药物含量测定方法与验证ppt课件

1、第四章 药物的含量测定方法与验证,第一节 定量分析方法的分类与特点,（一）容量分析法的特点与适用范围 方法简便易行，仪器价廉易得、操作简便、快速； 方法耐用性高； 结果准确、相对误差0.2； 专属性差。 适用于化学原料药的含量测定。,一、容量分析法,(二) 计算 1.滴定度（T） 每ml规定浓度的滴定液相当于被测药物的质量（mg），单位mg/ml。,2. T的计算 aAbBcC+dD m：滴定液的摩尔浓度 a：被测药物的摩尔数 b：滴定液的摩尔数 M：被测药物的毫摩尔质量,碘量法测定维生素C（M=176.13）的含量，碘 滴定液的摩尔浓度为0.05mol/L，化学反应式如下： C6H8O6+I

2、2C6H6O6+2 HI,例：,3. 含量的计算,取本品0.4988g，加乙醇30ml，微温使溶解，放冷，加甲酚红指示液4滴与麝香草酚蓝指示液1滴，用氢氧化钠滴定液（0.1003mol/L）滴定至溶液显紫红色，消耗氢氧化钠滴定液（0.1003mol/L）14.86 ml；并将滴定的结果用空白试验校正，消耗氢氧化钠滴定液（0.1003mol/L）0.05ml。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于33.07mg的呋塞米。按干燥品计算，含C12H11CIN2O5S不得少于99.0%。,例1 呋塞米含量测定,取本品0.1041g，置250ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液

3、（0.05mol/L）25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1分钟，在暗处静置15分钟后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1012mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每ml溴滴定液（0.05mol/L）相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。按干燥品计算，含C12H17N2NaO3不得少于98.5%。已知样品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1012mol/L）17.20ml，空白实验消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1012mol/L） 25.02ml。,例2. 司可巴比妥钠原料药含量测定,二、光

4、谱分析法 （一）紫外-可见分光光度法（200nm760nm) 灵敏度高，可达10-7g/ml 10-4g/ml 1. 特点 准确度高，RSD（%）为2% 5% 仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用范围广。 2. 朗伯-比耳定律 A = Ecl,3. 仪器校正和检定 波长校正用汞灯中较强谱线237.83,253.65,275.28,296.73, 313.16,334.15,365.02,404.66,435.83,546.07nm与576.96nm或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm进行校正。 吸收度的检定：用K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液至1000m

5、l。 波长(nm) 235(最小) 257(最大) 313(最小) 350(最大) 124.5 144.0 48.62 106.6 杂散光检查： 试剂 浓度(g/ml) 测定波长 透光率(%) NaI 1.00 220nm 0.8 NaNO2 5.00 340nm 0.8,4. 对溶剂的要求: 220240nm 241250nm 251300nm 300nm以上 溶剂+吸收池A 0.40 0.20 0.10 0.05,5. 含量测定 a. 对照法,D 稀释体积,b. 吸收系数法,c. 标准曲线法 A=a+bC,d. 计算分光光度法 e .比色法,精密称定0.0150g，置200ml容量瓶中，加

6、乙醇150ml，于温水浴中加热，振摇使奥沙西泮溶解，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，在229nm的波长处测定吸光度为0.480；另精密称取奥沙西泮对照品0.0149g，同法操作，测得229nm的波长处测定吸光度为0.460；药典规定本品按干燥品计算，含C15H11CIN2O2应为98.0%102.0%。该供试品含量是否合格？,例1. 奥沙西泮原料药含量测定,精密称取对乙酰氨基酚0.0411g，置250ml容量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml容量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加

7、水至刻度，摇匀。依照分光光度法，在257nm波长处测得吸收度为0.582。按C8H9NO2的百分吸收系数为719。计算对乙酰氨基酚的百分含量。,例2. 对乙酰氨基酚原料药含量测定,（二）荧光分光光度法 灵敏度高，可达10-12g/ml 10-10g/ml； 1.特点 在低浓度进行测定，防止F与C不成正比及自熄灭作用； 用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减； 制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性。,2.干扰因素的排除 溶剂、溶液、玻璃仪器、温度,3.含量测定 常用的方法对照品比较法。 Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) Cr,三、色谱分析法,1. 特点 高灵敏度，可达10-

