实验六淀粉酶的专一性和温度pH激动剂抑制剂对酶活性的影响

1、 料推荐实验六淀粉酶的专一性和温度、pH、激活剂及抑制剂对酶活性的影响实验类型：验证型目的和要求1. 通过本实验观察、验证酶的专一性和温度、pH、激动剂及抑制剂对酶活性的影响。2. 熟悉淀粉及其酶解产物的特殊显色方法；电热恒温水浴的使用。3. 了解唾液淀粉酶的收集与预处理。原理酶具有高度专一性，一种酶只能催化一种或一类底物发生反应，如淀粉酶只能水解淀粉，不能水解蔗糖。当淀粉被淀粉酶彻底水解为还原性麦芽糖和葡萄糖时，能使班氏试剂的 Cu2+ 还原成 Cu1+，生成砖红色 Cu2O沉淀。淀粉酶的活性受温度、 pH、激动剂及抑制剂、酶浓度以及作用时间等多种因素影响，因而水解淀粉生成一系列分子大小不同

2、的糊精。不同程度的水解糊精可与碘反应生成紫色、棕色或红色络合物。通过上述特征性反应，并以蔗糖等作对照，便可观察、验证淀粉酶是否具有专一性以及它的催化活性是否受到影响。操作方法一、唾液淀粉酶的收集与处理1. 制备唾液实验者先将痰咳尽， 用自来水漱口， 以清除口腔内食物残渣， 再在口腔内含蒸馏水约 15ml ，并作咀嚼咕漱运动， 3 分钟后吐入垫有两层经润湿处理的脱脂纱布的漏斗内，过滤于小烧杯中备用，为与下面稀释唾液相区别，此称制备唾液。2. 煮沸唾液取上述唾液约2ml ，盛入 1 中号试管中 , 置沸水浴煮沸5 分钟备用。3. 稀释唾液调整唾液淀粉酶活性，使之在pH6.8 、37和既无激动剂又无

3、抑制剂条件下，作用 5min，水解淀粉至红色糊精为宜。具体做法是取12 凹白瓷反应板一块，按下列步骤操作：第 1 排每凹各加1 滴制备唾液，12、 13、 14 凹分别加生理盐水1、 2、 3 滴，用滴管采用抽吸法，由稀到浓（1412）小心混匀各凹，勿使溅入相邻凹中。每混匀一凹便取其1 滴放入同列的 2 排凹中，剩余稀释唾液应全部放回原凹中。在盛有不同稀释度唾液的第2 排各凹中，均加入4 滴缓冲液（ pH6.8 ），2 滴 1%的淀粉液和 2 滴蒸馏水，用混匀法充分混匀，置37下 5min。在第 2 排各凹中加I 液一滴，混匀，观察比较各凹颜色，以浅棕-红色对应的稀释倍数，用生理盐水稀释3ml

4、 制备唾液备用。二、唾液淀粉酶的专一性以及温度、pH、激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性影响的观察1 料推荐（一）取试管3 支编号，按下表1 操作表 1唾液淀粉酶专一性的实验观察试剂pH6.8 缓冲1淀粉溶1 蔗 糖制 备 唾煮沸唾液液液溶液液试管120 滴10 滴5 滴220 滴10 滴5 滴320 滴10 滴5 滴将上述各管混匀后，置 37水浴中保温10 分钟，然后每管加入班氏试剂20 滴，再放入沸水浴中煮沸约15 分钟，观察各管颜色反应，并说明原因。（二）温度影响酶促反应的实验观察1.取试管 3支编号，按下表2 操作：表 2温度影响酶促反应的实验观察管号123试剂1.pH6.8缓冲液20 滴

5、20 滴20 滴2.1 淀粉溶液10 滴10 滴10 滴3. 预热 5min37水浴沸水浴冰浴4. 直接加入稀释唾5 滴5 滴5 滴液，立即混匀、计时5. 保温 10min37水浴沸水浴冰浴2.将一、二管移入冰水浴中，待各管温度一致后速向各管加入碘液1 滴，混匀后观察各管颜色的区别，并说明温度对酶促反应的影响。四、 pH 影响酶促反应的实验观察1. 取试管3 支编号，按下表3 操作：表 3pH 影响酶促反应的实验观察pH4.0 缓冲液 pH6.8 缓冲pH8.0 缓冲1淀粉溶稀释唾液液液液试管 120 滴10 滴5 滴试管 220 滴10 滴5 滴试管 320 滴10 滴5 滴2.将上述各管混

6、匀后，置 37水浴中保温 10 分钟，然后每管加入碘液 1 滴，混匀后观察各管颜色的区别，并说明 pH 对酶促反应的影响。2 料推荐五、激动剂和抑制剂影响酶活性的实验观察1. 取试管 4 支编号，按下操作：表 4 激动剂和抑制剂影响酶活性的实验观察pH 6.81 淀粉蒸馏水0.911稀 释 唾缓冲液溶液NaClCuSO4Na2SO4液120 滴10 滴10 滴5 滴220 滴10 滴10 滴5 滴320 滴10 滴10 滴5 滴420 滴10 滴10 滴5 滴2. 将上述各管放入 37水浴中保温 10 分钟怎么减肚子 ，然后每管加入碘液 1 滴，混匀后观各管颜色的区别，并说明激动剂和抑制剂对酶

7、促反应的影响。注意事项1.反应试管应清洗干净，不同酶液、试剂及其滴管不能交叉混用；2.使用混合唾液，或通过预试选出合适的唾液稀释度，效果更为显著。试剂和器材一、器材1. 滴管、烧杯、试管（架）及试管夹。2. 恒温水浴箱与水浴锅。3. 脱脂棉、漏斗及纱布。4. 白瓷反应盘二、试剂1.1 淀粉称取淀粉1g，岳阳家政 加少量水调成糊状，加入煮沸的0.3 NaCl 溶液至 100m1。2.1 蔗糖溶液3. 班氏试剂A 液：取柠檬酸钠 173，无水碳酸钠 100，加水 600ml ，加热溶解，冷却后稀释至 850ml； B 液：取结晶硫酸铜（ CuSO4 5H2O） 17.3 溶于 100ml 预热的蒸馏水中，冷却后加水至 150ml。将 A 液缓慢倒入 B 液中混匀置试剂瓶备用。4. 碘液：称取碘 4g、碘化钾 6g 溶于 l000ml 蒸馏水中，置棕色瓶内贮存备用。5. 各种 pH 缓冲液3 料推荐 pH6.8 缓冲液：取 0.2mol/LNa 2HPO4溶液 772ml ，0.1mol/L 怎么减肚子 柠檬酸溶液 228ml混合即成。 pH4.0 缓冲液：取 0.2mol/LNa 2HPO4溶液 385.5ml ， 0.1mol/L 柠檬酸溶液 614.5ml 混合即成。 pH8.0 缓冲液：取 0.2mol/LNa 2HPO4溶液 972ml ，0.1mol/