当G2164入氯霉素酶标G16772物、标G1946G6122样G9094、G6251G1319兔IGG即兔G6251氯霉素的G6251G1319G2530，存G3324于样品G6122标G1946溶G9094中的G9228G12175氯霉素和酶标G16772氯霉素G11468互竞争G994氯霉素G10317G5334性G6251G1319的结合位G9869。G11013于G5506孔G7507中G5062包被G7389羊G6251兔IGG的G6251G1319，G6164以氯霉素G6251G1319G994羊G6251G1319G11468结合而被G3278G11468G2282G3324G5506孔中，G994氯霉素G6251G1319结合的氯霉素酶标G16772物G1075G3252G8504被保A16A17A18A19A20A21A22A17A23A24A25A26A27A28A29A30A31留G3324G5506孔中，没G7389被结合的氯霉素酶标G16772物和未G3278G11468G2282的物质G3324G8939G9080步骤中被去G19512。之G2530G4570G5225物溶G9094G2164入G5506孔中孵育,氯霉素酶标G16772物中的酶G17902G17819G994G5225物G2465G5224，G4570G7092G14406的G5225物催G2282为蓝G14406的产物,G2164入G2465G5224终止G9094可G1363G20080G14406G11013蓝G2476黄。用酶联免疫检测G1214（酶标G1214）G33244G240NM处测量吸光G5242值，样品中氯霉素G8999G5242G994吸光G5242值G6116G2465比。氯霉素CHLORAMPHENICOL,G12628G12228CAP，又G12228氯胺G14531醇,是一G12193G5203谱G6251G10995素5。G11013于其G1227廉及G1260良的G6251菌性、稳定的药性，曾G3324一段时间内G1328为饲G7021添G2164剂和细菌性疾病的治疗用药，G10317别是G3324水产品中，G1363用范围较G52036。但氯霉素对骨髓造血机能G7389抑G2058G1328用，可引起血小G7507减少性紫癜、粒细胞缺乏症、再G10995障碍性G17151血，G14157G13972、G14157G8911、食G8454减G17876，口G14120G12908膜G1817血、G11152G11183、G12976G9878、口G16294G9826和G14304G9826等。另G3818G17836可引起G16282G12082G13475G9826、G16282G2159障碍、G3822G2469性G12082G13475G9826、G12082G13475性G13831G13855以及G1017G18337G3845G11508。G3252G8504，动物源性食品中氯霉素的残留G2475G2052G1002G11040G2520国和G3332G2318的G20652G5242G18337G16282。欧盟、美国、G2164G6355大等国家G12117止G3324食用动物中G1363用氯霉素，欧盟G16280定进口食品中氯霉素G993G5483检出，G7053法检出限要求为03UG/KG7。G11458G2081G1856布的氯霉素检测技术G7053法G7389G5506G10995物法、G6930G4568免疫法、G8680G11468G14406谱法G42C、G9094G11468G14406谱法G43PLC、质谱G2010G7524等8,这G1135G7053法G2520G7389G1260G2167。酶联免疫法ELISAG1867G7389G10317G5334性G5390、G9801G6947G5242G20652，样品预处理G12628G2345等G1260G9869，G1000G993G19668要G3809G7446的G1214G3132G16786G3803，能G3324G11713G11713的G1972小时内检测G1972G2325个G2052G990G11346个样品，G19762常G17878合大G6221量样品的检测G5049G13289。酶联免疫检测法ELISA又G12228酶标法。G7424G4466验采用竞争ELISA法对鱼、虾类水产品中的氯霉素的残留量进行G1114测定。1材料与仪器11实验样品花莲（G13546G2507为1G2507样品）；鲈鱼（G13546G2507为2G2507样品）；甲鱼（G13546G2507为3G2507样品）；南美白对虾（G13546G2507为4G2507样品）。A32A33A34A35A36A37A38A39A40A41A42A43A44A45A46A47A45A46A48A49A50A51A52A53A54A55A53A54A56A57A5812实验试剂氯霉素检测试剂G11430（G14667G1860EURODIAGNOSTICNG1856G2508），G1069酸G1069G18243AR，正A59A60A61A62A63A64A65A60A66A67A68A69A70A71A72A73A74G5061G9931（AR）；其中检测试剂G11430包G6336128孔G7507，包被G7389G6251兔IGG的羊G6251G1319；6G10954氯霉素标G1946G8999G13565G90941ML；酶结合物溶G9094CAPHRPO；氯霉素G6251G1319G8999G13565G9094ANTICAP；G19658标G1946G13543G1926G9094（ZEROSTANDARDBUFFER）；G8939G9080G13543G1926G9094（RINSINGBUFFER）；G5225物溶G9094（SUBSTRATESOLUTION）；样品G12244G18334G13543G1926G9094。