阿昔洛堳民杂氮硅三环结合物的设计、合成及免疫活性、抗乙肝病毒活性的探讨

1、 论文题目:匦萱盗圭皇鍪氢硅三丕结金物数遮让金虞拯鱼瘗活性揎圣压痘壹活性的拯过答辩委员会主席: 林 中 温州市第二人民医院答辩委员会委员:仇佩红温州医学院己黄可新温州医学院周健民温州医学院董建勇温州医学院论文答辩日期:年月日目 录缩略词表?.中文摘要?前言?.第一部分核苷类似物的杂氮硅三环衍生物的合成.主要仪器和试剂?.?合成路线?. .阿昔洛韦衍生物合成路线.阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物的合成路线?.实验操作?.氨丙基杂氮硅三环的合成?.阿昔洛韦衍生物合成通法以为例.阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物的合成通法以为例?.结果.分析和讨论.标化合物的性状及其溶解性?.反应条件的摸索?.阿昔洛韦衍生物合成

2、反应?.阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物的合成反应?.化合物谱图分析见附图?.第二部分阿昔洛韦与杂氖硅三环结合物的生物活性研究.第一节 阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物的毒性实验.急性毒性试验.实验材料.实验方法.实验动物?.动物分组及给药方法.实验结果.亚急性毒性试验?.实验材料?.主要仪器?.?.主要药物和试剂?.药品的配置.实验方法?.,.实验动物.动物分组及给药方法.样本收集?.统计分析.实验结果?.小鼠体重变化?.:?。.小鼠各器官重量变化.小鼠血常规及相关生化指标.和对小鼠血常规主要指标的影响.和对小鼠生化指标的影响.分析与讨论?.和对小鼠血液常规指标的影响.和对小鼠生化指标的影响?.小结.第

3、二节阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物的抗乙肝病毒实验.体外抗病毒活性?.实验材料.实验方法.细胞株的培养、冻存、复苏.药物的细胞毒性实验法?。?.法定量检测.统计分析:.实验结果. .细胞毒性实验结果 .药物对和的影响.分析与讨论?.:体内抗病毒实验.实验材料?.动物.药物.实验方法?.统计分析.实验结果?.血清中皿水平?. 表面,和 分子的表达?.,.的水平.淋巴细胞亚群的组成?.分析与讨论参考文献.附图附录致谢综述独创性声明?温州医学院硕士学位论文一,孓温州医学院硕士学位论文阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物的设计、合成及免疫活性、抗乙肝病毒活性的探讨中文摘要目的 设计合成阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物,并

4、且对其免疫活性、抗乙肝病毒活性进行探讨。方法合成中间体化合物丫.氨丙基杂氮硅三环和,.三甲基吖.氨丙基杂氮硅三环以及阿昔洛韦中间体化合物.。杂氮硅三环具有免疫调节作用,依据药物拼合原理设计合成了氨丙基杂氮硅三环与抗病毒药物非天然核苷化合物阿昔洛韦的结合物.期望杂氮硅三环与非天然核苷类药物夕协同发挥抗乙肝病毒作用。,毒性实验:采用小鼠为实验对象,对合成的新化合物进行毒性实验,验证这类化合物的安全性。体外抗病毒活性研究:选择.细胞株转染了 的细胞,检测受试物的体外抗作用。筛选出活性较好的化合物。选取体外抗病毒活性效果好的化合物进行体内抗病毒活性转基因小鼠作为实验对象,用研究。采用.法测定血清和肝组

5、织中和水:法测定血清中.和.含量,以及一些免疫指标。结果.共合成个未见报道的新化合物.,.。目标化合物的结构经过、.、确认。.毒性实验:实验小鼠的体重,内脏组织的重量无明显差异,谷草转氨酶、谷丙转氨酶,血常规等生化指标亦无明显差异,该结果在一定程度上反映,新化合物在小鼠体内毒性较小,安全性良好。温州医学院硕士学位论文体外抗病毒实验:结果显示新化合物对细胞毒性较低,检测.细胞培养上清液中的和。结果显示药物.,与阳性对照药:匕较对于,抑制率较低,而,?对于,的抑制率与相近。呈现一定的体外抗病毒活性体内抗病毒实验及免疫实验:结果显示药物具有体内抗病毒活性,而且能增力表面分子的表达率、诱导异源性淋巴细

