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文档简介
目的基因验证,酶切验证方向,Sense,Anti-sense,Promoter,Promoter,Coding sequence,Coding sequence,NOS,NOS,双酶切,单酶切,酶切位点的选择,1、载体上有,目的片段内部也有,但最好都分别只有一个位点;2、目的片段上的酶切位点不要位于片段中央附近,要选取能够区分大小的位点;,1、用连接的两种酶验证;2、参照单酶切。,酶切验证方向的方法很灵活多变,具体情况具体分析。,pCxsn-PtWRKY60的方向验证,ATGGATGTCTTTCCCTCTTGCAAAGAAAAGGTGGAAGCTCTTCAATTCGAGTTGGAACACAGGCAGAAAGAGAATGAAAGTCTTAGATTTATGCTTGGAGTTATGACCAGAAGATTCAGCATTCTTCAAGCCGAGATTCAAGAAACCGAAGAACATCAACAAAAGACAGCTAGCAACTTAGCGGATGGAGATCAAGCTTGTCATGAAATCCTTGACTCGAACAAGAGAGCAAGATTTGAAGTTCCCATAACCAAGGCATCGAGAATCTTGGTGAGAAGTCACTCCAATGACAAGAGCCTGATTGTGAAAGATGGATATCAATGGAGAAAGTATGGCCAGAAGGTTACTAAGGATAACCCATCACCTCGAGCTTACTTCAGGTGTTCCATGGCTCCTAATTGCCCCGTCAAGAAGAAGGTCCAAAGATGTGTAGAAGATGATTCAGTACTTGTTGCAAGCTATGATGGAGAACACAACCATGAACCCAATGGTTCACATGGACAATATTTATGTTCTCCACATACCTCATCATCAAAAATTTCCATAACTAATCATGTCCTCAAGTGTCCAATCGAAATTCCTCCTCTTCAACCATCTATAGCTCTTGATCTTACTCTTTCAAGTCCCAGTAATCAACAGAAGGAAAATCCTTCTAAAAGATCCATGGAAGACTGCGGCAAGATTAATAATAACTGCAACAAGAACTACATTGAAGAATATGTGGCATCTTTAACTAAAGATCCTACCTTCTCTGTAGCTTTAGCTGCGGCTGTTGCAAGTTCAATGAGTGACCTGTCTTCGTCAAGAATGCTGTGA,PtWRKY60 CDS序列,pCxsn载体,NEBcutter分析片段上的酶切位点,10ul体系酶切pCxsn-PtWRKY60,Plasmid: 8.75ul; M buffer: 1ul; HindIII: 0.25ul.37水浴2-3h,1541bp,1117bp,AS,S,测序,测序的样本可以为:菌液、质粒、PCR产物、其他;,测序要提供测序引物;,一次反应大约可测800bp的长度,如果目的片段超过这一长度可以选择测通、双向,或者是单向walking等
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