[生物医药论文精品a]微量量热法研究清开灵注射液对金黄色葡萄球菌代谢的影响

A1A0A2A3A5A6A4A7A8A9A10A11A12A1A0A2A3A1430625042A15A13A6A4A16A17A18A19A20A21A22A23A24A2A1406072P58A15A13A6A4A25A26A11A12A1A0A27A28A2A3A1430701109A15A30A29A31A32A5A34A33A35A37A38A371983A10A36A37A40A39A41A42A43A37A16A18A12A44A45A37A47A46A48A49A16A18A50A51A52A53A22A23A54A55A50A56A57A59TEMAILWYS0102163COMA60A58A30A29A5A62A61A63TEL01066933322EMAILPHARMACY302126COMA65A64A66EMAILDUXXCDEORGCN1微量量热法研究清开灵注射液对金黄色葡萄球菌代谢的影响A67A68A691,2A70A71A721,2A70A73A741A70A75A761A70A77A78A791A70A80A81A823A70A83A842A851A86A87A88302A89A90A91A88A92A93A94A95A96A97A98A99100039A1002A101A102A92A89A93A103A104A93A104A90A97A101A102611137A1003A105A106A107A108A93A108A109A110A111A112A113A93A108A114A115A92A116A97A98A99100038A117摘要目的研究清开灵注射液对金黄色葡萄球菌生长代谢的影响，探索建立基于生物评价的清开灵注射液质控新方法。方法采用微量量热法，考察药物作用于细菌的生物热效应，对所测得的热功率输出曲线进行对比分析和计算机拟合，抽提有效参数，得出系列热动力学参数信息。结果在一定范围内（0150L），随剂量增加，金黄色葡萄球菌生长曲线呈“下降、后延”趋势，且参数T1、T2、K1、P1、P2、I均与剂量呈较好的线性关系，清开灵注射液对金黄色葡萄球菌的半数抑菌量为97698L，最佳抑菌量为164L；不同厂家及同厂家不同批次清开灵注射液样品的生长曲线G4396在不同G12255G5242G5058G5334。结论清开灵注射液对金黄色葡萄球菌有较G5390的抑G2058作用，微量量热法G2499作为清开灵注射液的质量评价的一G12193新方法。关键词微量量热法；清开灵注射液；金黄色葡萄球菌；热功率输出曲线MICROCALORIMETRICSTUDYONTHEMETABOLICACTIONOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUSAFFECTEDBYQINGKAILINGINJECTIONWUYANSHU1,2A118ZHANGQIAN1,2A118JINCHENG1A118YANDAN1A118XIAOXIAOHE1A118DUXIAOXI3A118WANGJIAN21PLAINSTITUTEOFCHINESEMATERIAMEDICA,302HOSPITALOFPLA,BEIJING100039,CHINA2PHARMACYCOLLEGE,CHENGDUUNIVERSITYOFTCM,CHENGDU610075,CHINA3CENTREFORDRUGEVALUATION,SFDA,BEIJING100038,CHINAABSTRACTOBJECTIVETOINVESTIGATETHEMETABOLICACTIONOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUSAFFECTEDBYQINGKAILINGINJECTION,ANDSEARCHFORNEWMETHODBASEDON2BIOLOGICALASSESSMENTMETHODSTHEGROWTHTHERMOGENICCURVESWEREDETERMINEDBYMICROCALORIMETRYANDANALYZEDBYCOMPUTERRESULTSINTHECONCENTRATIONRANGEOF0150L,THEGROWTHTHERMOGENICCURVESOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUSWEREDECLINEDANDREMOVEDBACKWITHINCREASINGDOSAGEOFQINGKAILINGINJECTIONTHEMAINPARAMETERSK1、P1、P2、T1、T2、IANDTHEDOSAGEOFQINGKAILINGINJECTIONHAVEGOODCORRELATIONTHE50INHIBITINGQUANTITYIS97698L,ANDTHEOPTIMALINHIBITINGQUANTITYIS164LTHEREWERESOMETHINGDIFFERENCESOFQINGKAILINGINJECTIONFROMDIFFERENTFACTORIESANDDIFFERENTBATCHESCONCLUSIONITWASPROVEDTHATQINGKAILINGINJECTIONCANINHIBITMETABOLICACTIONOