第一章血液标本采集和血涂片制备

1、第一章 血液标本采集和血涂片制备 通过本章学习，你将能回答关于“血液标本采集和血涂片制备”的下列问题：1血液检验有哪些标本类型及其应用范围？2临床有哪些主要采血方式及其应用范围？3使用真空采血管有哪些优点和用途？4常用抗凝剂各自有什么特点和用途？5如何避免患者状态对检验结果的影响？6如何避免采血操作不当对检验结果的影响？ 7运送和接收血液标本有哪些规范要求？8如何处理检验后的血液标本？9如何保证合格的血液推片质量？10Wright染色依据何原理？如何保证染色质量？第一节血液标本采集正确采集血液标本是获得准确、可靠检验结果的关键，在自动化检验仪器普遍应用的现代临床实验室，分析前质量管理是全程质量

2、管理的重点。医学实验室质量和能力的专用要求ISO/IEC15189文件把“分析前程序”定义为：按照时间顺序，从临床医嘱开始，到分析检验程序终止时的步骤。包括：检验申请、患者准备、原始样品采集、运送到实验室并在实验室内传输。血液标本的采集和处理是分析前质量控制的主要环节，是十分重要的基础性工作。一、标本采集的一般要求（一）检验申请单检验申请单或电子申请表中应包括患者最基本的信息，以识别患者和经授权的申请者，同时应提供相关的临床信息。患者相关的临床信息至少应包括姓名、性别、年龄，以备解读检验结果之用。（二）标本采集和处理具体要求实验室管理文件应向负责采集标本的人员提供标本采集和处理具体要求。这些要

3、求应包括在标本采集手册中（表1-1）。表1-1 正确采集和处理标本具体要求具体要求细目1患者告知：向患者提供在标本采集前应做准备的信息和说明2患者准备说明书：如提供给护士和抽血人员的说明书3标本采集：说明血液、尿液和其他体液标本容器和添加物4标本采集类别和数量5标本采集日期和时间，包括特定采集时间6标本处理要求：从标本采集至实验室接收之间的任何处理要求（运送、冷冻、保温、立即送检等）7标本采集人员：记录身份信息8标本采集器材和安全处理（三）标本信息完整性标本应可通过检验申请单溯源到特定的个体，实验室不应接收或处理缺少适当标识的检验申请单。1如果标本标识不明确，或者标本不稳定（如脑脊液、活检标本

4、等），不便重新采集的标本或属于紧急情况，实验室可先处理标本，但是不发送检验报告，直至申请检验医师或标本采集人员承担标本鉴别和接收的责任，或者提供适当的信息。2根据申请检验项目的特性以及实验室的相关规定，标本应在一定时间范围内送检。急症或危重患者的标本要特别注明和标识。3根据标本采集手册的规定，标本应保持在一定的温度范围内，并含有规定的防腐剂，以确保标本的完整性。4所有接收的标本应当记录在登记本、工作表、计算机或其他类似系统中，并记录标本接收的日期和时间、接收人员等。（四）标本拒收实验室应当制定标本接收和拒收的标准文件。因不同的检验项目对标本的要求不同，故应分别制定拒收标准。因“让步”而接收的不

5、合格的标本，其检验报告上应注明标本存在的问题，在解释结果时必须特别说明。二、血液标本类型（一）全血 1静脉全血应用最多的全血（whole blood）血液标本来自静脉，采血的部位有肘前静脉、腕静脉，小儿和新生儿有时用颈静脉和股静脉。2动脉全血主要用于血气分析，采血部位有股动脉、肱动脉和桡动脉。3毛细血管全血也称皮肤采血，适用于仅需微量血液的检验或婴幼儿，采取的部位有耳垂、指端，小儿有时为拇趾或足跟。（二）血浆 全血抗凝离心后除去血细胞成分即为血浆（plasma），用于血浆化学成分测定和凝血试验。（三）血清血清（serum）是血液离体后自然凝固后分离出来的液体，血清与血浆相比较，主要缺乏纤维蛋白

