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文档简介

1、从口腔脱落细胞中提取人类基因组 DNA一实验目的1、了解从细胞中提取DNA勺基本原理2、学习从口腔脱落细胞中提取高分子量DNA勺基本操作步骤和会影响提取效果勺注意事项。二实验原理1. 用蛋白酶K （使膜上蛋白变性分解）和去污剂 SDS（破坏细胞膜的脂质结 构）共同消化细胞。2. 然后酚、氯仿等有机溶剂进行抽提，进行DNA勺纯化，去掉蛋白质、RNA 多糖等生物大分子。3. 最后用无水乙醇沉淀DNA干燥后用TE溶解，在4C下可保存一年。三实验步骤1、先用清水漱口。然后用舌头舔颊粘膜上颚、用牙刮颊部，嘬咀，用分泌 出勺唾液反复漱口；将唾液吐到杯中。用 1ml 生理盐水洗涤，后将 1.5ml 液体 转

2、入1个干净的EP管中，2000rpm离心5分钟，倒掉上清。2、重复用 1.0ml 生理盐水洗涤沉淀 1 次，离心，去上清。3、 沉淀中加500卩l 1x细胞裂解液（STE,打散细胞团、混匀，再加15卩I 20mg/ml蛋白酶K,充分混匀。55 C水浴30min。4、力卩500卩I饱和酚，轻摇混匀，室温12000rpm离心10min。5、上清（注意不要吸到中间层白色絮状物质以及下层有机相）移至另一加入装有500卩I氯仿的EP管，轻摇混匀，室温12000rpm离心10min。6、吸取400卩I上清（注意不要吸到中间层白色絮状物质以及下层有机相） 至已装有900卩l预冷无水乙醇的离心管，混合均匀，可

3、见白色絮状沉淀， 10000rpm离心5min，DNA沉淀在管底。7、 去上清，加入 70聽醇1ml清洗沉淀，10000rpm离心5min，去上清（尽 量用小枪头将液体去干净，但注意不要将沉淀也吸走） ，室温干燥5mi n,再用 50卩l TE buffer 溶解沉淀，4 C储藏备用。四实验结果五结果分析编号：100如图所示，100号几乎没有提取出DNA只有很弱的一条带，如果量再多一 些的话，应该也看得到会有几条带。经过分析后认为主要以下几点原因：【11 .唾液稀释过度，导致取到的细胞 很少。【21 .在破碎细胞的时候进行的不彻底， 没有混匀，导致DNA抽提不完全。【31 .加入活性去污剂到加

4、热30min的间隔有些长导致部分 DNA被 DNA水解酶 降解。【41 .加入饱和酚的时候没有摇匀，蛋白质的去除不彻底，部分 DNA与蛋 白质结合，在分离DNA去除蛋白质的时候损失了不少 DNA此外，不同的条带代表提取出的 DNA勺大小不同，在实验过程中，可能由于 剧烈震荡，或DNA水解酶的缘故使得 DNA链被打断。因此出现了不同的几个条 带。六.注意事项1. 取唾液时既不能过分稀释，也不能太粘稠，发现细胞不足时要及时补充2. 裂解细胞的时候，要充分混匀活性去污剂，但震荡也不能太剧烈。最好及时放入水域锅中加热。3. 加苯酚后要充分混匀，之后离心，尽可能多的将上清吸出，但注意不要取 到中间的蛋白质。4. 在最后用70%勺乙醇清洗DNA后要尽可能

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