6、胞增加.和.的分泌,具有较强的刺激淋巴细胞增殖的能力。说明药物能够刺激免疫系统来达到一定的效果。结论制备了?系列的阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物。目标化合物在小鼠体内毒性较小,安全性良好。大部分药物体外抗乙肝病毒活性良好。药物邑刺激免疫系统而起到一定的效果。关键词: ,.氨丙基杂氮硅三环:阿昔洛韦;拉米夫定: 抗乙肝病毒活性;毒转基天鼠性实验:.细胞;?温州医学院硕士学位论文,?一口 .,. ,.?., .:. . . .: ?,. ?,;. 一 ; .温州医学院硕士学位论文?.一 ,. :. .? ,?., ,.: ?. .,., :, . 、一., , . .:; ;. ; 温州医学院硕士学位

7、论文前 言.病毒感染中的免疫调节分子机制,持慢性乙型肝炎简称慢性乙肝是由乙肝病毒续感染引起的。目前,细胞免疫应答被认为是机体清除的基本机制,急性自限性感染者体内存在高效、多克隆、特异性和淋巴细胞反应,可以彻底清除体内的病毒,并可抵抗病毒的再次入侵。近年来的研究表明细胞和树突状细胞也扮演了非常重要的角色。等研究表明慢性乙肝患者体内反应不足和的持续感染密切相关。研究表明,多种冈素会影响机体外周血/的分化,其中作为目前发现的功能,被认为是影响/分最强的抗原呈递细胞 化的最重要因素。研究发现,慢性乙肝患者存在功能缺陷,可能进而导致患者体内反应不足【弓。病毒刚刚侵入时,非特异免疫反应起重要作用。在此类非

8、特异免疫反应中,非依赖或者病毒抗原特异的免疫保护细胞主要有细胞、细胞,它们通过分泌一些细胞因子起作用。细胞具有非常有限的受体种类,主要包括/一个受体的两个链。它主要通过识别抗原上的糖脂来发挥作用,其增生主要靠,受到外界刺激或者病毒侵扰时往往通过分泌和发挥免疫作用,后期针对感染发生的特异免疫反应,激活未致敏的细胞。在细胞中,作为一种专业的抗原捕捉与递呈细胞,在引导初始免疫反应时起重要的作用。非成熟在捕捉到病毒抗原后向淋巴结转移,进而分化为成熟的,发挥抗原递呈功能,激活特异细胞免疫反应。细胞的激活启动也需要辅助细胞的协助【,。在急性感染人体中的潜伏期阶段可检测到针对特异的细胞的存在。另外,在人体和

9、黑猩猩的肝细胞中针对特异的却与临床症状的起伏和转氨酶的升降成正相关。被感染的肝细胞可以释放一些细胞因子,比如等,可“募集”先天免疫细胞向肝组织集中并被活化,清除被感染的细胞,并抑制病毒复制。这种先天性免疫反应在早期的感染清除中发挥重要的作用 。另外,即便急性感染恢复后的几年后,也会发现一些对特异的细胞以及细胞存在,.当再遇到的侵扰时,即使非常微量,它们也会立刻发生作用,此现象通常被称为记忆性的免疫反应。因此,疾病的消除未必预示着感染病毒的完全清除,而很可能是通过记忆性细胞和细胞的有效控制使病毒保持在一个较低的滴度水平。温州医学院硕士学位论文图.乙型肝炎病毒感染后机体的免疫应答示意图综上所述,如

