第六章合生元筛选汇总报告

1、第六章 合生元的筛选试验研究第一部分合生元对樱桃谷肉鸭生产性能、免疫器官指数和血清指标的影响 合生元作为一种促生长、无副作用的添加剂，被广泛应用替代抗生素。国内外研究发现，寡糖、益生素及其合生元等微生态制剂能够调控畜禽消化道微生态环境，影响氮、硫、钙、磷等的消化吸收及其后肠的发酵，进而提高其生产性能和改善机体健康状况。合生元( probiotics) 是由活菌制剂和多糖组成，其中活菌制剂能在动物肠道内大量繁殖，通过产生抗菌物质、营养竞争、占位竞争，增加有益微生物数量，调节胃肠道微生物平衡，保持胃肠道功能正常，从而加强肠道微生物区系的屏障功能和增强非特异性免疫，达到预防疾病和提高生产性能的目的。

2、本试验通过研究合生元对樱桃谷肉鸭生产性能、免疫器官指数和血清指标的影响，为进一步合理利用合生元提供理论依据。1材料与方法1. 1试验材料复合芽孢菌为第一期试验中经筛选性能表现最佳的复合芽孢II组，以枯草芽孢杆菌与地衣芽孢杆菌为主要菌种，产品活菌总数大于1. 0 1010 CFU /g。1. 2试验动物及日粮选取1日龄樱桃谷肉鸭750羽(由湖北春江鸭厂提供)， 随机分成5组， 每组5个重复， 每重复30羽，试验设计方案见表1。试验为期35 d，其中1 14 d为试验前期，15 35d为试验后期。各期基础日粮配方见表2。表1试验设计方案组别（Groups）日粮（Diets ）对照组（Control

3、 ）基础日粮（Basa l diet ）抗生素组（ Flavomycin）B+4mg /kg 黄霉素复合芽孢组（Probiotic） B+2mg /kg 黄霉素+1. 0 106cfu/g 复合芽孢菌合生元 （Synbiotic）B+2mg /kg 黄霉素+0.7 106cfu/g 复合芽孢菌+0.5g /kg 酵母细胞壁合生元 （Synbiotic ）B+2mg/kg 黄霉素+0.5 106cfu/g 复合芽孢菌+0.3g /kg酵母细胞壁+0.15g /kg核苷酸表2 基础日粮的组成及营养水平(风干基础) %Table 1-2 Com position and nutrient level

4、s of the basal diet日粮成分Ingredients12 Week35 Week营养水平12 Week35 Week玉米Corn31.539.0代谢能ME (MJ/kg )12.0011.60次粉Wheat middling22.022.0粗蛋白CP20.0016.5米糠Rice bran8.012.0钙Ca0.900.90大豆粕Soybean meal27.013.5有效磷AP0.400.4菜籽粕Rapeseed meal2.05.0蛋氨酸Met0.550.30棉籽粕Cottonseed meal02.95蛋氨酸+胱氨酸Met+Cys0.900.65鱼粉Fish meal1.

5、50赖氨酸Lys1.000.80磷酸氢钙CaHPO41.41.60食盐NaCl0.30.4石粉Limestone1.11.1食盐NaCl0.30.4植物油Vegetable oil00.5豆油Soybean oil3.00赖氨酸Lys00.05蛋氨酸Met0.20.07防霉剂Mildew preventive0.10.1预混料Premix1.00.9*注：肉鸭预混料为每千克全价料提供：维生素A，10000IU；维生素D3，1000IU；维生素E， 15IU；维生素K3，1.5mg；维生素B1，2mg；维生素B2，4mg；维生素B6，8mg；维生素B12，0.02mg；烟酸，30mg；泛酸钙，8

