[生物医药论文精品a]透明质酸铋的抗幽门螺杆菌及促溃疡愈合活性研究

1透明质酸铋的抗幽门螺杆菌及促溃疡愈合活性研究凌沛学,金艳（山东省生物药物研究院,济南250101）摘要目的研究透明质酸铋（BI3HYALURONATECOMPLEX，BIHA）的抗幽门螺杆菌（HPYLORI）活性和对大鼠实验性慢性胃溃疡愈合的影响。方法采用琼脂稀释法检测BIHA对HPYLORI的最低抑菌浓度（MIC）。观察BIHA对醋酸致大鼠慢性胃溃疡愈合的影响。采用ELISA检测大鼠胃部黏膜中的NO含量和表皮生长因子（EGF）表达量，初步探讨BIHA的作用机制。结果BIHA具有与枸橼酸铋钾相近的体外抗菌活性。BIHA能够促进慢性胃溃疡的愈合，且能提高溃疡愈合质量。BIHA促进慢性胃溃疡愈合的作用机制可能与其增加胃黏膜中EGF的表达有关。结论BIHA具有良好的抗HPYLORI活性和抗溃疡作用，有望开发为一种新型含铋药物，应用于消化性溃疡疾病的治疗。关键词透明质酸铋；HPYLORI；溃疡；愈合ANTIHPYLORIANDULCERHEALINGACTIVITYOFABI3HYALURONATECOMPLEXLINGPEIXUE,JINYANINSTITUTEOFBIOPHARMACEUTICALSOFSHANDONGPROVINCE,JINAN250101,CHINAABSTRACTOBJECTIVETOINVESTIGATETHEANTIHPYLORIACTIVITYANDEFFECTONTHEHEALINGOFEXPERIMENTALCHRONICULCERINRATSOFABI3HYALURONATECOMPLEXBIHAMETHODSTHEMICSOFBIHAAGAINSTHPYLORIWERETESTEDBYAGARDILUTIONMETHODEFFECTOFBIHAONHEALINGOFCHRONICGASTRICULCERINRATSINDUCEDWITHACETICACIDWASALSOEVALUATEDTHENOCONTENTSANDEXPRESSIONOFEGFINGASTRICMUCOSAOFRATSWERETESTEDBYELISATOEXPLORETHEACTIONMECHANISMOFBIHARESULTSBIHASHOWEDSIMILARANTIHPYLORIACTIVITYTOTHATOFBISMUTHPOTASSIUMCITRATEBIHACOULDACCELERATETHEHEALINGOFCHRONICULCERANDINCREASETHEQUALITYOFULCERHEALINGTHEINCREASEOFEGFEXPRESSIONINTHEGASTRICMUCOSAMAYBEONEOFTHEULCERHEALINGMECHANISMSOFBIHACONCLUSIONBIHAPOSSESSESFAVORABLEANTIHPYLORIANDANTIULCEROGENICACTIVITYANDMAYBEDEVELOPEDINTOADRUGEXPLOITEDINTHERAPYOFPEPTICULCERDISEASEKEYWORDSBI3HYALURONATECOMPLEXHPYLORIULCERHEALING消化性溃疡疾病是一种慢性消化G13007G13491疾病，发病G10587G17751高。研究表明，消化性溃疡的发病G1039G16213是胃G13940G17959黏膜的G1417G16001因G13044和G1457G6264因G13044G3845G15925G6164致。幽门螺杆菌（HPYLORI）G5875G7591是G1039G16213的G1417G16001因G13044。铋G2070因G1872具抗HPYLORI活性和黏膜G1457G6264活性，2因G13792G3324消化性溃疡的治疗中G14731G5483G5203G8879应用。透明质酸（HA）是一种G11013NG1069G18244G8700G3534G14901G12970和G14901G12970G18287酸G2464G12970G18337G3809G2345G1313G5430G6116的G12970G14030G13870G12970，具有G3822种生物活性，G3926G7512G6116G3822种G3534质G451G1457G8712G2462G9082G9381G451G2031G1272愈合G125731。HAG2462其G15905生物G3324G2319药G20058G3507G14731G5483G5203G8879应用。HA的金G4658G18209合物近G5192G7481G1075G2475G2052G1166G1216的G18337G16282。G7424G7003对HA与BI3G5430G6116的G18209合物透明质酸铋的抗HPYLORI活性G2462促溃疡愈合作用进G15904G1114研究。1材料和方法11G1214G3132与G7460G7021G17241G1940G5049作G2500（济南G8917G5259G12366G8680G1940化G16786G3803G2390）；生化G3533G1871G12677（G2283G1152G5078G8716G1821明G2319疗G1214G3132G2390）；T801NETZGERT型G11017G2172G2260G8986G3132（G5515G3281IKAWERKE）；MULTISKANMK3G18250G7643G1214（G14464G1860THERMOLABSYSTEMS）。