6、原），其他化学成分多无差异。血清主要用于临床化学和免疫学等检测。（四）分离或浓缩的血细胞成分有些特殊的检验项目需要特定的细胞作为标本，如浓集的粒细胞、淋巴细胞、分离的单个核细胞等。三、血液标本采集方法血液标本的采集按部位分为皮肤采血、静脉采血、动脉采血；按采血方式又可以分普通采血法和真空采血法。（一）皮肤采血法1器材准备采血前，准备好一次性微量吸管、稀释液、消毒器材等。2部位选择皮肤采血主要用于微量用血的检查和婴幼儿血常规检验，一般采用手指或耳垂，婴幼儿由于手指太小可以用足跟采血。凡局部有水肿、炎症、发绀或冻疮等均不可穿刺采血；严重烧伤患者可选择皮肤完整处采血。手指血细胞学分析结果与静脉血有差

7、异，条件允许尽可能静脉采血。3采血操作轻轻按摩患者的采血部位（左手无名指指尖内侧），使局部组织自然充血，消毒皮肤。干燥后，紧捏采血部位两侧，右手持一次性消毒采血针迅速刺入，深度以23mm为宜，稍加挤压血液自动流出。第1滴血液因混入组织液相对较多，多弃去不用。用微量吸管吸取血液至要求的刻度（化学、免疫学检验用尼龙毛细管吸取），然后用无菌干棉球压住穿刺点以止血。采血针的宽度和采血的深度对皮肤采血的影响见图1-1。 图1-1 采血针的宽度和采血的深度对皮肤采血的影响4注意事项采血时要注意严密的消毒和生物安全防范，采血针、微量吸管一次性使用；取血时可稍加挤压，但切忌用力挤压，以免混入组织液。血液流出后

8、易凝固，采血的动作要快。进行多项检查时，采集标本次序为血小板计数、红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数及白细胞分类。（二）静脉采血法1普通采血法普通采血法指的是传统的采血方法，即非真空系统对浅静脉穿刺的采血方法。（1）准备器材：主要是试管、注射器、消毒器材等。（2）选择采血静脉：让患者坐位或卧位，一般选肘正中静脉，让前臂水平伸直放在垫枕上，暴露穿刺部位，触摸选择容易固定、明显可见的静脉。（3）采血操作：在采血部位上端扎压脉带（松紧适宜），嘱患者握紧拳头，使静脉充盈暴露。消毒静脉穿刺处；左手拇指绷紧皮肤并固定静脉穿刺部位，沿静脉走向使针头与皮肤成30斜角迅速刺入皮肤，然后放低注射器成5角向前刺破

9、静脉壁进入静脉腔，见有回血后，将针头沿血管方向探入少许，以免采血针头滑出，但不可用力深刺，以免造成血肿；同时，松解压脉带。右手固定注射器，缓缓抽动注射器内芯至所需血量后，嘱患者松拳，用消毒干棉签按压穿刺点，迅速拔出针头，继续按压穿刺点数分钟。（4）注意事项：根据检查项目、所需采血量选择试管；严格执行无菌操作，严禁在输液、输血的针头或皮管内抽取血标本。抽血时切忌将针栓回推，以免注射器中气泡进入血管形成气栓；抽血不宜过于用力，以免产生泡沫而溶血。2真空采血法真空采血法又称为负压采血法。具有计量准确、传送方便、封闭无菌、标识醒目、刻度清晰、容易保存等优点。主要原理是将有胶塞头盖的采血管抽成不同的真空

10、度，利用针头、针筒和试管组合成全封闭的真空采血系统，实现自动定量采血。（1）主要器材：真空采血系统由持针器、双向采血针、采血管构成（图1-2，图1-3）。可进行一次进针，多管采血。真空采血管的种类和用途见表1-2。 图1-2 真空采血管 图1-3 真空采血针表1-2 真空采血管种类和用途采血管 用途标本操作步骤添加剂添加剂作用机制红色（玻管）（Red）生化/血清学试验血清采血后不需混匀，静置1h 离心无（但内壁涂有硅酮，其作用：避免血细胞附壁，防止离心时细胞破碎而释放细胞内物质，影响试验结果）红色（塑管）（Red）生化/血清学试验血清采血后不需混匀，静置1h 离心无（内壁涂有硅酮）硅胶血液凝固