10、图所示,进入人体后感染肝脏细胞,在肝脏细胞中进行复制,表达乙型肝炎表面抗原。当受感染的肝细胞被抗原提呈细胞所和吞噬后,乙型肝炎表面抗原蛋白通过抗原提呈细胞上的分别激活细胞和细胞。激活的细胞分化为激活的.细胞亚群,通过介导细胞免疫进一步促进细胞分泌.【和.丫,产生细胞杀伤效应已达到清除病毒的作用。由此可见,在机体对乙型肝炎病毒感染的免疫应答过程中,抗原提早细胞、.细胞和细胞均具有重要的作用,而细胞激活也成为机体自身抵抗病毒感染最主要的反应之一,已有多篇文献报道病毒感染过程中,检测到细胞多种信号标记分子的过表达或激活。、对于治疗的研究现状目前用于治疗的化学药物主要是核苷类药物,有阿昔洛韦、拉米大定

11、等,其中阿昔洛韦属于广谱的抗病毒药物,临床主要用于疱疹病毒,近年来对于药物的研究深入,也拓展了它的应用范围, 采用阿昔洛韦治疗慢性乙型肝炎具有一定疗效【.】。其作用通过该药的磷酸化产物三磷酸温州医学院硕士学位论文无环鸟苷作用病毒复制的底物而竞争病毒聚合酶,最终抑制病毒合成。该药对宿主细胞毒性很低,不易造成宿主肝细胞的损伤。阿昔洛韦在治疗中无明显不良反应。阿昔洛韦治可明显抑的复制,疗效稳定且可重复,疗慢性乙肝的疗效可以重复,且不逊于进口干扰素等药品【,。但是阿昔洛韦对于乙肝病毒的疗效和临床上广泛应用的拉米夫定还是存在一定的差距,主要存在的问题是用药后的耐受和不能彻底清除病毒。尤其是慢性乙型肝炎治

12、疗的难题足治疗停止后的反跳,其主要原因:感染持续存在的基础是其复制的模版。无论是干扰素还是核苷类似物,对肝细胞内的都没有直接作用。 的消失主要靠机体病毒特异性淋巴细胞清除病毒感染的肝细胞,以及长期病毒复制抑制所导致的 库的耗竭,或非细胞溶解效应,即细胞冈子的作用。因此,恢复机体的特异性免疫是治疗慢性乙型肝炎的基本策略引。、杂氮硅三环化合物及免疫活性研究现状杂氮硅三环化合物,即.取代.,.三氧杂.氮杂.硅三环【.】十一烷简称杂氮硅三环, ,人们对它们感兴趣是来自四个方面: 其一:特殊的分子结构【】见图,根据相关文献的物理数据和分析结果表明:杂氮硅三环是一种配位数为的硅化台物。硅原子以杂化轨道成键

13、,分子呈三角双锥构型,三个氧原子和硅处于同一平面,彼此之间夹角为,氮原子和基团分别位于平面上下键的两个项端位置,硅原子的 空轨道接受氮上的孤对电子形成跨环配位键,以键为轴组成三个五元杂环的笼状对称结构。其二:具有较高的生物活性。具有一定的免疫调节作用,抗炎、肿瘤。抑制作用【,图:杂氮硅三环结构其三:其毒性较小。文献报道【将杂氮硅三环连接于正常核苷上以期作为磷酸转移酶底物竞争性抑制剂而产生抗病毒作用,但更重要的是毒性也非常低,这说明杂氮硅环化合物具有相当的安全性。其四:杂氮硅温州医学院硕士学位论文三环化合物为小分子,易于进入细胞内部:相对于胸腺肽、乙肝疫苗等大分子免疫调节剂而言,具有的特殊结构和

14、易于接近细胞膜的双电层,易于作用于细胞组织,的空间结构与三磷酸酯存在较大的相似性引。掣之】人研究证明了.氯甲基杂氮硅三环商品名:对患有类风湿性关节炎病人来源的单核细胞具有促有丝分裂作用。该药物通过选择性地作用于淋巴细胞,增加细胞生长淋巴因子的产生,增强抑制性细胞的活性和抑制前列腺素的活性,从而发挥促进单核细胞增殖的作用。、设计思想冈此本课题设计思路:抗病毒的核苷部分我们主要选取已报道效果良好的抗病毒核苷类药物阿昔洛韦及其类似物,免疫调节部分我们主要选用杂氮硅三环化合物,通过药物拼合原理设计合成一系列核苷类似物的杂氮硅三环衍生物。利用杂氮硅三环衍生物激活树突状细胞的抗原提旱能力,从而增强或细胞对