透明质酸铋（BIHA，G14270制，铋含量为2560G705）；枸橼酸铋钾（BPC，G1041G10676G2319药G19610G3254G13941G1233有G19492G1856G2508）；G2745G1274G8616G1134琼脂G3533G1871G3534（G14533G3281OXOIDG1856G2508）；G18250G13864G1825G11135G16809G2070G11430（G13666G3281RAPIDBIOG1856G2508）。HPYLORIG3281际G7643准株NCTC11637G45126695和J99（中G3281疾病预防控制中心提供）；WISTAR大鼠，体，G1872用（山东大学新药评价中心）。12方法121BIHA的体外抗HPYLORI活性研究2按琼脂稀释法测定BIHA的MIC值。以BPC作为对照。将待测样品溶于无菌蒸馏G8712中，按2倍连续稀释。将样品稀释液加入含5G705羊血的G2745G1274G8616G1134G3533G1871G3534中，振摇均G2260，倾倒入无菌平皿中，制G3803铋含量为2580GML1的G13007列血平板。将HPYLORI菌株NCTC11637G45126695和J99接种于血平板上，菌株接种液浓度为1107菌落G5430G6116G2345G1313（CFU）ML1。37CG451微需氧条件下G3533G187172H后观察菌落的生长情况。以待检样品抑制HPYLORI可见生长的最低浓度作为MIC。122BIHA对大鼠慢性胃溃疡愈合的影响3大鼠禁食36H，G14270G11013饮G8712。将40的醋酸溶液60L注入内径6MM的玻璃管，将其紧贴于胃前壁幽门上方1CM处的G8986膜表面90S。用棉签蘸去醋酸液后撤去玻璃管。该法造G6116醋酸使用区G3507黏膜G2462黏膜下层的立即坏死。3D后G5430G6116溃疡。将大鼠随机分为3组，于溃疡G5430G6116后第1日开始给药，每日给药1次，连续给药10D（分组G2462给药G2070量见表1）。各组分别于给药5DG246210D后处死69只G2172物，测量溃疡面积S，作为溃疡指数。S的计算方法为测量通过溃疡中心的最大纵径（D1）和最大横径（D2），用下列G18563式进G15904计算SD1/2D2/2。将给药10D的各组G2172物胃部溃疡部分（或溃疡愈合部分）送病理检测。A11A0A2A3A4A5A6A7A8A9TAB1ANIMALGROUPSANDDOSEOFADMINISTRATIONA3A4A10A11A7A2A6A7A8A9A12A13A14A15A4BPC45MGKG1A16A17BIA9BIHAA4BIHA45MGKG1A16A17BIA9A18A19A14A15A4NS10MLKG1123大鼠胃黏膜中的NO和EGF含量测定按122项下方法制作慢性胃溃疡模型。将36只大鼠随机分为3组，分别为阳性对照组（口服BPC）G451BIHA组（口服BIHA）G2462阴性对照组（口服NS）。按表1G2070量于溃疡G5430G6116后第1天开始给药，每日给药1次，连续给药10D。于给药5DG246210D后每组分别处死6只G2172物。摘取G2172物胃部的溃疡G2462其周围组织，70C冷冻G1457存。将胃组织表面的黏膜用手术G2004G10267G2050下，加入G33244C预冷的PBS（001MOG79L1，PH74）15ML，用G11017G2172G2260G8986G3132进G15904G2260G8986。将组织G2260G8986液于10000RG22109MIN1G12175心10MIN，G5335去G8797G9108物，G2572取上G9177。用G18250G13864G1825G11135G16809G2070G11430检测组织G2260G8986液中NOG451EGF的含量。124G13491计分G7524实验数G6466以SX表G12046，G3822组G19400G8616G17751采用方G5058分G7524，G1016组G19400G8616G17751采用T检验进G15904G13491计分G7524。2结果21MIC测定G13479G7536G13479G7536见表2。A202BIHAA21MICA22A23A24A25TAB2MICOFBIHAMICA26ML1,A27A28A29A30NCTC1163726695J99BIHA555BPC555G1186G13479G7536可G11487G1998，BIHA对G989种HPYLORIG3281际G7643准株的MIC值与BPC相G2528，4均为5GML1（按铋量计算）。G322BIHA对溃疡面积的影响BIHA和BPC对溃疡面积的作用见表3。给药5D后即观察G2052BIHA组G2172物的溃疡面积G4579于模型对照组（PG728005）。BPC组G2172物的溃疡面积与模型对照组相G8616G8821有G7186G14891G5058别（PG730005）。