实验四 巨噬细胞的吞噬实验.ppt

1、实验四小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验,细胞的胞吞胞吐是细胞进行新陈代谢的方式之一。高等动物的细胞在摄取营养物质的同时，有的细胞如单核细胞和巨噬细胞还有通过识别与吞噬细菌、病毒等外来物质的作用来达到机体防御的功能。本实验通过预先激活腹腔巨噬细胞，然后腹腔注射鸡红细胞，从而引起腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞。通过光镜可清楚地观察到这一有趣的现象。,实验简介,目的要求,1了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理 2熟悉细胞吞噬作用的基本过程,基本原理,高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞，具有吞噬的功能。它们广泛分布在组织和血液中，在机体的非特异免疫功能中起着重要的作用。当病原微生物或其它异物侵入机体时，

2、能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又具有趋化性，它通过产生活跃的变形运动，主动向病原体和异物移行聚集，首先把异物吸附在细胞表面，随之，吸附区域的细胞膜向内凹陷，伸出伪足包围异物，并吞入胞质，形成吞噬泡，继而在细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解。,血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。根据白细胞的细胞质 内是否含有特殊颗粒，把白细胞分为有粒、无粒两类。含有 颗粒的白细胞为粒细胞，按瑞色染色时所染成的不同颜色分为 中性、嗜酸性和嗜碱性三种粒细胞。无粒白细胞又分为淋巴 细胞和单核细胞。 白细胞500010000/ml个。嗜中性粒细胞数量最多，占5070 常穿出血管，聚集

3、于炎症组织的周围，作变形运动，吞噬细菌。 体内有炎症时，它的数量就增多。嗜酸性粒细胞数量最少。淋巴 细胞与免疫有密切关系，患结核病时，淋巴细胞明显增加。单核 细胞是血液中最大的细胞，变形活动非常活跃，能吞噬细菌和 异物。单核细胞穿出血管到结缔组织中可变为巨噬细胞。 嗜酸性粒细胞具有粗大的嗜酸性颗粒，颗粒内含有过氧化物酶 和酸性磷酸酶；嗜碱性粒细胞中有嗜碱性颗粒，内含组织胺、 肝素与5-羟色胺等生物活性物质 ；中性粒细胞具有变形运动和 吞噬活动的能力。,噬碱性粒细胞,噬酸性粒细胞,噬中性粒细胞,淋巴细胞,单核细胞,实验用品,1器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射器、载玻片、盖玻片、吸管等 2试

4、剂： 0.85%生理盐水；阿氏（Alsever）血液保存液；6%的淀粉肉汤。 3材料：小白鼠；1%鸡红细胞悬液,方法与步骤,鸡翼下静脉取血后，用Alsever以1:4比例保存于4度（可保存一周）。实验前加生理盐水离心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为1%。,实验前1天，向小鼠腹腔注射1ml淀粉肉汤(预先激活腹腔巨噬细胞：诱导腹腔内产生较多的巨噬细胞 )，实验前30分钟，向腹腔内注射1ml1%的鸡红细胞。,淀粉肉汤为异物， 但是无毒害，可刺 激小鼠巨噬细胞的 产生，并且淀粉肉 汤里含有台盼蓝， 巨噬细胞吞噬后会 被染成蓝色，便于 观察。,注射后30分钟，处死小

5、鼠。 （右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时向下按住鼠头，使脊髓与脑髓间断开）,吸取腹腔液,在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水，向其中滴加一滴腹腔液，静置10分钟，使腹水细胞贴壁，弃去生理盐水，待其稍干后，进行瑞氏染色。,观察时，将视野光线调暗。在高倍镜下，先分辨清鸡红细胞和 巨噬细胞。鸡红细胞为淡黄色、椭圆形、有核的细胞。而数量较 多、体积较大圆形或不规则的细胞，其表面有许多似毛刺状的小突 起（伪足），胞质中有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝 淀粉肉汤形成的吞噬泡）即为巨噬细胞。变换视野，仔细观察巨噬 细胞吞噬鸡红细胞的过程。可见有的鸡红细胞（一至多个）紧贴附 于巨噬细胞的表面；有

6、的巨噬细胞已将1至数个红细胞部分吞入； 有的巨噬细胞已吞入1个或几个红细胞在胞质中刚刚形成椭圆形的 吞噬泡；有的巨噬细胞内的吞噬泡体积缩小，并呈现圆形，这是 与初级溶酶体发生融合，泡内物正在被消化分解。,未被吞噬的鸡红细胞,吞噬了鸡红细胞的吞噬细胞,将染色后的涂片置于显微镜油镜下观察，绘图记录。,实验结果的观察,观察细胞的形态特征，注意不同细胞的大小比例和形状；鸡红细胞和巨噬细胞的区分；吞噬前后的大小和形状的不同。注意鸡红细胞被吞噬后形态上的变化：多观察不到核，且形态变圆。 吞噬过程的观察：吸附、正在吞噬、吞噬后、消化后（一般观察不到正在吞噬的过程，想想为什么）。,注意事项,小鼠处死后立即注人生理盐水 2ml，轻揉腹部，可获得较多的巨噬细胞。,作业,高倍镜下绘处在不同吞噬阶段的巨噬细胞图各一个，示吞噬作用的过程。 计算吞噬细胞的吞噬指数和吞噬百分数。 吞噬百分率100个巨噬细胞中内含鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞总数 吞噬指数100个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数/100个巨噬细胞总数,1、实验报告,2、思考题,实验前一天，给小白鼠注射含淀粉肉汤的目的是什么？,1、能否用生理盐水、葡萄糖等代替淀粉肉汤？能否单纯注射 台盼蓝？,不能用生理盐水、葡萄糖代替淀粉肉汤（可用蛋白胨 等代替），因为所有细胞都具有生理盐水及葡萄糖，它们