11、激活剂桔红色（Orange）快速生化试验血清采血后立即颠倒混匀8次，静置5min离心促凝剂：纤维蛋白酶激活血液凝固绿色（Green）快速生化试验血浆采血后立即颠倒混匀8次，离心抗凝剂:肝素钠、肝素钠锂抑制凝血酶金黄色（Gold SST管）快速生化试验血清采血后立即颠倒混匀5次，静置30min离心惰性胶体促凝剂硅胶血液凝固激活剂浅绿色PST管（Lt Green）快速生化试验血浆采血后立即颠倒混匀5次，离心惰性胶体肝素锂抑制凝血酶紫色（Lavender，玻管）血常规试验全血采血后立即颠倒混匀8次，试验前混匀标本EDTA-K3（液体）螯合钙离子紫色（Lavender塑管）血常规试验全血采血后立即颠倒

12、混匀8次，试验前混匀标本EDTA-K2（干粉喷洒）螯合钙离子黄色（yellow，玻管）微生物培养血清不需混匀，静置1h 离心无菌，含茴香脑磺酸钠（sodium polyanetholesulfonate，SPS）抑制补体、吞噬细胞和某些抗生素，以检出细菌灰色（gray）血糖试验血浆采血后立即颠倒混匀8次，离心氟化钠和碘乙酸锂抑制糖分解浅蓝色（Lt Blue） 凝血试验全血采血后立即颠倒混匀8次，试验前混匀标本枸橼酸钠血液=19鳌合钙离子黑色（Black）红细胞沉降率试验全血采血后立即颠倒混匀8次，试验前混匀标本枸橼酸钠血液=14鳌合钙离子（2）静脉选择和消毒：同普通静脉采血法。（3）采血方法1

13、）硬接式双向采血针的采血操作：拔除采血穿刺针的护套，左手固定患者的前臂，右手拇指和食指持穿刺针，沿静脉走向使针头与皮肤呈30角，快速刺入皮肤，然后呈5角向前刺破静脉壁进入静脉腔。采血时将真空采血试管推入硬接式双向采血针的刺塞针端中（有许多品牌双向针并无明显回血），静脉血就会自动流入采血试管中。拔下采血试管后，再拔出穿刺针头，用棉球按压穿刺点止血，拧下针头置消毒液中浸泡或作毁型处理，持针器可继续使用。2）软接式双向采血针的采血操作：静脉穿刺同上。有回血后将真空管盖胶塞的中央对准刺塞针（双向针的另一头用软橡皮套着）直接穿刺，血液被自动吸入试管内，同时松解压脉带。如需多管血样，将刺塞针拔出刺入另一真

14、空采血管即可。达到采血量后，嘱患者松拳，用消毒干棉签按压穿刺点，迅速拔出穿刺针，继续按压穿刺点数分钟。3）采血管混匀：抗凝血需要立即轻轻混匀采血管。有分离胶和促凝剂的采血管需颠倒混匀至少56次。4）采血后处理：根据生物安全原则，根据各种真空管系统的特点，处理废弃的采血针和持针器，达到避免误伤或污染的目的（图1-4）。 图1-4真空管系统采血法步骤（4）注意事项1）检查盖塞：使用前切勿松动采血试管盖塞，以防止采血量不准。2）穿刺针乳胶套的作用：拔除采血试管后，封闭采血，防止继续出血而污染周围环境，采血时不能取下。3）采血针运行：如果采血针进入静脉，可顺原路缓慢退回，有回血即可。4）一次采血、多管

15、血液分配顺序（图1-5）：使用玻璃试管顺序：血培养试管、无抗凝剂血清管、枸橼酸钠抗凝试管、其他抗凝剂试管。使用塑料试管顺序：血培养试管（黄色）、枸橼酸钠抗凝试管（蓝色）、加或未加血液凝固激活物或凝胶分离的血清管、加凝胶或未加凝胶的肝素管（绿色）、EDTA抗凝管（紫色）、加血糖分解抑制物试管（灰色）。 图1-5 多管血液采集顺序（三）动脉采血法1器材准备 2ml或5ml干燥注射器（以玻璃注射器为佳）、1000U/ml无菌肝素生理盐水溶液、橡皮塞、消毒器材等。2选择动脉 多选用桡动脉（最方便）、股动脉、肱动脉。3采血方法 以血气分析标本为例，常规消毒患者皮肤及操作者左手食、中指后，以左手绷紧皮肤，