15、抗原识别能力,以及促进特异性和淋巴细胞反应,与抗病毒的核苷类药物协同作用,增强的抗乙肝病毒作用,达到彻底清除体内的病毒目的,拓展在抗病毒方面的应用。我们对含核苷类似物的杂氮硅.环衍生物进行科技查新,查新结果是:国内外对非天然核苷与杂氮硅环以化学键相连接的化合物无研究报道。因而,该项工作具有新颖性、原创性和先进性,有继续深入研究的价值和理论意义。温州医学院硕士学位论文第一部分 阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物的设计与合成.主要仪器和试剂试剂名称 试剂公司三乙醇胺天津市鑫达化工贸易有限公司三异丙醇胺 天津市鑫达化工贸易有限公司.氨丙基三乙氧基硅烷 杭州硅宝化工有限公司阿昔洛韦 浙江诚意药业琥珀酸酐 国药

16、集团化学试剂有限公司戊二酸酐 国药集团化学试剂有限公司,.二甲基二甲氧基甲胺 上海百灵威化学技术有限公司上海百灵威化学技术有限公司.乙酰氯 上海百灵威化学技术有限公司丙酰氯上海百灵威化学技术有限公司上海试剂总厂化学纯上海试剂总厂三乙胺化学纯 . 上海试剂总厂吡啶化学纯上海试剂总厂石油醚化学纯上海试剂总厂乙醚化学纯上海试剂总厂丙酮化学纯上海试剂总厂甲苯化学纯上海试剂总厂氯仿化学纯上海试剂总厂远红外快速恒温干燥箱规格:.上海跃进医疗器械厂电子分析天?规格:北京赛多斯仪器公司旋转蒸发仪.瑞士公司真空泵., 瑞士公司.型显微熔点测定仪梅特勒托利多仪器公司智能付里叶红外光谱 德国布鲁克光谱仪公司质谱仪德

17、国公司.核磁共振仪内标 瑞士公司温州医学院硕士学位论文.合成路线.阿昔洛韦衍生物合成路线嗡上?。人 。:图.化合物.的合成路线一. 一温州医学院硕士学位论文.阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物的合成路线, 、宁 /.?卜。幽/内,:图.化合物.的合成路线一.一.实验操作.丫.氨丙基杂氮硅三环的合成,见参照文献阁温州医学院硕士学位论文.阿昔洛韦衍生物合成通法以为例称取阿昔洛韦. 于 三颈. 丁二酸酐.瓶中,加入吡啶于油浴锅内恒温磁力搅拌反应,待反应结束后,将反,重应液放置冰箱内静置 ,抽滤,用丙酮洗涤次,置于干燥器中干燥.结晶,即得白色晶体称重为.产率.%,熔点为。将干燥后的 溶于和氯仿混合溶液中,冰浴

18、./的碳酸中缓慢滴加. 丙酰氯,室温搅拌反应 ,反应液用.氢钠溶液洗涤次,水洗涤,有机层用无水硫酸钠干燥过夜。过滤,浓缩滤液后倾入乙醚中,有白色固体析出,过滤,甲醇重结晶,得白色晶体,称重得.,其熔点,收率见表.。.阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物的合成通法以为例和. ?溶于 :,室温将.搅拌,再用恒压滴液漏斗缓慢地滴加. 丫一氨丙基杂氮硅三环的溶液 ,室温搅拌 ,旋蒸近干,残留物经硅胶柱氯仿:甲醇,体积比为:洗脱纯化,得白色晶体,称重得.,其熔点,收率见表.。.结果表.化合物.;.的物理数据.:?呷芝、竺峪.一.价。至勺巴匣苫.芝本士勺矗中季量;毳薹. 季萤菱 蓁蚕雾霎奏茎薹薹羹萋匣一,匣,.工一