8、15g/ml 10-12g/ml; 高专属性; 高效能与高速度; 分离分析同时进行。,三、色谱分析法,2.色谱法分类,3. 系统适用性试验 理论板数（n） n=5.54（tR/Wh/2）2=16（tR/W）2 分离度（R）,三、色谱法分析法,拖尾因子（T） T=W0.05h/2d1 T=0.951.05 重复性 取对照溶液，连续进样5次 其峰面积的相对标准偏差应2.0%,三、色谱法分析法,（一）HPLC 采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。,三、色谱法分析法,1. 对仪器的一般要求 色谱柱、检测器、流动相,2. 测定方法 内标法 外标法 如：氨酚

9、待因片的含量测定,（二）气相色谱法 样品中各组分在固定相与载气间分配因分配系数不同而分离。,三、色谱法分析法,1. 一般要求 载气：氮气 色谱柱：填充柱；毛细管柱 进样口温度：高于柱温3035 进样量：数微升 检测器：FID,（二）气相色谱法 2. 测定方法 内标法 外标法 标准溶液加入法,三、色谱法分析法,第二节 样品分析的前处理方法,样品前处理,前处理： 分析前采用一定方法 使待测药物或元素 转化为适宜状态 满足分析方法对试样的要求,样品前处理,含卤素元素,1 卤素与脂肪链的碳原子相连 结合不牢固。 2 卤素与芳环相连结合牢固。,1 含金属有机药物: 金属离子不直接与碳原子相连。 为有机酸

10、及酚的金属盐或配位 化合物,金属原子结合不牢固, 在溶液中可直接离解出金属离子。 2 有机金属药物: 金属离子直接与碳原子以共价键 相连。结合状态比较牢固,在溶液 中不能直接离解出金属离子。,含金属元素,第二节 定量分析样品的前处理方法,卡巴胂 金属有机药物,富马酸亚铁,样品前处理,根据卤素或金属在分子中结合牢固程度不同而异。,不经有机破坏的分析方法,经有机破坏的分析方法,直接测定法 经水解后测定法 经还原分解后测定法,湿法破坏法 干法破坏法,第二节 定量分析样品的前处理方法,一 不经有机破坏的方法,（1） C-M不直接相连 配位滴定法 例如：乳酸钙 0.3g+水100ml 放冷+NaOH 1

11、5ml EDTA滴定 钙紫红素指示剂,1. 直接测定法,第二节 定量分析样品的前处理方法,不经有机破坏的方法,（2） 适用于C-M (金属原子直接与碳原子相连）键结合不牢固的有机金属药物,在水溶液中可以电离。 氧化还原滴定法 例如：富马酸亚铁溶于热硫酸，同时分解释放出亚铁离子，可选用铈量法进行测定。,第二节 定量分析样品的前处理方法,不经有机破坏的方法,（3）利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量。 含锑药物游离Sb5+具有氧化性，在酸性下氧化KI析出I2，可用Na2S2O3 滴定。,例如：葡萄糖锑钠 Sb5+2KI Sb3+ +I2 I2 +2Na2S2O3 2NaI +2Na2S4O6

12、,第二节 定量分析样品的前处理方法,2. 经水解后测定法 （1）碱水解后测定法 适用卤素原子与碳原子结合不牢固药物。如卤素与脂肪碳链相连。,不经有机破坏的方法,第二节 定量分析样品的前处理方法,将含卤素的有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）中,加氢氧化钠溶液回流使其水解,将有机结合的卤素转变为无机的卤素离子,然后选用间接银量法进行测定。,不经有机破坏的方法,第二节 定量分析样品的前处理方法,三氯叔丁醇,不经有机破坏的方法,（2）酸水解后测定法 含金属的有机药物与适当的矿酸共热，将不溶性金属盐类水解置换为可溶性盐，然后选用配位滴定或剩余酸碱滴定法测定。,Mg(C17H35COO)2 +H2SO4 Mg