16、右手持注射器，用左手食指触摸动脉搏动处，以3045进针。动脉血有较高的压力，会自动注入空筒内，至2ml后拔出针头，嘱患者按压采血处（穿刺点）止血1015min。立即用软木塞或橡皮塞封闭针头（针头斜面埋入橡皮中即可），以隔绝空气，搓动注射器，使血与肝素混合，并立即送验。4注意事项（1）避免空气：用于血气分析的标本，采集后立即封闭针头斜面，再混匀。（2）立即送验：标本采集后应立即送检，若不能，则标本应置于26保存，但不应超过2h。（3）防止血肿：采血完毕，拔出针头后，嘱患者用消毒干棉签按压采血处（穿刺点）止血1015min，以防形成血肿。四、血液标本抗凝临床实验室使用全血和血浆标本时，通常需要应用

17、抗凝剂。所谓抗凝就是采用物理或化学方法除去或抑制某种凝血因子的活性，以阻止血液凝固。这种阻止血液凝固的物质称为抗凝剂或抗凝物质。1化学抗凝剂 常用化学抗凝剂的用途和特点见表1-3。表1-3常用化学抗凝剂的用途与特点抗凝剂抗凝原理适用项目注意事项乙二胺四乙酸与血液中Ca2+结合成螯合物，而使Ca2+失去活性全血细胞学分析抗凝剂用量和血液的比例，采血后须立即混匀枸橼酸盐与血液中Ca2+结合成螯合物，使Ca2+失去活性血沉、凝血试验、输血保养液抗凝能力相对较弱，抗凝剂浓度、体积和血液的比例非常重要肝素加强抗凝血酶，灭活丝氨酸蛋白酶，阻止凝血酶形成血气分析；肝素锂适用于红细胞渗透脆性试验电极法测血钾与

18、血清结果有差异；不适合血常规检查草酸盐草酸根与血液Ca2+形成草酸钙沉淀，使其无凝血功能草酸钾干粉常用于血浆标本抗凝容易造成钾离子污染；现应用已减少促凝剂激活凝血蛋白酶，加速血液凝固缩短血清分离时间，特别适用于急诊血清生化检验常用促凝剂有凝血酶、蛇毒、硅石粉、硅碳素等分离胶高黏度凝胶在血清和血块间形成隔层，达到分离血细胞和血清目的能快速分离出清晰的血清标本；有利于标本的冷藏保存分离胶质量影响分离效果和检验结果；分离胶管成本高2物理方法抗凝将血液注入有玻璃珠的器皿中，并及时转动，纤维蛋白缠绕凝固于玻璃珠上，从而防止血液凝固，此抗凝方法常用于血液培养基的羊血采集。另外，也可用竹签搅拌除去纤维蛋白，

19、以达到物理抗凝的目的。此类标本主要用于测定结果受抗凝剂影响的血液标本的抗凝，如红斑狼疮细胞检查。第二节血液标本采集的质量保证标本采集是分析前质量管理的主要内容，分析前程序的大部分工作是由患者、医生、护士、运送人员及检验人员在实验室以外的空间完成的。这一系列过程的多个环节在临床实验室难以单独监控。因此，临床反馈不满意检验结果，80%的最终可溯源到标本质量不合要求。为了准确地反映检验结果，临床医护人员和检验人员，应了解标本采集前患者的状态和影响结果的因素，并将要求和注意事项告知患者，要求给予配合，使所采集的标本尽可能少受非疾病因素的影响。一、采血服务（一）环境要求1空间 临床实验室（尤其是门、急诊

20、实验室）的采血环境应该是人性化设置，空间宽敞，光线明亮，通风良好，采血台面高低和宽度适宜，座椅舒适、可转动或斜躺。2窗口 有足够采血窗口和工作人员，保证在患者最多的时刻，使患者排队等候采血的时间不超过15min，排队人数不超过5人。采血等候处，最好设置指示采血顺序、叫号设备系统等。窗口之间最好相互隔开，保护患者隐私和避免窗口之间的相互干扰。（二）生物安全1防止交叉感染 采血过程尽可能采用一次性用品，包括压脉带、清洁纸垫和消毒用品。采血废弃物品按照医疗垃圾统一处理。2履行环境消毒 采血处用紫外线灯定时对周边环境和空气消毒，用消毒液擦拭台面消毒。二、患者状态要求在标本采集过程中，应注意患者的生理状