19、寒簌互叫冥,篮至星口,矗苫一妇苦。僻一时占口议秘乏将。卺鲣媸.建.日 言童邑配霎霎 霎霎 萋蚕 薹霎萋霎.土一芝 军上 寸 ” ”墨至一至 至。 芝萼钗魁乏.盆 霎萋奏萋萋. 霎雾圣重萋 霎耋薹蓁萋 霎霎萋雾蠼批.翌辜赡; 军 ; ;.凸 .凸 .旦凸: .凸巴苔 巴苔 巴胃 巴苔。惜嘲伥糨匝.芒联柩蛹.器暑 窝葛 瓮: 器%“ 心“一 一券 譬 葛 累叼 ”寸 弋一一 一岛一,一蝴温州医学院硕士学位论文.分析和讨论.目标化合物的性状及其溶解性目标化合物.都为白色固体,目标化合物.都为淡黄色固体。化合物.溶于、热的甲醇、乙醇,不溶于二氯甲烷、水、丙酮、石油醚、乙醚;化合物溶于、热的甲醇、乙醇,

20、微溶于氯仿、二氯甲烷,不溶于水、乙醚、丙酮。.反应条件的摸索.阿昔洛韦衍生物合成反应溶剂用量对产率的影响,在化合物.合成反应中,产物有一羧基一,在吡啶碱性溶剂中有一定的溶解度,在反应温度一定的条件下,反应,改变溶剂的用量进行实验,结果显示溶剂用量 时为宜。表.溶剂用量对产率的影响.反应时间的影响,在溶剂用量为时,反应温度为,改变反应时间进行实验,结果显示反应时间为时最高,而后随时间的增长又逐渐降,原因是酯化反应是一个可逆反应,部分酯发生了水解,适宜的反应时间应控。制在表反应时间对产率的影响. 化合物的合成属于酰化反应,反应产率高,严格控制反应体系的水分,溶剂需要无水处理。温州医学院硕士学位论文

21、.阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物的合成反应由于杂氮硅三环的特殊结构,在酸性条件,以及有水的条件下容易分解,凶此在合成的过程中溶剂应当经过无水处理;在柱层析分离的过程中,在层析液中滴加适量的三乙胺,保持溶液的碱性环境。.化合物谱图分析见附图在谱图中,在左右出现了.键强而尖的单峰;在。之间出现羰基强而尖的单峰:在 之间有嘌呤环的、吸收峰;在 之间出现配位键的吸收峰,且比通常的卜键吸收频率低,这些表现都与预测结果相符。产物的.谱图显示与目标化合物吻合,由于嘌呤环上的氨基上的活泼氢容易受到氘代影响在图谱中未显示,其余各质子均出现相应的吸收峰。以为例,在.出现质子特征吸收峰,比相应的三乙氧基硅烷中质子的.向

22、高场移动,说明硅氮杂环中配位键的形成,氮原子上孤对电子向硅原子上转移,导致硅原子的电荷密度比未成环时增加,屏蔽效应增大。在. 出现的杂氮硅三环,甲基特征锋位。在.左右出现了相应的嘌呤环质子共振峰。而嘌呤环质子共振峰未显示,在阿昔洛韦衍生物侧链上的质子出现明显的裂锋,这是由于杂氮硅三环上的质子相互磁不等价,使得质子峰分裂更加明显。温州医学院硕士学位论文第二部分 阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物的生物活性研究第一节阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物的毒性实验急性毒性试验是指一次或小时内多次染毒的试验,是毒性研究的第一步。要求采用啮齿类或非啮齿类两种动物。通常为小鼠或大鼠采用经口、吸入或经皮染毒途径。急性毒性试验