13、SO4 + 2 C17HCOOH H2SO4 + NaOH Na2SO4 + H2O,第二节 定量分析样品的前处理方法,（2）酸水解后测定法,第二节 定量分析样品的前处理方法,不经有机破坏的方法,3. 经还原分解后测定法,第二节 定量分析样品的前处理方法,苯环-I碱性下还原剂（如锌粉） 加热回流 无机碘 银量法 如：泛影酸测定,(1)碱性还原后测定,泛影酸（卤素原子与芳环相连，化学键牢固）,+3NaI+2CH3COONa+3Na2ZnO2+3H2O,Zn粉,NaI+AgNO3 AgI +NaNO3,曙红钠为吸附指示剂 黄色 玫瑰红色,第二节 定量分析样品的前处理方法,不经有机破坏的方法,第二节

14、 定量分析样品的前处理方法,(2)酸性还原后测定,苯环-I酸性下还原剂（如锌粉） 加热回流 无机碘 银量法 如：碘番酸,二经有机破坏的方法,1. 湿法破坏法,第二节 定量分析样品的前处理方法,1） 硝酸-高氯酸法 血、尿、组织等生物样品 破坏后，高价无机金属离子 破坏强，反应激烈 勿蒸干，以免爆炸,经有机破坏的方法,1. 湿法破坏法,第二节 定量分析样品的前处理方法,2） 硫酸-硫酸盐法 硫酸盐提高硫酸沸点 破坏后，低价无机金属离子 常用于含砷、锑有机药物 凯氏定氮,原理： 消解 蒸馏与吸收 测定,第二节 定量分析样品的前处理方法,消解,第二节 定量分析样品的前处理方法,本法关键，为使消解迅速

15、完全 a. 加硫酸盐，提高消解液沸点 H2SO4（98.4）：氧化剂、炭化剂和固氨 沸点323330 加入K2SO4、KHSO4、无水Na2SO4,第二节 定量分析样品的前处理方法,常用量：H2SO4:K2SO4=2:1(V:W),第二节 定量分析样品的前处理方法,b. 辅助氧化剂 HClO4 缩短消解时间 量多，高温易爆炸 H2O2（30） 安全，过量加热自行分解 不能含氮稳定剂（乙酰苯胺）,第二节 定量分析样品的前处理方法,c. 催化剂 汞：金属汞、氧化汞、硫酸汞 硒：金属硒、二氧化硒 铜：硫酸铜 锰：二氧化锰,第二节 定量分析样品的前处理方法,催化能力： HgSeCuMn CuSO4:

16、价廉、不挥发、毒性小 汞类： 最有效，易生成Hg(NH3)2SO4 卤素，生成难解离的HgX,第二节 定量分析样品的前处理方法,d. 消解注意问题 凯氏瓶放小漏斗，瓶内放玻璃珠或沸石 消解完全：消解液无色或绿色 一般变绿色，继续加热30分钟 毒气橱中进行，初小火，泡沸停止加大火 硫酸还原SO2、H2O，分解SO3,第二节 定量分析样品的前处理方法,氮结构状态 -N=N- 、-NH=NH- 产物为氮气，加锌粉还原后处理 硝酸盐或亚硝酸盐 产物为HNO2或HNO3，加水杨酸或苯酚 硝基或亚硝基化合物，加硫代硫酸钠还原为氨基 杂环中的氮 氢碘酸还原成氢化杂环,第二节 定量分析样品的前处理方法,蒸馏与

17、吸收,第二节 定量分析样品的前处理方法,水蒸气中水加H2SO4使甲基红呈显著红色 40NaOH过量，溶液为黑色 初速度不能过快 蒸馏终点：时间1小时；馏出液体积2/3 甲基红试液检查（不变黄）,第二节 定量分析样品的前处理方法,滴定 a. 直接滴定法 滴定液：H2SO4滴定液(0.005mol/L) 指示剂：甲基红-溴甲酚绿 终点颜色：蓝绿色灰紫色 2NH3.H3BO3+H2SO4(NH4)2SO4+2H3BO3,第二节 定量分析样品的前处理方法,b. 剩余滴定法 吸收液：定过量HCl或H2SO4 滴定液：标准碱溶液 指示剂：甲红,第二节 定量分析样品的前处理方法,第二节 定量分析样品的前处理