6、mg；叶酸，0.5mg；生物素，0.025mg；氯化胆碱，0.4g；铜，8mg；铁，45mg；锰，60mg；锌，35mg；碘0.35mg；硒，0.25mg。1. 3 饲养管理试验鸭于室内同一环境下散养。每个重复1栏，24 h光照，每天喂料2次，自由采食和饮水，以重复为单位每天记录饲料投放量和剩余量，每天清洗饮水器和料槽1次。免疫接种及疾病预防、消毒按常规方法进行。1. 4样品采集及测定试验的第1天、第21天和第42天分别对樱桃谷肉鸭进行空腹称重，计算均重、平均日增重和料重比，并于第21天每重复中随机选取2只中等大小的公鸭屠宰，分离免疫器官(脾脏、法氏囊和胸腺)并称重，计算胸腺指数、脾脏指数和法

7、氏囊指数，同时采集血液。免疫器官指数= 采集的血液迅速分离血清，用自动生化分析仪测定血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿素氮(BUN )、总胆固醇(CHO) 和甘油三酯(TG) 、血糖(GLU)以及谷丙转氨酶（GPT）、 谷草转氨酶（GOT）、碱性磷酸酶（AKP）的含量。1. 5 数据处理全部数据均采用SPSS 17. 0统计软件进行单因子方差分析( One- way ANOVA) ， 试验数据用平均数标准误表示。2 结果与分析2. 1 合生元对樱桃谷肉鸭生产性能的影响对樱桃谷肉鸭生产性能的影响结果见表3。由表3可见，在樱桃谷肉鸭前期添加合生元 后的平均日增重比空白组与抗

8、生素组均提高了5.75%（p0.05）和4.22%（p0.05）; 复合芽孢菌与合生元在前期的平均日增重差异不显著（p0.05）。在生长后阶段，合生元组的平均日增重较空白组提高了2.80%，与其他几组差异不显著。在料肉比方面，在生长前期，合生元较空白组有所下降，其他三组料肉比差异不显著，生长后期料肉比未表现出明显优势，但与空白组相比，有下降趋势。全程死亡率均低于5.0%，其中合生元组全程无死亡率。表3合生元对樱桃谷肉鸭阶段性生产性能的影响组别平均日增重（g）平均采食量（g）料肉比114d1535d114d1535d114d1535d对照组（Control ）37.365.52 68.413.5

9、4 54.434.25 163.846.35 1.4570.022.3950.07 抗生素组（Flavomycin）37.916.12 70.454.27 56.686.30 158.096.87 1.4950.022.2440.08 复合芽孢菌 （Synbiotic）38.533.21 70.816.35 56.836.12 163.005.32 1.4750.042.3020.18 合生元 （Synbiotic）38.235.63 69.462.50 56.625.84 165.595.94 1.4810.012.3840.06 合生元 （Synbiotic ）39.513.74 70.3

10、32.49 56.975.34 165.847.12 1.4420.052.3580.09 表4 合生元对樱桃谷肉鸭全程生长阶段生产性能的影响组别平均日增重（g）平均采食量料肉比全程死亡率（%）对照组（Control ）58.542.45 127.625.21 2.1800.04ab5.000.05抗生素组（Flavomycin）60.411.35 128.916.142.1340.02ab2.500.20复合芽孢菌 （Synbiotic）60.843.49 129.898.242.1350.03ab1.250.01合生元 （Synbiotic）63.512.67 136.048.652.14

11、20.02ab0.000. 00合生元 （Synbiotic ）63.832.99128.817.462.0180.02a0.000.002. 2 合生元对樱桃谷肉鸭免疫器官指数的影响合生元对樱桃谷肉鸭免疫器官指数的影响结果见表5。在胸腺指数方面，与空白对照组和抗生素组相比，三个实验组均有不同程度地提高，其中添加复合芽孢菌和合生元，在刺激胸腺发育方面表现出良好的性能。在法氏囊指数方面，实验结果表明合生元能有效刺激免疫器官的发育，增强了免疫力，这与养殖试验中的死亡率相符合。在脾脏指数方面，三组实验组与空白组相比，结果差异不显著。以上结果表明，合生元组均有不同程度的刺激免疫作用，刺激免疫的主要器官