21、态、饮食和药物对检验结果的影响。1 患者生理状态和饮食的影响 患者生理状态和饮食对检验结果的影响见表1-4。表1-4 患者的生理状态、饮食对检验结果的影响影响因素评价饮食不同食物对检验结果的影响不同。普通进餐后，血三酰甘油将增高50%，血糖增加15%，丙氨酸氨基转移酶及血钾增加15%。高蛋白膳食可使血尿素、尿酸及血氨增高；高脂肪饮食可使三酰甘油大幅度增高；高核酸食物（如内脏）可导致血尿酸明显增高饥饿长期饥饿可使血浆蛋白质、胆固醇、三酰甘油、载脂蛋白、尿素等减低。相反，血肌酐及尿酸则增高，由于饥饿时机体的能量消耗减少，故血中T3、T4水平将明显减低运动和精神精神紧张、情绪激动和运动可以影响神经-

22、内分泌系统，使儿茶酚胺、皮质醇、血糖、白细胞、中性粒细胞等增高。运动也会导致许多其他检测指标发生改变生物钟人体存在多种生物周期，如促肾上腺皮质激素、皮质醇清晨67时最高，深夜02时最低月经和妊娠在月经周期的3个不同时期，与生殖有关的多种激素将产生不同的变化。纤维蛋白原在月经前期开始增高，血浆蛋白质则在排卵时减低；胆固醇在月经前期最高，排卵时最低饮酒长期饮酒者可导致丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、谷氨酰转移酶增高，慢性酒精中毒者，其血中胆红素、碱性磷酸酶、三酰甘油等增高吸烟长期吸烟者血中白细胞计数、血红蛋白浓度、碳氧血红蛋白、癌胚抗原等增高；而免疫球蛋白G则减低，血管紧张素1转换酶活性减低

23、诊疗已作或正进行诊疗时，可对检验结果产生影响，包括外科手术、输液或输血、穿刺或活检、透析、口服葡萄糖耐量试验、服用某些药物等2药物对检验结果的影响 药物干扰检验结果主要有4条途径：影响反应系统待测成分物理性质。参与检验化学反应。影响机体组织器官生理功能和（或）细胞活动中的物质代谢。对器官的药理活性和毒性作用。（1）药物对血液生化检验的干扰：乙酰水杨酸及其代谢产物因具有还原性，可干扰Trinder反应导致检验结果减低。右旋糖酐干扰双缩脲法测定总蛋白，使结果假性增高。汞化合物与氟化物可抑制尿素酶活性，均致尿素假性减低。维生素C、高浓度葡萄糖和一些抗生素可与碱性苦味酸反应生成红色，引起肌酐增高。大量

24、含氟、溴或碘离子药物治疗时，可使血清氯偏高。（2）成瘾性药物：许多成瘾性药物可通过各种机制对人体代谢功能产生影响，从而使多项生化检测指标发生改变：吗啡：可使血淀粉酶、脂肪酶、ALT、AST、ALP活性增高，又使胆红素、胃泌素、促甲状腺素（TSH）、催乳素增高，而引起胰岛素、去甲肾上腺素、神经紧张素及胰多肽水平减低。大麻：可增高血中钠、钾、氯、尿素、胰岛素浓度，减低血肌酐、血糖及血尿酸。海洛因可使PCO2、甲状腺素、胆固醇、血钾增高，PO2及清蛋白则减低。三、采血操作对检验结果的影响1采血时间体内有些化学成分的血浓度具有周期性变化。因此，采血应：尽可能在上午9时前空腹进行。尽可能在其他检查和治疗

25、之前进行。根据药物浓度峰值期和稳定期特点进行，以检测药物浓度。在检验申请单上注明采血的具体时间。2采血部位不同部位的血液样本中某些检测成分会有差异，甚至对检测结果产生严重影响，故应选择恰当的采血部位。采血不畅容易可引起血小板破坏和凝血因子的消耗等。3采血体位人的体位改变可引起血液许多指标发生变化。从仰卧到直立时，由于有效滤过压增高，水及小分子物质从血管内转移到组织间隙，血浆容量可减少12%。因血液浓缩缘故，血中细胞及大分子物质相对增高5%。受这种体位影响的指标包括红细胞计数、白细胞计数、血细胞比容、丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、总蛋白、清蛋白、免疫球蛋白、载脂蛋白、三酰甘油、低密度脂蛋白、胆固