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUS,THEMICROCALORIMETRYCOULDBEAPPLIEDTOTHEQUALITYACCESSMENTOFQINGKAILINGINJECTIONKEYWORDSMICROCALORIMETRYQINGKAILINGINJECTIONSTAPHYLOCOCCUSAUREUSGROWTHTHERMOGENICCURVES清开灵注射液G7171G1268G13491G2529方“G4445G4479G10287黄G1036”的G6925G14403剂G3423，G11013G13978G18252、G10657G10676G8609（G12893）、G10494G2447G8699G13978G18252、G7636G4388、G8712G10287G16294（G12893）、G7507G15025G7693、黄G14461G14539、金G19146G144698G2631G1025药G13464G6116。1992G5192G3999清开灵注射液G15999G6931G5232G2319药G12661G10714G18108G19388G6363定为G1852G3281G1025G2319G2319G19510G5625G16798（G12197）G4472G5529G3803的G1025G6116药，G1039G16213用于热G11161、G12082G7139、G1025G20130G1571G11263、G12082G5547不清、G5625性G13937G9826、G990G2640G2572G17959G5875G7591、G13966G9826、G14053G15892G7655G5430G6116、G14053出G15892G16277G990G17860G16789G1517G137851，G1032G5214G11115效G11842G2011，G1306同G7114G5353G2469的药物不G14403G2465应（ADR）在G2469生ADR的G1025药G2058剂G1025G1313列G12544G11202。G3281家G20147品药品G11429G11575G12661G10714G4628（SFDA）G19036对G5062G990G5078的G1025药注射剂G7138G11842G16213G8726G726建立生物G8975性G7828测方法，G1209G5369G15929G11458G2081G7828G20576G6363G7643G1177G1177G14033控G2058G5062G11705G6116分的不足，从生物G8975性G16294G5242控G2058药品的质量3。G1025药质量生物控G2058G5062G6116为G1025药质量控G2058研究G2469展的趋势4。现代药G10714研究表G7138，清开灵注射液G1039G16213有解热镇静、抗菌、抑毒保G13937、抗凝促溶、免疫调节等作用5。G1032G5214G990，清开灵注射液用于热G11161、G5625性G990G2640G2572G17959G5875G7591及G13966G9826的频率很高6，这与清开灵注射液G14403好的抗菌作用密不G2499分。结合G2081期研究7，本文G1209清开灵注射液的抗菌作用为着眼点，采用微量量热法，对清开灵注射液影响金黄色葡萄球菌代谢的作用进行初步研究，为清开灵注射液质量的生物评价与控G2058的后续工作做了G5529G16213的铺垫。1实验仪器及材料311实验仪器实G20576仪器采用瑞典THERMOMETRIC公司产的LKB2277生物热G8975性G7828测系G13491，LKB2132蠕动泵。实G20576G7114系G13491控温37。有关仪器的结构原G10714G16277文献8。12实验材料金黄色葡萄球菌CCTCCAB910393G11013武汉大学G1025G3281典G3423培养物保藏G1025心提供。清开灵注射液样品G11013具代表性的两个大厂家（BZY、SXTH）提供，各3批样品，批次分别为G726811601、712604A、710510A；070930、071120、071219。培养基为LB培养基G726取蛋白胨10G，酵G8609G128935G，氯化钠5G，溶于1000ML蒸馏G8712G1025，PH72，分装后于121高压蒸气灭菌20MIN，置4冰箱G1025G3803用。2方法与结果21实验方法采用停流法G7828测。测定G2081分别用适量01MOLL1氢G8699化钠、01MOLL1盐G18252、75乙醇溶液和无菌G8712清洗G12661G17959和流通池，待仪器得到稳定的基线后，用蠕动泵G120950MLH1的流速，将菌液和清开灵注射液混合液泵入微量热计G1025，当样品充满流通池后停泵，启动采集卡开G3999采集数据，跟踪记录流通池内细菌生长的产热曲线（PT曲线），当采集的数据重新回到基线后，实G20576结束。G7693据实G20576G16213G8726，将一定量的清开灵注射液加入到接G12193了金黄色葡萄球菌的培养液G1025，使菌含量为2106CELLSML1，用振荡器混匀，G1209G3803进样。整个过G12255为无菌操作。