免疫组化步骤_第1页
免疫组化步骤_第2页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、免疫组化步骤1、 烤片：放于60烘箱内，20-25min；2、 脱蜡：二甲苯I、II、III，3次，5min/次；注：从烘箱中拿出迅速放入二甲苯中，防止蜡凝；3、 复水：100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精-50%酒精，5min/次；4、 ddH2O洗2次，5min/次；5、 抗原修复：柠檬酸盐抗原修复液1x（迈新MVS-0100），125，5min；注：1x修复液：198ml ddH2O + 2ml抗原修复液100x,混匀；抗原修复高压锅的使用：确定垫圈和导热片的放入，加入700ml ddH2O，放入铁架固定切片盒，注意不要压到导热片，盖上锅盖检查排气嘴

2、是否可以自由旋转，锅盖上的“close”对准白点，“open”所指处与边缘无缝隙，设置程序，开始；结束后等到排气口的红色指示消失即可打开锅盖；6、 修复结束后冷却至室温（30min），1xPBS洗2次，5min/次；7、 去除 H202酶：3%H202，15min；注意遮光；注：用1xPBS稀释30% H202至3% H202（如5ml 30% H202+45ml PBS 50ml 3%H202）8、 PBS 2次，PBST 1次，5min/次；9、 封闭（blocking）：先将片子擦干，注意保持组织部分的湿润，再用专用记号笔沿距离组织3mm处画圈，然后加入封闭液，室温1h，湿盒；封闭液不要

3、过多，以免溢出；注：封闭液：1xPBS，0.3%Triton X-100，10% goat serum（如：870ulPBS+30ul 10% Triton X-100+100ul 10% goat serum 1ml封闭液）；10、 孵一抗：用封闭液稀释一抗，不同的抗体稀释的倍数不同，4，过夜（有的抗体是室温1h），湿盒。对照组加不含抗体的封闭液；注：拿到4冰箱时动作延缓慢，小心不要使一抗跑出圈外；加一抗前可以重新画圈，以免一抗外流；常用抗体的稀释比例：GFAP-1:200，Ki67-1:200，CD31-1:201:40，Flag-1:200，Nestin-1:200，III-Tubulin-1:100011、 室温，30min；（从冰箱拿出时动作也要缓慢）12、 PBST洗3次，5min/次；注：PBST：1L 1xPBS+10ml 10%Triton X-1000 ;13、 加荧光标记的二抗（封闭液稀释抗体1:1000），1h，室温，湿盒；加HRP标记的二抗（封闭液稀释抗体1:10000），室温30min; 注：加二抗前可以重新画圈，以防二抗外流；14、 PBST洗3次，5min/次；15、 若复染：DAPI染色，避光，5min；若TSA放大310min,PBST洗3次，5min/次，再复染DAPI；注：DAPI：50uM DAPI用1xPBS稀释10

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 辅导培训

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论