给药10D后，BIHA组的溃疡面积明G7186低于模型对照组（PG728001），表明BIHA能促进慢性胃溃疡的愈合。BPC组的溃疡面积G1146G4579于模型对照组（PG728005），表明BPCG1146能促进溃疡愈合。BIHA组的溃疡面积G4579于BPC组（PG728005），表明BIHA的促溃疡愈合作用G5390于BPC。A313BIHAA32BPCA33A34A35A36A37A38A39A40A41A42A37A38A43A44A45A46A47A48SXA49TAB3EFFECTSOFBIHAANDBPCONULCERAREAOFANIMALSWITHCHRONICULCERSXA50A51A52A53A54A55/MM2A56A575DA56A5710DBPC105295552081BIHA654328135209823A58A59A60A61A501695963986576A62A63A64A58A59A60A61A50A65A66A671PA68005A672PA68001A69A64BPCA50A65A66A673PA68005NOTE1PA68005,2PA68001,VSCONTROL3PA68005,VSBPCGROUP23病理学G16798G7041G13479G7536AB5CDA70A71A72A73A74A75A76A73A77A78A79A80A81A82100A83AA84A85A86A87A88BA89A90A91A92A93A94CBIHAA93A94DBPCA93FIG1PATHOLOGICALSECTIONOFSTOMACHOFDIFFERENTGROUPS100ASECTIONOFSTOMACHOBTAINEDFROMNORMALRATSBSECTIONOFULCERATEDSTOMACHOBTAINEDFROMCONTROLGROUPCSECTIONOFULCERATEDSTOMACHOBTAINEDFROMBIHATREATEDGROUPDSECTIONOFULCERATEDSTOMACHOBTAINEDFROMBPCTREATEDGROUPG32821为G8503G5132大鼠G2462慢性胃溃疡模型大鼠的胃部组织病理G2011G10267G7186微照G10267。G8503G5132大鼠胃组织胃黏膜上皮G4448G6984，G3278有膜内G14158体G6502列G6984G21796。模型对照组G2172物部分胃G4579G1997上皮大G10267G10378G13582G3845，溃疡表面可见G2414层G9826性G9195G1998G2462坏死组织。部分G2172物G3278有膜内G14158体G6205G5364或G5430G6116G3230G10378。G9826G13466G14002G9036G9082明G7186。BPC组G2172物病理学G10317G5461与模型对照组G2172物相近，组织学G6925G2476G17743于模型对照组。BIHA组G2172物部分胃G4579G1997上皮G4579G10267G10378G13582G3845，溃疡表面可见G4579G9802G10378G9826G13466G14002，溃疡G17805G13548处可见增生的黏膜上皮G2533溃疡部分G5322G1292。可见G6967G3324G9826G13466G14002G9036G9082。组织学G6925G2476明G7186G17743于模型对照组。G1186病理G16798G7041G13479G7536可G11487G1998，BIHA能明G7186G1955G17743溃疡造模手术对胃组织造G6116的G6451G1272，G5194能G7186G14891提高溃疡愈合质量。24NO和EGF含量测定G13479G7536表4为各组G2172物胃黏膜中NO含量检测G13479G7536。G1186G13479G7536可G11487G1998，给药5D后，各组G2172物胃黏膜中的NO含量相近。给药10D后，BPC组G2172物胃黏膜中NO含量明G7186高于模型对照组（PG728005），BIHA组与模型对照组G2172物胃黏膜中NO含量均G3250落G14279接近G8503G5132G8712平。6A954A96A97A98A99A100A101A102NOA103A104TAB4CONTENTSOFNOINGASTRICMUCOSAOFRATSINDIFFERENTGROUPSA97A105NOA103A104/MOLMGA106A107A1081A109A1105DA109A11010DBPC2519615287911071BIHA23224552036506A111A112A113A114A9725223781791256A115A1161814364A117A118A119A111A112A113A114A97A120A121A1221PA123005NOTEA1241PA123005,VSCONTROLA1255A126A127A128A129A130A131A132EGFA133A134A135TAB5EXPRESSIONOFEGFINGASTRICMUCOSAOFRATSINDIFFERENTGROUPSA127A136EGFA133A134A135/PGMGA137A138A1391A140A1415DA140A14110DBPC12707416611502262BIHA1363533221331424081A142A143A144A145A12712228344210916933A146A1479651212A148A149A150A142A143A144A145A127A151A152A1531PA154005NOTEA1551PA154005,VSCONTROL表5为各组G2172物胃黏膜中EGF表达量检测G13479G7536。