18、方法,3）硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏；破坏后，高价无机金属离子。 不适用碱土金属、与硫酸形成不溶性硫酸盐。,经有机破坏的方法,第二节 定量分析样品的前处理方法,2. 干法破坏 1）高温炽灼法 待测元素的有机药物高温炽灼 无机元素 检查、测定,含碘药物鉴别 样品置坩锅中（无水碳酸钠） 直火炽灼 紫色碘蒸气,第二节 定量分析样品的前处理方法,含氟、氯、溴元素药物鉴别 样品置坩锅中无水碳酸钠 直火炽灼 加水溶解、鉴别,第二节 定量分析样品的前处理方法,含磷药物的测定 甘油磷酸钠注射液瓷坩锅 氧化锌 600炽灼 加水、盐酸溶解 钼蓝比色,第二节 定量分析样品的前处理方法,含砷药物的检查

19、有机结合砷无水碳酸钠 （氢氧化钙、硝酸镁） 炽灼（700） 无机砷酸盐 依法检查 右旋糖酐铁、植物油提取物,第二节 定量分析样品的前处理方法,原理： 样品充满氧气的燃烧瓶 燃烧 燃烧产物进入吸收液 检查或测定,2）氧瓶燃烧法,第二节 定量分析样品的前处理方法,特点,经有机破坏的方法,第二节 定量分析样品的前处理方法,a. 快速、简便、破坏完全； b. 仪器简单； c. 适用于含卤素、硫、磷、硒等； d. 样品用量少（1020mg）。,仪器装置,第二节 定量分析样品的前处理方法,a. 氧瓶 硬质玻璃碘瓶 容量大小随样品量而定 一般500ml、1000ml 含氟药物用石英或聚氯乙烯瓶,第二节 定量

20、分析样品的前处理方法,b. 铂丝 瓶塞底部熔封铂丝 铂丝下端做成螺旋状 长度为瓶身2/3 铂丝作用：固定样品、催化作用 镍铬丝替代,第二节 定量分析样品的前处理方法,c. 无灰滤纸,按虚线折叠 样品置于中间 固定铂丝螺旋处,第二节 定量分析样品的前处理方法, 操作 取样（10-20mg）无灰滤纸、固定 氧瓶吸收液、充氧 燃烧 振摇吸收 测定,第二节 定量分析样品的前处理方法,注意事项 a. 安全防护 燃烧温度10001200 以防爆炸 压紧、防瓶塞冲出 戴防护眼镜、瓶外包毛巾,第二节 定量分析样品的前处理方法,b. 充氧 充分 通氧气1-2min 通气管近液面 瓶内空气排尽,第二节 定量分析样

21、品的前处理方法,c. 吸收完全 燃烧完全（灰白色残渣） 燃烧不完全（黑色） 燃烧完全放置几分钟 温度降下 充分振摇（30分钟） 烟雾完全吸收,第二节 定量分析样品的前处理方法,Cl、F白色烟雾 Br棕色 I紫色,第二节 定量分析样品的前处理方法,燃烧产物、吸收液及测定方法,样品 燃烧产物 吸收液 测定方法 含氟 HF+CO2+H2O 水 茜素氟蓝比色 含氯 HCl+CO2+H2O 1mol/L NaOH 银量法、汞量法 分光光度法 含溴 Br2+HBr 1mol/L NaOH 银量法 +CO2+H2O 硫酸肼饱和液分光光度法 含碘HIO3+I2+HI H2O2(30%) 银量法、碘量法 +CO

22、2+H2O 0.05mol/L NaOH 汞量法、分光光度法 含硫 SO3 H2O2 重量法 含磷 P2O5 水 钼蓝比色 含硒 SeO2+SeO3 硝酸 二氨基萘比色,第二节 定量分析样品的前处理方法,例1 碘苯酯的测定,吸收液,淀粉指示剂,第二节 定量分析样品的前处理方法,2NaI+Br2=2NaBr+ I2 I2+5Br2+6H2O=2HIO3 +10HBr,R-I I2+NaI+NaIO3+H2O+CO2,a. 燃烧与吸收,讨 论：,b. 溴-醋酸作用,第二节 定量分析样品的前处理方法,e. KI作用 5I- + IO3- + 6H+ 3I 2 +H2O,c. 甲酸作用,d. 通空气