26、醇、醛固酮、肾上腺素、去甲肾上腺素和血管紧张素等。4压脉带使用静脉采血时，压脉带压迫时间过长可使多种血液成分发生改变。如压迫40s，总蛋白可增加4%，AST增加16%；压迫超过3min时，因静脉扩张、淤血，水分转入组织间隙，血液浓缩，可使清蛋白、血清铁、血清钙、碱性磷酸酶、天冬氨酸氨基转移酶、胆固醇等增高5%10%，血清钾增高更明显。同时，由于氧消耗增加，无氧酵解加强，乳酸增高，pH值减低。因此，在采血时应尽量缩短压脉带的压迫时间，一般应小于1min。在见到血液进入采血容器后，立即解开压脉带。采血时，勿嘱患者作反复握拳动作。当需要重复采血时，建议采用另一只手臂。5输液应尽可能避免在输液过程中采

27、血，因为输液不仅使血液稀释，而且输液的成分会严重干扰检验结果。最常见的干扰项目是葡萄糖和电解质。一般情况下，输入碳水化合物、氨基酸、蛋白质或电解质的患者应在输液结束1h后采血，而输入脂肪乳剂的患者应在8h后采血。如果必须在输液时采血检验，也要避免在输液同侧静脉采血。6溶血、凝血和脂血血细胞内、外各种成分有梯度差，有的成分相差数十倍（表1-5）；溶血标本造成的检验差错可造成严重的临床错误判断后果，如血清钾离子浓度，故在采集、运送、保管和分离血清时应尽量避免溶血。发生溶血的主要原因有容器不洁、血液接触水分、大量泡沫、强力振荡、注射器带着针头强压注血和分离血清时操作不当等。表1-5 溶血引起血液成分

28、浓度或活性变化血液成分红细胞内浓度（或活性）与血清浓度（或活性）的比率1%红细胞溶血后血清中浓度（或活性）的变化率（%）*乳酸脱氢酶（LD）1601272.5天冬氨酸氨基转移酶（AST）401220.0钾23124.4丙氨酸氨基转移酶（ALT）6.7155.0葡萄糖（Glu）0.8215.0无机磷0.7819.1钠0.1111.0钙0.1012.9*假设血细胞比容为0.50四、血液标本运送、保存与处理临床实验室工作人员对血液标本的处理应特别注意：把每一份标本都看作是无法重新获得、唯一的标本，必须小心地采集、保存、运送、检测和报告。要视所有的标本都有传染性，对“高危”标本，如乙型肝炎、艾滋病患者

29、血液标本等，要注明标识。严禁直接用口吸取标本，严禁标本与皮肤接触或污染器皿的外部和实验台。检验完毕，标本必须消毒处理，标本容器要高压消毒、毁型、焚烧等。（一）血液标本运送血液标本的运送可采用人工运送、轨道传送或气压管道运送等。无论何种运送方式，都应该注意以下几个问题：1唯一标识原则采集后的血液都应具唯一标识，除编号之外，还包括患者姓名等最基本信息。目前，解决唯一标识最好的方式是应用条形码系统。2生物安全原则应使用可以反复消毒的专用容器运送。特殊标本应有特殊标识字样（如剧毒、烈性传染等）的盒子密封运送。必要时，还应使用可降温的运送容器。气压管道运送必须使用真空采血管，确保试管管盖和橡皮塞牢固。3

30、尽快运送原则标本尽快检验，符合检验质量要求和临床诊治的需求。若标本不能及时转运，或欲将标本送到上级检验中心进行分析时，应将标本装入试管内密封，再装入乙烯塑料袋，根据保存温度要求可置冰瓶或冷藏箱内运送。运送过程中应避免剧烈震荡。（二）标本拒收在检验前，对确认不符合血液采集规定要求的标本，应拒绝接受。标本拒收常见原因包括：溶血、抗凝标本出现凝固、血液采集容器不当、采血量不足或错误、转运条件不当、申请和标本标签不一致、标本污染、容器破漏等。标本拒收不但可造成检验费用增高和时间耗费，还可危害患者。因此，对所有涉及标本采集的工作人员，都必须在标本采集、转运和处理各个环节进行全面的培训。（三）血液检验前预