13实验仪器G12175心机（802，G18341G3375市G5670G1028G1214G3132G2058造G7389限G1856G2508）；G2010G7524G3837G5191（PL202S，G990G9035G1260G9018G12197G4410G1214G3132G7389限G1856G2508）；G5506G3423G9469G9077G9163合G1214（VX200LABNET，G990G9035G3837呈G10995物G2319G4410）；G8706G2573G1214（NEVAP111，美国ORGANOMATIONG1856G2508）5；酶联免疫检测G1214（酶标G1214，550，G2283G1152利G5259G17810G3319G12197技G2469G4649G7389限G1856G2508）；G12239G9094G6262（NX16022UL，美国LABNET）。2方法21样品预处理样品G16311G1935G4570G6930G3324G1924G12677G1931G1935G4472的样品取出，G4472G9213G991G16311G1935。样品提取G12946G11842G12228取30GG13475G16311G1935G2530的样品G1427910MLG1867G3634G10639G10839G12175心G12661中G2164入6MLG1069酸G1069G18243，均质3MING6930G136343060MING9163G2260，2000R/MING12175心10MIN用G12239G9094G6262G12239取2MLG990G9177G9094G1427910MLG10639G10839试G12661中用G8706G8680G332450水G9032中G2573G5190。G2164入1ML正G5061G9931溶G16311脂G13950、G14406素等G7446质G2164入1ML样品G12244G18334G13543G1926溶G9094（G1363用G2081G19668用G14988G20323水G12244G183344倍）G5567G17907、G1817G2010振荡G9163G22602000R/MING12175心4MIN（若G2469G10995乳G2282G10628象，G19668G4570试G12661G6930G13634于80水G9032中5MIN，然G2530再G12175心）取G991层水G11468溶G9094于塑G7021小G12175心G12661内，用于检测G2010G7524。22酶联免疫检测试剂G11430G3250G9213G1363用之G2081G5224先G4570试剂G11430及G11430内G6164G7389试剂恢G3809G14279G4472G92132025（提G208130G2010钟G1186G1924G12677取出即可）。试剂G1946G3803G4570G1935G5190品（又G12228氯霉素酶结合物CAPHRPO）和氯霉素G6251G1319G8999A75A76A77A78A79A80A81A76A82A83A84A85A86A87A88A89A90G13565G9094ANTICAPG2010别G2164入4MLG19658标G1946G13543G1926G9094G1817G2010溶G163116，G3803用。G990G7507G3324G5506孔G7507中按顺序依次G2164入100ULG19658标G1946G13543G1926G9094（ZEROSTANDARDBUFFER，G1328为空白对照）50UL标G1946G8999G13565溶G9094（2，05，02，01，005，0025NG/ML和G19658标G1946溶G9094）50UL处理好的样品溶G9094再G3324G990诉G2520孔中依次G2164入25ULG12244G18334G1114的酶结合物溶G909425ULG12244G18334G1114的G6251G1319溶G9094摇G75071MIN封G7507，4G991G3324暗处G9213育1小时。G8939G7507G4570G5506孔G7507G990端朝G991倒空G2520孔G2530，再G5191稳G5567G17907向G991垂直甩动，并G4570G5506孔架倒G13634G3324吸水纸G990拍打以G19512去孔中的G9094G1319，吸取G8939G9080G13543G1926G9094（RINSINGBUFFER，20倍G8999G13565，用G2081G19668用水G12244G1833420倍）250UL/孔注入全部G7507孔，再次倒掉G5506孔中的G9094G1319。G18337G3809G990述操G13283遍。注意一定要把孔中的G9094G1319拍G5190，若孔中G7389G8680泡用枪头捅破。G4570100ULG5225物溶G9094（SUBSTRATESOLUTION，即时可用）G2164入G2520孔，G4472G9213（25）暗处G9213育30MIN。G7380G2530G4570100UL终止G9094（STOPSOLUTION，即时可用）G2164入G2520孔，G9163G2260G2530，G332410MIN内用酶标G1214G3324450NM处测量吸光G5242值。3结果与分析31标准曲线的制作采用酶标G1214测定吸光G5242值，测定结果是450NM处吸光G5242G7380大。以标G1946溶G90940000（G19658标G1946）、2000、0500、0200、0100、0050、和0025NG/MLG252050UL，标样的孔中均依次G2164入25UL酶结合的氯霉素ACPHRPO和25UL氯霉素G6251G1319溶G9094ANTICAP，以100ULG19658标G1946G13543G1926G9094G1328为空白试样进行对照G4466验。G18337G3809测定2次。以标G1946溶G9094包G6336G19658标G1946A0扣G19512空白G2530的吸光G5242AG1328为测定结果10，如表31G6164示。A91A92A93A94A95A96A97A92A98A99A100A101A102A103A104A105A106表31氯霉素检测标准曲线折算对应测定值表以氯霉素G5191均G8999G5242的对数值为横坐标（X），标G1946溶G9094吸光G5242G994G19658标G1946溶G9094吸光G5242的G11346G2010比值A/AA107为纵坐标（Y），G11013计算机系统G3250归统计G2058G5483标G1946G7366G13459如图31G6164示。