22结果与讨论221金黄色葡萄球菌的生长热功率输出曲线4图1金黄色葡萄球菌G4448整代谢曲线FIG1METABOLISMCURVEOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUS图1G717137下，停流法测定的金黄色葡萄球菌G4448整代谢曲线。曲线A（PT曲线）G7171所测定的细菌生长曲线，G2499G1209分G6116G3247个G19466G8585G726G265停G9394期、G266G6363数生长期、G267稳定期和G268G15940G1141期。分别对应于细菌对培养基G1025不同G14841养G6116分的G2045用G5785G1929及不同的代谢过G122559，与G1268G13491方法测定的细菌代谢曲线G11468G1296。曲线B（LNPT曲线）G2029G7186G12046了线性拟合后细菌代谢热功率输出随G7114G19400的G2476化G10317G546110。222重现性考察采用微量量热G1055停流法测定金黄色葡萄球菌生长热G16901曲线，在G11468同的实G20576G7477G1226下，P1、P2、K1、G440T的RSDG1552分别为3468、44739、24161、09413，G16840G7138实G20576结G7536具有G14403好的重现性。223清开灵注射液不同剂量对金黄色葡萄球菌代谢的影响（G16277图2）图2金黄色葡萄球菌G8999G5242G7811G5242图FIG2CONCENTRATIONGRADIENTCURVESOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUS用SXTH的批次为071120样品，分别考察了0200L的8个G8999G5242G7811G5242，线性关系G14403好，当剂量增加到200LG7114，金葡菌生长曲线G5062G1017重G2476G5430，不G1889适用于G6363数生长G8181G3423，G16277图2曲线A。定G1053药物对细菌的抑G2058率为G726IK0KV/K0100，G5347G1025K0为剂量为G19658G7114细菌生长代谢的速率G5132数，KV为细菌G2475到剂量为V的药物抑G2058G7114的速率G5132数。G11013G8504计算出金黄色葡萄球菌在清开灵注射液不同剂量下的抑G2058率I，作VI（）5图，G8726得半数抑菌量为97698L。当K1为0G7114，细菌G4448G1852停G8502生长，G8726得最佳抑菌量为164L。细菌G1268代G7114G19400TGLN2/K。G16826细参数G16277表1。表1不同剂量清开灵注射液对金黄色葡萄球菌生长曲线参数影响TABLE1EFFECTOFQINGKAILINGINJECTIONOFDIFFERENTDOSAGEONPARAMETERSA119A120VA121LA122T1MINP1WQ1MJK1MIN1T2MINP2WQ2MJQTMJA123TMINTGMINI019630661639950034264443246824212537801124820232A12425204283056886300275346230191278888402654258251780196502062240354885002451486264372687763595422802828002857521017789523410020555422259228515137426333233730040010021213664478570017025981990429935738840438640725050312521611373462720013896401866632224840858542449903059515022091945950400090967416115369840492008454762540735A125A126A127A12809850989060809940989099109360676098509280998A129T1A130A131A132A133A134A135A136A137A138A139A140T2A130A141A142A135A136A137A138A139A140A143TA130A141A142A135A144A131A132A133A134A135A136A137A138A139A145A140P1A130A131A132A133A134A135A146A147A148A149A150A140P2A130A141A142A135A146A147A148A149A150A140K1A130A131A132A133A134A135A133A134A151A150A152A132A140IA130A153A154A155A156A157A158A159A150A140TGA130A156A157A160A161A138A139A140Q1A130A131A132A133A134A135A162A148A163A140Q2A130A141A142A135A162A148A163A140QTA130A164A162A148A163G11013图G16901及参数分析，G2469现在一定范围内（0150L），随清开灵注射液剂量增加，金黄色葡萄球菌生长曲线整G1319呈“下降