31、处理1分离血清或血浆标本采集后就应及时采用离心法分离血清或血浆。加抗凝剂血液，应立即离心分离血浆；无抗凝剂的血液分离血清时，则应置于37 水浴箱内或室温一段时间，待血块部分收缩，出现少许血清时才能离心分离。2分离细胞分离细胞原则上先是根据各类细胞的大小、沉降率、黏附和吞噬能力加以粗分，然后依据不同的检验目的，加以选择性分离。（四）血液标本保存血液标本保存应当在规定的时间内、确保标本特性稳定的条件下，按要求分为室温保存、冷藏保存、冷冻保存。1分离后标本若不能及时检测或需保留以备复查时，一般应置于 4 冰箱；某些需保存1个月的检测项目标本，存放于20 冰箱；需要保存3个月以上的标本，分离后（包括菌

32、种）置70保存。标本存放时需加塞，以免水分挥发而使标本浓缩。标本应避免反复冻融。2立即送检标本如血氨（密封送检）、红细胞沉降率、血气分析（密封送检）、酸性磷酸酶、乳酸及各种细菌培养、特别是厌氧菌培养等标本。3检测后标本检测后标本不能立即处理掉，应根据标本性质和要求按照规定时间保存，以备复查需要。急诊标本、非急诊标本须妥善保存，在需要重新测定时，确保标本检索快速有效。保存的原则是在有效的保存期内被检测物质不会发生明显改变。4标本信息的保存保存检验标本时应包括标本信息的保存，且与分离的血浆或血清标本相对应。（四）检验后血液标本的处理根据国家标准实验室生物安全通用要求（GB19489-2004），实

33、验室废弃物管理的目的如下：将操作、收集、运输、处理及处理废弃物的危险减至最小。将其对环境的有害作用减至最小。因此，检验后废弃的血标本应专人负责处理，根据医疗废物管理条例用专用的容器或袋子包装，由专人送到指定的消毒地点集中，一般由（专门机构）采用焚烧的办法处理。第三节 血涂片制备与染色血涂片制备和染色的质量直接影响细胞形态和检验结果。一张合格的血涂片应该是厚薄适宜，血膜头、体、尾明显，分布均匀，边缘整齐，两侧留有一定的空隙。一、血涂片制备（一）载玻片要求制备血涂片使用的载玻片要有很好的清洁度。新载玻片常有游离碱质，应用清洗液或10%盐酸浸泡24h，然后再彻底清洗。用过的载玻片可放入适量肥皂水或合

34、成洗涤剂的水中煮沸20min，再用热水将肥皂和血膜洗去，用自来水反复冲洗，然后擦干或烤干备用。（二）血涂片制备方法1手工推片法（1）薄血膜法1）采血：取血1小滴，置载玻片的一端1cm处或整片的3/4端。2）制备血涂片：左手持平载玻片，右手持推片接近血滴，使血液沿推片边缘展开适当的宽度，使推片与载玻片呈3045，匀速、平稳地向前移动推制成血涂片。3）干燥：将推好的血涂片在空中晃动，使其迅速干燥。天气寒冷或潮湿时可置于37温箱中保温促干，以免过时间长导致细胞变形、缩小。（2）厚血膜涂片法：取血1滴于载玻片的中央，用推片的一角将血由内向外旋转涂布，制成厚薄均匀、直径约1.5cm的圆形血膜，自然干燥后

35、，滴加数滴蒸馏水，使红细胞溶解，脱去血红蛋白，倾去水，血涂片干后即可染色镜检。本法特别适合检查疟原虫、微丝蚴等。2仪器自动涂片法 目前，有许多型号的自动血液分析仪配备有自动血涂片仪和染色仪，可以按操作者的指令执行自动送片、取血、推片、标记，甚至染色等。【方法学评价】良好的血涂片是染色后血液形态学检查的前提。薄血膜推片法用血量少、操作简单，是应用最广泛的方法。某些抗凝剂可使血细胞形态发生变化，分类时应注意鉴别。根据不同需要（如疟原虫、微丝蚴检查等）可采用厚血涂片法，阳性检出率高。此外，旋转器涂片法，可获得细胞分布均匀、形态完好的血片，但尚未普遍推广。【质量保证】 手工薄血膜法特别注意如下环节的质