23、赶尽溴蒸气,第二节 定量分析样品的前处理方法,f. 滴定 I2+2Na2S203 2NaI +Na2S406,化学计量关系：1：6 (1分子药物=I=HIO3=3I2=6Na2S2O3),第二节 定量分析样品的前处理方法,例2 芬那露片测定,吸收液,玫瑰紫色,第二节 定量分析样品的前处理方法,讨论 a. 燃烧与吸收 R-ClHCl+H2O+CO2+SO2+NO2 HCl+NaOHNaCl+H2O,b. 滴定反应 2Cl-+Hg2+HgCl2,第二节 定量分析样品的前处理方法,c. 乙醇作用 使HgCl2溶解 d. 硝酸作用 调溶液pH,第二节 定量分析样品的前处理方法,第三节药品质量标准分析方

24、法验证,方法验证目的:证明采用的方法准确、可靠（能代表真实结果）。,1. 研究新药时制定质量标准分析方法； 2. 药物生产方法变更、制剂组分变更、原分析方法修订； 3. 有关药分研究论文。,1. 鉴别试验。,需验证的分析项目有:,2. 原料药或制剂中有效成分含量测定。,3. 杂质或制剂中其他成分（防腐剂等） 的定量测定或限度检查。,4. 药品溶出度、释放度等功能检查中, 其溶出量的测定方法。,第三节药品质量标准分析方法验证,验证的内容有:,1.准确度 2.精密度 3.专属性 4.检测限 5.定量限 6.线性 7.范围 8.耐用性,第三节药品质量标准分析方法验证,一 准确度,指用该方法测定的结果

25、与真实值或参考值接近的程度，用回收率表示（） 准确度应在规定范围内建立,第三节药品质量标准分析方法验证,一 准确度,原料药： 用已知纯度的对照品或样品测定 用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定结果比较,制剂： 已知量被测物各组分混合物测定 向制剂中加入已知量的被测物 与另一个已建立准确度方法比较,第三节药品质量标准分析方法验证,一 准确度,第三节药品质量标准分析方法验证,制剂 标准添加法 （已知含量制剂+对照品） 加入80%、100%、120% 每一浓度测3份,一 准确度,第三节药品质量标准分析方法验证,制剂, 模拟处方法 空白辅料 加入已知量的对照品 加入量80%、100%、120%

26、每一浓度测3份,一 准确度,第三节药品质量标准分析方法验证,准确度要求 UV、HPLC、GC法 98.0102.0% 容量法 99.7100.3% 体内药物分析 85.0115.0%,二 精 密 度,在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用标准偏差SD或相对标准偏差RSD表示。以三种形式表达。,第三节药品质量标准分析方法验证,二 精 密 度,第三节药品质量标准分析方法验证,相同条件 一个分析者测定 所得结果的精密度,二 精 密 度,第三节药品质量标准分析方法验证,同一实验室 时间、分析者、仪器均不同时 测定的结果的精密度,二 精 密 度,3. 重现性(rep

27、roducibility),第三节药品质量标准分析方法验证,不同实验室 不同分析者 测定结果的精密度,药品分析方法的验证,RSD允许值 容量分析 0.2% 重量分析 0.5% 氧瓶燃烧法、凯氏定氮法 0.5% 紫外、原子吸收 1% HPLC、GC、 TLC 2%,二 精 密 度,指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料）可能存在下，采用的方法能准确测定的被测物的特性。是在分析复杂样品混合物时衡量其是否受到干扰及其程度的一种方法。,三 专 属 性,专属性 ( speciality ),第三节药品质量标准分析方法验证,鉴别反应：能与可能存在的物质或结构相似化合物区分,不含被测成分的样品呈负反应。,三 专 属 性,含量测定和杂质测定 杂质可获得: 杂质或降解产物不可获得:,第三节药品质量标准分析方法验证,四 检 测 限,指试样中被测物能被检测出最低浓度或量。,一种限度检验效能指标，既反映方法与仪器灵敏度和噪音大小，表明样品经处理后空白(本底)值高低。无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度或量。,第三节药品质量标准分