、后延”趋势；细菌G6363数生长期速率G5132数K1、最大热功率P1、稳定期最大热功率P2均G11468应G1955G4579，G6363数生长期G17810G4804G7114G19400T1、稳定期G17810G4804G7114G19400T2、稳定期与G6363数生长期G17810G4804G7114G19400G5058G440T、药物对细菌抑G2058率I均G11468应增大，且均与剂量呈较好的线性关系（R分别为G7260994、0989、0991、0985、0989、0985、0998）；细菌G1268代G7114G19400TGG1075G11468应增加；G13792细菌G12544一G6363数生长期G2469热量Q1整G1319G11065呈下降趋势，稳定期G2469热量Q2、G5647G2469热量QT整G1319G11065呈G990G2331趋势，G1306G11468关性较G5058（R分别为0608、0936、0676）。224不同清开灵注射液样品热谱图初步分析在G1209G990系列G8999G5242G1025，G17885G6333和G12366白G11468比参数G2476化较大，G1306图G16901不G2469生G7138G7186G2476G5430的G8999G5242（50L），对清开灵注射液不同样品的抑菌效G7536进行了测G16809，G16277图3。6图3不同清开灵注射液样品对金黄色葡萄球菌的影响G947实线G252BZYG15406线SXTHFIG3EFFECTOFQINGKAILINGINJECTIONONMETABOLISMOFSTAPHYLOCOCCUSAUREUSA165SOLIDLINEBZYDASHLINESXTHG990图G1025，实线所G12046图为BZY清开灵注射液生长曲线图，G15406线所G12046图为SXTH清开灵注射液生长曲线图。G7186G9994，BZY、SXTH两个厂家G19400的样品生长曲线有很大的G5058G5334，BZY样品的稳定期较SXTH样品G3822一个G4804，G3926图所G12046G4804B，且P1G1075较SXTH样品大。G990图所G12046G2318G3507（稳定期）G2499G16277，BZY批次为811601的样品生长曲线G7138G7186G2318别于G1866G1194样品，G16277G990图G7643G12046的G4804A，G7138G7186高于G1866G1194样品；SXTH的3批次样品生长曲线G5058G5334较G4579。G11013G8504G2499G16277，不同厂家、同厂家不同批次清开灵注射液质量G4396在不同G12255G5242的G5058G5334。225讨论2251本实G20576G20330次通过微量量热法较系G13491的研究了清开灵注射液对金黄色葡萄球菌代谢作用的影响，得出G1866抑菌效应，这与文献G6265G17959一G14280。G5194得出G1866半数抑菌量（97698L）和最佳抑菌量（164L）。2252在G10317定G7477G1226下，药物作用于细菌的生长曲线G7171G11468对稳定的，且与G8975性G11468关，G3252G8504G6117G1216G12228G1055为“生物热G8975性G6363G13453图G16901”BIOACTIVITYFINGERPRINT。通过分析，G2469现在G11468同G7477G1226下，清开灵注射液不同厂家G1209及同厂家不同批次G19400样品的生物热G8975性G6363G13453图G16901G4396在不同G12255G5242的G5058G5334，在一定G12255G5242G990G2465G7156了清开灵注射液质量7的G5058G5334性。2253清开灵注射液作用于金黄色葡萄球菌的生物热G8975性G6363G13453图G16901提G12046G6117G1216，微量量热法在研究清开灵注射液质量一G14280性方G19766有很好的G14507G3848，进G13792为从G8975性G16294G5242评价清开灵注射液的质量提供了很好的G5617G17347。2254G3微量量热G7828测G6228G7427具有G7234适性好、实G7114在线、G4470G16278灵G6947、定性定量、G13475G8994高效等G10317点，G12538合G1025药药效与质量评价的G4470G16278现实和G2469展方G2533，有G2045于G1025药质量控G2058和药效评价等G3809G7446性G19602G20076，在G10714G16782G990比现行的G1025药G6363G7643性G6116分定性定量分析具有较G7138G7186的G1260G17246性4。2255本研究G1177G19036对清开灵注射液的抑菌作用进行了初步探G16764，生物热G8975性G6363G13453图G16901的G5058G5334G7171G2554G14033G4470G16278的G2465G7156清开灵注射液质量的G5058G5334，这G7171G2554与清开灵注射液不G14403G2465应频G2469有关，G6117G1216将进行G9157入探究。参考文献1G3281家药典G4