36、量保证。（1）玻片：保持中性、洁净、无油腻。（2）制备血涂片：血涂片外观应头、体、尾分明，分布均匀，边缘整齐，两侧留有空隙。血膜外观应厚薄适宜。血膜厚度、长度与血滴的大小、推片与玻片之间的角度、推片时的速度及血细胞比容有关。一般血滴大、角度大、推片速度快则血膜厚；反之，则血膜薄。血细胞比容高于正常时，血液黏度较高，宜保持较小的角度，可得满意结果；相反，血细胞比容低于正常时，血液较稀，则应用较大的角度和较快的推片速度，才可获得满意的血涂片。良好的血涂片的“标准”为血膜由厚到薄逐渐过度。（3）染色：血涂片应在1h内完成染色，或在1h内用无水甲醇固定后染色。 二、血涂片染色（一）染料1碱性染料为阳离

37、子染料，如美蓝、天青、苏木素等，能接受质子，与细胞内酸性成分，如DNA、特异的中性颗粒基质、某些胞质蛋白等结合，主要用于细胞核染色。2酸性染料为阴离子染料，主要有伊红Y和伊红B，能释放质子，与细胞的碱性成分如血红蛋白、嗜酸性颗粒及胞质中的某些蛋白质等结合并染色。这两种染料特别适于与噻嗪类染料（亚甲蓝、天青B等）作对比染色，形成红蓝分明、色泽艳丽的结果。3复合染料同时具有阴、阳离子型的染料，如Wright染料、Giemsa染料。（二）染色方法1Wright染色法（1）染色原理1）染料的组成：Wright染液由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝溶解于甲醇而成。不同的细胞由于所含化学成分不一样，对各种染料

38、的亲和力也不一样，因此：细胞中的碱性物质，如红细胞中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞的嗜酸性颗粒等与酸性染料伊红结合染成红色，这些碱性物质又称为嗜酸性物质。细胞中的酸性物质，如淋巴细胞及嗜碱性粒细胞的嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色，这些酸性物质又称为嗜碱性物质。中性粒细胞的中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染成淡紫红色，称为嗜中性物质。2）pH值的影响：细胞多种成分属蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，当pH值小于pI（等电点）时，蛋白质带正电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；当pH值大于pI时，蛋白质带负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。因此，细胞染色对氢离子

39、浓度十分敏感。染色时常用缓冲液（pH6.46.8）来调节染色时的pH值，以达到满意的染色效果。（2）试剂1）Wright染液：Wright染料1.0g、甲醇（AR）600ml，甘油15ml。将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少量甲醇慢慢研磨，使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止，再加15ml甘油密封保存。甘油可防止甲醇过早挥发，同时也可使细胞着色清晰。2）磷酸盐缓冲液（pH 6.8）：磷酸二氢钾（KH2PO4）0.3g、磷酸氢二钠（Na2HPO4）0.2g、蒸馏水加至1

40、000ml。配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口储存。也可以配成10倍浓缩的储存液，应用时稀释。（3）染色1）标记血涂片：在已制备的血涂片的一端用红蜡笔编号。2）加Wright染液：待血涂片干透后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。然后将血涂片平放于染色架上，滴加染液35滴。3）加缓冲液：约1min后，滴加等量或稍多的缓冲液，轻轻摇动血涂片或用洗耳球对准血涂片加液处轻吹，使染液充分混和。4）冲洗染液：染色510min后，用流动的蒸馏水从血涂片一端冲去染液，约30s以上。染片背面用纱布擦净后，待干。5）判断染色结果：在正常情况下，良好的染色结果为血膜外观为淡紫红色；低倍镜下，细胞分布均匀；红细胞呈粉红色（非红色或柠檬黄色），少见染色颗粒，血细胞无人为形态如空泡。白细胞胞质能显示各类细胞的特有色彩，白细胞核染成紫红色，染色质（chromatin）和副染色质（parachromatin）清晰，粗细松紧可辨。2Giemsa染色法（1）染色原理：与Wright染色法基本相同。Giemsa染色法提高了噻嗪染料的质量，加强了天青的作用，本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。（2）试剂：Giemsa染料1.0g、甘油66ml、甲醇66ml。将1.0g Giemsa染料粉末全部倒入盛有66ml甘油的圆锥烧瓶内，在56