23、主要测定半数致死量浓度,观察急性中毒表现,经皮肤吸收能力以及对皮肤、粘膜和眼有无局部刺激作用等,以提供受试物质的急性毒性资料,确定毒作用方式、中毒反应,并为亚急性毒性试验的观察指标及剂量分组提供参考。亚急性毒性指接触毒物时间不长数天乃至数月对机体引起功能和或结构的损害。 常以毒性反应、毒性剂量、受损靶器官、血常规指标、无作用水平及病理组织学变化等描述亚急性毒性。急性毒性实验与亚急性毒性实验是评价药物安全性的重要指标,本实验随机选择了新合成药物中的代表药物和做了急性毒性实验和亚急性毒性实验,以测试合成的化合物对小鼠机体的毒性情况,以及摸索之后对于转基因老鼠的实验条件。.急性毒性试验.实验材料药物

24、和试剂名称 药物和试剂来源受测化合物 ,实验室合成上海试剂总厂.实验方法.实验动物清洁级小鼠只,雌雄各半,体重?,由温卅.学院实验动物中心提供,动物许可证号:浙.。实验期间所有小鼠于温州医学院实验动物中心层流实验室饲养,自由采食和饮水,动物房温度,相对湿度%,昼夜照明/ 。温州医学院硕士学位论文.动物分组及给药方法取小鼠只,随机分为组,给药,组和对照组,每组只,雌雄各半,实验前禁食不禁水小时后,参考原料药阿昔洛韦/,以/的药物剂量腹腔注射药物,给药后每日观察动物行为活动等以及日内动物存活情况。.实验结果见表.。给药后观察天,给药,组与对照组均未见小鼠有异常行为,毛色光亮,体重无明显变化,三组比

25、较没有差异,亦无动物死亡。处死并解剖动物后,肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等均未发现异常。表明药物/。表.急性毒性实验结果.亚急性毒性试验通过以上的急性毒性实验摸索的安全范围下,选取了/,/的给药剂量,进行亚急性毒性实验研究,继续摸索药物在机体中的毒性情况。.实验材料.主要仪器仪器名称仪器公司电子分析天平 梅特勒一托利多上海仪器公司高速离心机 上海安亭科学仪器厂血液分析 迪安生化有限公司.主要药物和试剂温州医学院硕士学位论文药物和试剂来源药物和试剂名称,实验室合成受测化合物江苏万邦生化药业公司肝素钠江苏万邦生化药业公司福尔马林.药品的配置样品的配置:将药品溶于%的生理盐水溶液中分别配置成 /,/的

26、溶液。跟 蒸馏%福尔马林溶液的配置:准确量取%甲醛溶液水充分混合,备用。.实验方法.实验动物清洁级小鼠只,雌雄各半,体重?,由温州医学院实验动物中心提供,动物许可证号:浙.。实验期间所有小鼠于温州医学院实验动物中心层流实验室饲养,自由采食和饮水,动物房温度,相对湿度%,昼夜照明/。.动物分组及给药方法将只小鼠按体重随机分为组:空白对照组组,溶剂对照组%,低剂量组/,高剂量组 /,组低剂量组/,高剂量组 /。空白对照组以等量生理盐水腹腔注射。实验期间组小鼠每日定时腹腔注射一次,自由饮水、进食,持续。.样本收集给药期间观察体重变化,每天记录体重的变化。于给药第 末,动物禁食 ,用%水合氯醛./麻醉

27、后称体重。,小鼠眼球取血,其中约. 的血,置于. 的离心管中,室温静置,取血清,?保存待测;约. 的血放入装有的离心温州陕学院硕士学位论文采血管中,混匀使其不凝固,.保存待测。取组织,分别称湿重,称重完毕后,置%的福尔马林中保存。.统计分析全部数据经.统计软件进行分析,.为差异有显著性,.为差异有高度显著性。.软件完成;数据作图一律采用表示;计量资料实验数据均以均数标准差方差齐性检验采用检验;两两比较方多组样本均数比较采用单因素方差分析.检验,方差不齐者采用差齐者采用检验。.实验结果.小鼠体重变化本次实验中,我们选取了新合成药物中的代表药物和进行动物的毒性测试。我们对实验用的小鼠每天都进行体重