12、在胸腺与法氏囊，其原因可能与鸭的日龄有关。表5合生元对免疫器官指数的影响（g /kg）组别对照组（Control ）抗生素组（ Flavomycin）复合芽孢菌 （Probiotic）合生元（Synbiotic ）合生元 （Synbiotic）胸腺指数2.400.312.380.542.700.692.480.28 3.020.50法氏囊指数1.040.251.170.11 0.910.141.240.271.210.41 脾脏指数0.880.170.710.060.840.160.830.190.890.21注：同行小写字母不同者表示差异显著( P 0.05），说明饲料中添加微生态制剂对机体

13、的蛋白代谢具有一定的改善作用，但各组由于添加量不一样，导致总蛋白含量差异显著，这可能与益生菌单位区域的活菌数量及有益菌本身生理特性有关。在总胆固醇和甘油三脂2个指标上，添加微生态制剂并未显著降低其水平。这个结果可能与不同的试验条件有关，在不同季节产生的试验结果变异较大，如何提高微生态制剂作用效果的稳定性应成为本领域今后研究的一个重点。正常动物的血糖一般保持相对恒定，血糖水平受胰岛素、肾上腺素、肾上腺皮质激素、胰高血糖素、甲状腺素和生长素的调节，在临床上，血糖浓度的测定常用于内分泌腺功能的检查。在本试验中，复合芽孢菌组、合生元组和合生元组的血糖含量与空白对照组相比有所上升（p0.05），导致血糖

14、含量增高的原因可能是由于其分泌的淀粉酶增强了鸭对淀粉的消化率所致，也可能是由于微生态制剂的某些活性因子通过某种方式刺激了肾上腺素、胰高血糖素等升糖激素分泌增加所致。正常情况下，细胞内酶（如谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶）由于细胞膜的屏障作用， 不易逸出， 仅由于细胞的不断更新破坏而少量释入血液。只有当细胞因各种因素（如急性应激）而受到损伤时,细胞膜的通透性升高使其释放入血液的速度增高，血清酶活性显著升高。因此，血液谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶等活性的升高通常是应激反应的一个标志。本试验结果表明， 合生元组肉鸭的血清GPT、GOT 和AKP 活性与对照组差异都不显著，由此说明日粮中添加

15、合生元并未引起机体的应急反应。3 结论由本试验结果可得到以下结论，合生元微生态制剂组合能显著提高樱桃谷肉鸭生长前期的日增重，显著提高血液中总蛋白和血糖的含量，刺激免疫器官胸腺与法氏囊的生长发育，提高免疫力，并能显著降低料肉比，从而提高饲料转化率，降低饲养成本。第二部分合生元对樱桃谷肉鸭胴体与肌肉品质的影响随着抗生素的大量使用及滥用，它的弊端日益显露出来，诸如破坏动物体正常微生物群，导致微生态平衡失调，促进耐药菌株增加等，抗生素等药物在畜产品(肉、蛋、奶)中的残留，威胁人类的身体健康：对人和动物致畸、致癌，甚至导致人畜中毒死亡1-2。合生元制剂经众多的实验证明能调整、维持肠道内正常微生物菌群平衡

16、，减少肠道内氨、胺等毒害物质的产生，改善环境卫生，增强动物免疫功能，促进动物消化吸收，从而达到防病治病、提高饲料转化率和动物生产性能3-6，是一种颇为理想的替代抗生素的新型绿色添加剂。由于滥用抗生素和激素等引起动物胴体品质、肌肉品质、口感和鲜味有所下降，以致于人们对微生态制剂这类新型的绿色饲料添加剂对饲养肉用动物的胴体和肌肉品质以及口感和鲜味是否下降产生疑虑，相关研究多见对鸡肉品质的报道。本研究拟研究替代50% 抗生素组的合生元是否会影响鸭肉的品质，对肉鸭的屠宰性能和鸭肉品质的影响进行对比试验，为该类制剂的应用提供理论数据。1 材料与方法1. 1 试验材料试验菌种见第一部分。1. 2 试验动物