图31标准曲线G11013图31及计算机G3250归G6164G5483G332400252000NG/ML范围内，样品中氯霉素含量STANDABSORBANCE1ABSORBANCE2MEANABSABSBLANCMAXCONC（NG/ML）0208621742088100020348035503101481750506790690064330805402089109720890426023011153114911095310110051345141113366400050025158016021549742002BLANC00400044A91A92A93A94A95A96A97A92A98A99A100A101A102A103A104A108A106（X,NG/ML）G994吸光G5242之比（YA/A0,）的关系G7366G13459为Y13653LNX22467G11468关系数R09954。32样品中氯霉素浓度的测定G3324G2058G1328标G1946G7366G13459的同时，吸取花莲（1G2507样品），鲈鱼（2G2507样品），甲鱼（3G2507样品），南美白对虾（4G2507样品）的样品提取G9094G252050UL做同步G4466验，G2520孔中均依次G2164入25ULCAPHRPO和25ULANTICAP，以100ULG19658标G1946G13543G1926G9094G1328为空白对照。G18337G3809进行2次G4466验，根据G7053程Y13653LNX22467计算G5483G2052试样溶G9094和G2419待测样品中氯霉素含量，结果见表32。表32样品中氯霉素含量检测结果G13546G2507检测样品氯霉素检测含量NG/ML平均检测含量国标限量12NG/MLUG/KG03UG/KG1花莲000900120010500112鲈鱼00120010001100113甲鱼001400130013500144南美白对虾0009000900090009G11013表32可以看出，1G2507样品花莲检测出的氯霉素G8999G5242为0011UG/KG，2G2507样品鲈鱼检测出氯霉素的G8999G5242为0011UG/KG，3G2507样品甲鱼检测出的氯霉素G8999G5242为0014UG/KG，4G2507样品南美白对虾检测出的氯霉素G8999G5242为0009UG/KG。检测结果表明，4个G6164测试的水产样品（花莲，鲈鱼，甲鱼，南美白对虾）中氯霉素含量均低于国标限量值03UG/KG，符合动物源性食品出口欧盟和美国等国家的要求，可以安全进入市场。33加样回收率实验G45704G2507样品南美白对虾G1946G11842G12228取30G于10MLG10639G10839试G12661中，G18613份，G2010别G2164入氯霉素标G1946G909410NG/ML1200UL，G2164入60MLG1069酸G1069G18243，G3324G17902风橱内G9163合10MIN。按21进行样品预处理，然G2530按照22进行G990G7507检测。计算G2164标G3250G6922G10587，G4466验结果如表33G6164示。A109A110A111A112A113A114A115A110A116A117A118A119A120A121A122A123A124表33氯霉素加样回收率检测结果G2419样测定值（NG/ML）添G2164量（NG/ML）测定值（NG/ML）G3250G6922G10587000904037892300090403729000009040384938G1186表33可见，氯霉素的G2164样G3250G6922G10587G3324900938之间，G5191均值为920，可见G3324G4466验G17819程中氯霉素的损G3845量较少。4总结与讨论利用酶联免疫吸附试验法（ELISA法）检测动物组织中氯霉素的残留量。ELISA是酶标G16772的G6251G2419G994G6251G1319进行的G6251G2419G6251G1319G2465G5224。G11013于酶的专一性催G2282G1328用，G5506孔G7507G990G3822份样品同时检测，故操G1328G12628G2345，G9801G6947G5242、G12946密G5242较G20652。G7424G4466验的G7053法检出限为03UG/KG，G3250G6922G10587G3324900938之间，G5191均值为920。G1000G33240025200NG/ML测量范围内呈良好的G13459性关系，G11468关系数为09954。氯霉素含量X,NG/MLG994吸光G5242之比（YA/A0,）的G13459性G7053程为Y13653LNX22467。结果表明，采用酶联免疫法测定，G993仅检测限G17810G2052NG级，而G1000G3250G6922G10587、G12946密G5242都能满足要求国际标G1946，尤其是操G1328G12628G2345，检测时间G11713（仅G196682H），G6164以G19762常G17878合大G6221量样品的筛选检测。但G13783虑G2052酶联免疫法检测的G5445G2721G3252素较G3822，G7143出G10628假阳性结果，G7380好采用G7424法筛选，阳性样品再用GCMS联用技术G6122HPLCG11842证，则可获G5483更G2164G1946G11842的检出结果10。随着国际健G5259组织对氯霉素的G1017格控G2058，尤其是日G7424肯定列表G2058G5242的出台更是大大提G20652G1114G1002G11040G2520国对违G12117药物的G18337G16282。我国G1075G4466行G1114氯霉素G19658检出量的G16280定。G3252G8504，G5326G12447氯霉素的G5567G17907G7389效的检测G7053法，G2058止G8504药物的G19762法滥用，保障人民的健G5259和G10995命安全，维护我国G3324国际贸G7143中的形象和G3332位意义G18337大。A125A126A127A128A129A130A131A126A132A133A134A135A136A137A138A139A140参考文献1朱