28、的监测,既有利于每天按体重进行腹腔注射,又可以实时监测药物对小鼠体霞可能造成的变化。我们对小鼠腹腔注射天,选取了小鼠第、天的体重进行比较详见表.,组间与组内未见显著性差异,这说明新药物和对小鼠的体重无影响。表.各组间小鼠体蓖变化情况 .温州医学院硕士学位论文.小鼠各器官重量变化在动物实验的第天末,小鼠禁食小时,水合氯醛麻醉后进行解剖,取脏器称湿重,结果见图.。实验结果表明,小鼠的各个脏器湿重都没有显著性的差异,而且在解剖时也未见有出血点,质地或者颜色异常等现象,这说明新药物和对小鼠的脏器湿重无影响。.高一?.富;.图.各组间小鼠器官重量变化情况.小鼠血常规及相关生化指标.和对小鼠血常规主要指标

29、的影响新药和对小鼠的血液常规指标的影响,结果见表.和图.。研究结果表明:和对小鼠的血常规中的白细胞总数、红细胞总数、红细胞压积和血红蛋白作用不显著.,说明和在/和/的浓度下,对小鼠的血常规无影响。温州医学院硕士学位论文表血常规指标变化情况.组别 实验动物数量/./.帕 / 图白细胞总数变化情况.温州医学院硕士学位论文. .眨舵,帆 出船图.红细胞总数变化情况 .柏,屹腔啪鹪拥,图血红蛋白变化情况.温州医学院硕士学位论文.图红细胞压积变化情况. . 和对小鼠生化指标的影响新药和对小鼠的生化常规指标的影响,结果见表.和图。研究结果表明:和对小鼠的谷草转氨酶和谷丙转氨酶的变化作用不显著.,说明和在/

30、和 /的浓度下,对小鼠的谷草转氨酶和谷丙转氨酶的变化无影响。表血清中谷草转氨酶和谷内转氨酶的变化. , 一.?.?。?。?一/实验动物数量组别 /.士. . . . ./. .士 ./. . ./堡:圭:堡:圭:鱼里丛曼 ?.?:?:?。?。?。?一。一温州医学院硕士学位论文狮拗狮伽伽佃伽伽. / /图血清中谷草转氨酶和谷丙转氨酶的变化 . ,.分析与讨论.和对小鼠血液常规指标的影响实验动物的血常规值对生理学,病理学和毒理学研究室必须的基础数据。广义的血常规包括红细胞、白细胞、红细胞压积、血红蛋白等相关数值。这几个相关数值,在不同的药物作用下,会出现不同的质与量的改变,血细胞质与量的变化可以作

31、为药物影响的一个重要依据【。红细胞生于骨髓,是血液的重要组成部分,红细胞不仅具有呼吸功能,而日.像白细胞一样具有免疫功能。现发现红细胞具有识别、粘附、浓缩、杀伤抗原,清除体内免疫复合物的能力、增强吞噬细胞的吞噬功能、呈递抗原物质和免疫调节作用、并有完整的自我调控系统。因红细胞比白细胞数量多、代谢快,所以其作用是白细胞无法比拟的。白细胞是主要免疫细胞之一,其数量多少影响动物免疫能力【,】。成熟的白细胞主要分布在脾脏、淋巴结等淋巴器官中,并通过血液循环系统遍及全身各器官,白细胞总数在血液中保持相对恒定【。白细胞为无色有核细胞,温州医学院硕士学位论文其数量远少于红细胞,但其抵抗疾病、保护机体的功能是

32、非常重要的。其中的淋巴细胞具有产生和运载抗体、防御病毒感染的作用;嗜中性粒细胞是担负机体防御第一线的中心因子,在发挥对病原微生物的吞噬杀菌能力非常有效;单核细胞具有吞噬作用,是抵制微生物侵入机体的重要防线。血红蛋白也是血液一般检查的一个重要指标。其是红细胞内的主要成份,是一种含铁的蛋白质,能使血液呈红色,主要具有运输氧的功能。是血液中运输氧的重要物质,氧与的化学结合生成了氧合血红蛋白,这是氧在血液中存在和运送的主要形式。血红蛋白含量是反映机体机能和综合营养状况的一个指标。本实验选取血液常规中比较重要的项指标进行检测。结果发现,所有给药组的血液指标与正常对照组相比,都没有显著性的差异,这说明,在