17、及日粮选取1日龄樱桃谷肉鸭250羽(由湖北春江鸭厂提供)， 随机分成5组， 每组5个重复， 每重复10羽， 试验设计方案见表1。试验为期42 d， 其中1 21 d为试验前期， 22 35 d为试验后期。各期基础日粮配方同上。1. 3 饲养管理试验鸭于室内同一环境下散养。每个重复1栏， 24 h光照，每天喂料2次，自由采食和饮水，以重复为单位每天记录饲料投放量和剩余量，每天清洗饮水器和料槽1次。免疫接种及疾病预防、消毒按常规方法进行。1. 4 样品采集及测定1.4.1 胴体品质的测定每组随机取10 只，每重复2只，雌雄各半进行屠宰，测定活重、屠体重、屠宰率、全净膛重、半净膛率、胸肌重、胸肌率、

18、腿肌重、腿肌率、腹脂重、腹脂率。屠体重为放血去羽毛后的重量，用湿拔羽法要沥干后的重量。全净膛重为屠体去内脏（保留肾脏、肺及头爪）后的重量。半净膛重为屠体重去气管、食道、嗉囊、肠、脾、胰、胆和生殖器官。保留心、肝、肾、腺胃、肌胃（去角质膜和内容物）、腹部板油、肌胃周围的脂肪和肺、肾的重量。胸肌重为左右两侧胸肌的重量。腿肌重为左右的大、小腿肌肉的重量。腹脂重为腹部和肌胃周围的脂肪的重量。屠宰率（%）=屠体重/宰前活重100%；全净膛率=全净膛重/宰前活重100%；胸肌率=胸肌重/全净膛重100%；半净膛率=半净膛重/宰前活重100%；腿肌率=腿肌重/全净膛重100%；腹脂率=腹脂重/全净膛重100

19、%；1.4.2 肌肉营养成分的测定每组取6只鸭左侧胸肌100g按处理组混匀，测定水分、粗蛋白质、脂肪、粗灰分和氨基酸。水分的测定用烘干失重法；粗蛋白质测定用微量凯氏定氮法；脂肪测定用索氏提取法；粗灰分测定用马福炉灰化法；氨基酸的测定采用盐酸水解法水解，WATER公司HPLC测定，测得常见氨基酸17种，其中色氨酸(钠)被分解，未作分析。1.5 数据处理与分析数据利用Excel进行数据整理，采用SAS 17.0软件中的平衡试验设计方差分析过程(Anova)进行数据统计分析，均值的多重比较采用Duncans法。氨基酸含量用100g肌肉（干样）中的所含克数表示，结果用平均值标准差表示。2 结果与分析2

20、.1 合生元对肉鸭胴体品质的影响表3 胴体性状测定结果比较(n=10)指标对照组（Control ）抗生素组（ Flavomycin）复合芽孢菌 （Probiotic）合生元 （Synbiotic ）合生元 （Synbiotic ）活重（kg）2.050.072.070.092.090.092.110.082.180.21屠体重（kg）1.880.071.870.09 1.900.081.920.091.980.20屠宰率（%）91.461.4690.560.7291.030.7490.681.4190.910.53半净膛重 （kg）1.740.071.730.07 1.740.07 1.80

21、0.101.800.21半净膛率（%）84.781.4683.780.9383.211.0585.252.0882.552.04全净膛重（kg）1.600.071.600.051.600.061.660.111.650.22全净膛率（%）78.121.6177.491.7676.641.4378.392.6075.473.44胸肌重（g）132.329.46121.2720.27 121.1132.25117.3728.64130.0547.43胸肌率（%）12.800.2712.910.2913.050.2412.770.4313.270.61腿肌重（g）186.538.5274.008.5

22、173.9916.82184.1914.09171.4010.34腿肌率（%）11.630.2310.880.7210.860.9311.130.6910.511.39腹脂重（g）10.673.2812.363.0012.553.7617.224.6112.8210.19腹脂率（%）0.660.180.770.180.780.211.030.240.850.11如表3所示，对照组、抗生素组、复合芽孢菌、合生元、合生元各组间宰前活重、屠宰率、半净膛率、全净膛率、平均腿肌率和腹脂率差异不显著(P0.05)，合生元组胸肌率高于对照组。据研究报道，胴体性状属于高遗传力性状，受营养水平影响较小，基因型与