G1186G13479G7536可G11487G1998，给药5D后，BIHA组G2172物胃黏膜中EGF的表达量G11065高于模型对照组，BPC组G2172物胃黏膜中EGF表达量与模型对照组相近。给药10D后，BIHA组G2172物胃黏膜中EGF表达量明G7186高于模型对照组（PG728005），BPC组G2172物胃黏膜中EGF表达量与模型对照组相近。3讨论溃疡是G1313于食管G451胃G451G2325G1120指G13940或G13940壁的G13059G2462黏膜G451黏膜下层和G13920层的G9157度G13582G6451。溃疡愈合的过G12255G2325分G3809G7446，G2265G6336坏死物的G9177G19512，G3534G5225部长G1998G13917G14481组织G451进G13792G5430G6116G13432G13512组织和G11254G11177组织，血管的生长，G2345层G7621G10378上皮的长入G12573过G12255。G8504过G12255中G1262有一G13007列G13466G14002和分子机制的G2454与4。TARNAWSKIG125735G20330G1820提G1998G1114溃疡愈合质量（QUALITYOFULCERHEALINGA156QUHA157的G8022G5577。溃疡愈合质量观G9869G16760为溃疡愈合G993G1177需G16213G13582G3845组织的G1889上皮化G1474G3809，G7368需G16213上皮下组织G13479G7512的G1474G3809G18337G5326。评价溃疡愈合G9937G1177G16213G3324内G19248或G11464G16282下观察，G13792且G16213对上皮下组织G13479G7512的G18337G5326情况进G15904G1114G16311；G993G1177G16213评价G1889生组织的G13479G7512G6116G10099度，G1075应G18337G16282其G2163能G6116G10099度，G5194G6238溃疡愈合质量的好坏与G7422G7481溃疡G3809发G13864G13007G17227G7481。G7424G7003通过组织病理学分G7524对各组G2172物的溃疡愈合质量进G15904G1114评价。G1186外观G11487，给药10D后，各组G2172物溃疡G3822数G5062愈合，G1306G1186病理检测G13479G7536可G11487G1998，各组G2172物胃组织G1185存G3324G993G2528G12255度的组织学G6925G2476。其中，以模型对照组G2172物胃部的组织学G6925G2476最为G1017G18337。BPC组G2172物胃部的组织学G6925G2476G12257G17743。G13792BIHA组G2172物胃部组织学G6925G2476明G7186G17743于模型对照组，且其溃疡愈合质量G1260于BPC组G2172物。内G9316性NO是G11013NO合G18250G1664化LG12946G8700酸G7423G12483胍G3534中的一个G8700原子氧化G13792生G6116。胃黏膜中NO的生物活性具有G2464G18337性，一方面，NO可以G6205G5364血管G451增加血流量G451G1955少G13466G14002G6451G1272，G17227G2052G1457G6264黏膜的作用，另一方面，过G3822的NO可G5430G6116G14270G11013G3534，G6451G1272黏膜G13466G14002，加G18337溃疡6。实验G13479G7536G7186G12046，给药10D后，BPC组胃黏膜中NO含量明G7186高于模型对照组。异G5132增高的NO量，可能G1262加G18337溃疡部分的G9826症反应，加G18337组织G6451害。与BPC相G8616，BIHA对NO量几无影响。EGF是目前G16760识最G3822的促进溃疡愈合的生长因子。EGF与其G2475体（EGFR）G3324内皮G13466G14002增殖G451迁移G451上皮G1889G5430G6116和胃部G14158体G18337G5326过G12255中G17227着G18337G16213作用7。实验G13479G7536G7186G12046给药10D后，BIHA组G2172物胃黏膜的EGF表达量明G7186高于模型对照组。提G12046BIHA的促溃疡愈合作用可能与其增加EGF的表达量有关。B