33、腹腔注射给药方法下,新合成的这两种药物在现给的浓度下对小鼠的白细胞总数、红细胞总数、红细胞压积及血红蛋白浓度没有影响,毒性较小,安全性良好,为将来该类药物在动物毒性,药理作用及新药开发等方面奠定了良好的基础。.和对小鼠生化指标的影响谷丙转氨酶,又名谷氨酸转氨酶,简称,主要存在与肝脏、心脏和骨骼肌中。谷草转氨酶,又名门冬氨酸转氨酶,简称,存在于肝细胞线粒体内。谷草转氨酶、谷丙转氨酶是细胞内酶,它们可催化.氨基酸的氨基转移到.酮酸的酮基位置上,产生新的.酮酸和新的.氨基酸,所以它们在氨基酸代谢及构成蛋白质、脂肪及糖三者相互转化的关系上有极重要的地位,它们在肝、。肾、心肌、脑及其它组织均存在,在健康

34、动物的血清中,它们的活力很小,而组织中的转氨酶活力较高,所以当组织病变而引起细胞的通透性增高,或受损伤的组织范围较时,细胞内的转氨酶大量释放出来,使血清中转氨酶浓度大大增高;因此,血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性检测在生化检验中主要作为肝脏功能和心脏功能的特异性指标。本试验结果发现,所有给药组的生化指标与正常对照组相比,都没有显著性的差异,这说明,新合成的这两种药物在现给的浓度下对小鼠血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性没有影响,毒性较小,安全性良好。.小结为了评价新合成的化合物的安全性,本实验组选择了新合成药物中的代表药温州医学院硕士学位论文物和做了急性毒性实验和亚急性毒性实验。急性毒性实验

35、表明药物和的/。亚急性毒性实验表明在/,/的浓度下药物和对小鼠的体重无影响;药物和对小鼠的血常规中的白细胞总数、红细胞总数、红细胞压积和血红蛋白无影响;药物和对小鼠谷草转氨酶和谷丙转氨酶浓度无影响。温州医学院硕士学位论文第二节阿昔洛韦与杂氮硅三环结合物的抗乙肝病毒实验,感染是威胁人类健康的严峻问题,乙型肝炎病毒全球大约有%的人受到感染。我国是肝病高发国家,一般人群的表面抗原携带率高达%,而原发性肝癌中的.%与此有关。因此,研究控制感染,预防和治疗肝癌,一直是抗药物研究的重点和难点。在本次研究中,将目标物进行以下抗病毒活性测试,以期筛选出抗候选药物,并且进行免疫方面的研究,寻找新药物可能的作用机

36、制。.体外抗病毒活性.实验材料试剂/仪器名称 试剂/仪器来源合成培养基美国 公司分装美国 公司谷氨酰胺美国 公司胎牛血清美国 公司二甲基亚砜上海科华上海科华试剂盒培养箱,日本三洋倒置显微镜日本奥林巴斯公司?超净工作台天津尘埃净化设备厂细胞培养盒美国孔细胞培养板美国孔细胞培养板美国酶标检测仪美国.公司.型定量扩增仪美国.公司普朗洗板机美国 公司.细胞株引自北京大学医学院第一附属医院病毒研究所.实验方法.细胞株的培养、冻存、复苏温州医学院硕士学位论文.细胞株的培养引自北京大学医学院第一附属医院病毒研究,所: 中加入 ,%胎牛血清/谷氨酰胺,%青霉素、链霉素,%调 .培养,每天传代一次。.细胞的冻存:按常规消化法处于对数生长期的细胞培养物,制/成单细胞悬液,计算细胞总数,活细胞数量不能少于%,将细胞悬液离心 ,弃去上清液,加入冷冻