23、营养水平对胴体及肉质性状均无显著互作效应。本研究对照组和试验组胴体性状差异不显著，表明在相同营养水平条件下，日粮中添加合生元添加剂，可以促进饲料利用效率，但对胴体性状无显著影响。同对照组相比，试验组有增加胸肌率的趋势，可能是由于日粮中微生态的添加对肝脏合成蛋白质能力具有一定的促进作用。2.2 合生元对肉鸭肌肉品质的影响表4 鸭肉品质测定结果比较（%）(n=10)指标对照组（Control ）抗生素组（ Flavomycin）复合芽孢菌 （Probiotic ）合生元 （Synbiotic ）合生元 （Synbiotic ）水分 76.231.1076.571.2575.804.5176.090

24、.6975.811.64粗蛋白20.321.0620.251.3720.360.6421.341.06 21.670.85 灰分1.390.531.320.111.631.111.000.511.240.19脂肪1.230.181.140.040.970.301.130.050.910.09如表4所示，添加合生元试验组鸭肉中水分、粗蛋白和灰分与抗生素组和空白组差异不显著（p0.05）。 2.3 合生元对鸭肉氨基酸组成的影响表5 氨基酸含量的测定结果比较（%）(n=6)指标对照组（Control ）抗生素组（ Flavomycin）复合芽孢菌 （Probiotic ）合生元 （Probiotic

25、）合生元 （Synbiotic ）必需氨基酸异亮氨酸(Ile)2.280.152.180.142.250.252.170.172.070.11亮氨酸(Leu)5.430.465.370.625.430.545.390.264.410.99赖氨酸(Lys)4.920.444.800.315.830.805.740.575.390.43蛋氨酸(Met)1.640.141.740.191.710.211.760.081.610.10苯丙氨酸(Phe)3.420.263.210.453.340.433.340.203.020.34苏氨酸(Thr)2.760.412.610.412.680.342.65

26、0.082.770.13缬氨酸(Val)2.490.092.470.252.530.312.470.122.360.19半胱氨酸(Cys)0.240.040.270.110.290.070.300.040.250.07酪氨酸(Tyr)2.150.082.300.542.280.272.210.252.080.09组氨酸(His)4.513.803.050.723.920.732.950.512.760.32非必需氨基酸(NEAA)精氨酸(Arg)3.320.473.520.304.370.474.200.344.080.44丙氨酸(Ala)4.160.284.130.384.230.444.3

27、90.453.870.34谷氨酸(Glu)11.691.3111.331.4911.421.0911.510.9510.690.47甘氨酸(Gly)3.310.393.400.453.520.453.580.622.341.43脯氨酸(Pro)3.670.952.840.752.990.852.970.972.870.37丝氨酸(Ser)2.940.292.970.263.050.372.880.342.670.22天冬氨酸(Asp)5.990.415.790.156.520.616.390.835.930.20总必需氨基酸平均值(TEAA)29.8428.0230.2828.9927.72总

28、氨基酸平均值(TAA)64.9261.9966.4064.9158.17E/T(%)45.96 45.19 45.61 44.66 45.93 如表5所示，与对照组相比，黄霉素组鸭肉各种氨基酸含量均降低（p0.05），复合芽孢菌、合生元对鸭肉的单个氨基酸含量的影响不显著（p0.05）；表述不是很合逻辑，提出不显著的？，其他组难道显著而总必需氨基酸平均值却发生较大变化，复合芽孢菌空白组合生元黄霉素组合生元怎么搞了个倒数第一？。表6 鲜味氨基酸含量的测定结果比较（%）(n=6)指标对照组（Control ）抗生素组（ Flavomycin）复合芽孢菌 （Probiotic ）合生元 （Probio

29、tic）合生元 （Synbiotic ）赖氨酸(Lys)4.920.444.800.315.830.805.740.575.390.43丙氨酸(Ala)4.160.284.130.384.230.444.390.453.870.34谷氨酸(Glu)11.691.3111.331.4911.521.0911.510.9510.690.47脯氨酸(Pro)3.670.952.840.752.990.852.970.971.870.37丝氨酸(Ser)2.940.292.870.263.050.372.880.342.670.22天冬氨酸(Asp)5.990.415.790.156.520.616.

30、390.835.930.20鲜味氨基酸平均值(taste amino acids）33.3731.7634.1533.8830.42总氨基酸平均值(Total amino acids)64.9261.9966.4064.9158.17t/T(%)51.40 51.23 51.43 52.20 52.29 鲜味氨基酸的总含量（谷氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸）的比较结果如图1所示，总鲜味氨基酸的含量为合生元 合生元复合芽孢菌空白组 黄霉素组，添加合生元 试验组鸭肉中总鲜味氨基酸含量较空白组和黄霉素组分别提高了1.74%和2.07%，表明合生元、合生元 会使鸭肉中鲜味氨基酸含量提高

31、，从而提高鸭肉的鲜味。3 结论在肉鸭日粮中使用替代50% 黄霉素的合生元制剂作为饲料添加剂对肉鸭胴体品质和肌肉的一般营养成份无不良影响，可提高肌肉氨基酸总量、必需氨基酸。在鲜味氨基酸含量方面，替代50% 黄霉素的合生元、合生元能增加肌肉的鲜味。 第三部分合生元对肉仔鸭肠道结构的影响近年来，随着微生态研究的飞速发展，家禽的肠道健康已引起越来越多学者的高度重视。家禽肠道的结构状况与自身的快速生长及抗病防病有重要的关系1。因此，维持健康状态或修复病理状态下肠道结构和功能的完整性，保持肠道健康已成为家禽健康生产的关键所在2。众多的实验证明，合生元制剂能调整、维持肠道内正常微生物菌群平衡，减少肠道内氨、

32、胺等毒害物质的产生，改善环境卫生，增强动物免疫功能，促进动物消化吸收，从而达到防病治病、提高饲料转化率和动物生产性能5-6。小肠绒毛是营养物质吸收的主要组织，绒毛的长度与其肠上皮细胞数量呈显著相关，绒毛短时，成熟的绒毛细胞减少，对养分的吸收能力降低。隐窝深度反映细胞生成率，隐窝变浅表明肠上皮细胞成熟率上升，吸收功能增强。绒毛高度隐窝深度(VC)则综合反映小肠功能状态，比值上升，则黏膜改善，消化吸收功能增强。本试验旨在研究合生元替代商业日粮中添加的50%抗生素与对肉鸭肠道结构的改善作用，为新型合生元制剂替代50%抗生素的制剂应于肉鸭生产提供基础数据。1 材料与方法1. 1试验材料枯草芽孢杆菌、地

33、衣芽孢杆菌，混合芽孢菌组以枯草芽孢杆菌为主要菌种并包含少量地衣芽孢杆菌和乳酸杆菌等，产品活菌总数大于1. 0 1010 CFU /g，以上菌种均由武汉科诺生物科技有限公司提供。1. 2 试验动物及日粮饲养管理、试验动物、基础日粮的组成及营养水平同上。1. 3样品采集及测定选用36日龄各试验组和空白组鸭各6只，屠宰后分离肠段，用温热生理盐水小心冲洗至无肠内容物后，取十二指肠、空肠、回肠中段约2 cm肠段用生理盐水冲洗干净，置于10福尔马林溶液中固定；将固定好的肠段制作组织切片；选取3张绒毛完整，走向平直的组织切片，对比观察肠黏膜和肠绒毛组织形态的变化，使用Nikon荧光生物显微镜并应用爱普图像处理分析软件4.0测定每个视野中10条最长绒毛长度及肠壁厚度。