生理学实验课堂

1、生理学实验,目录,1,2,3,4,血液凝固,蛙心期前收缩和代偿间歇,蟾蜍坐骨神经,腓肠骨标本的制备,刺激强度、刺激频率与肌肉收缩收缩的关系,小肠运动与吸收观察,脊髓反射,5,6,实验一,血液凝固,目的,了解血液凝固的基本过程及影响血液凝固,的一些因素,原理,血液流出血管后，迅速发生凝固。血液凝,固是由多种凝血因子参与的一系列酶促反应的级,联反应，大致可分为三个主要步骤，即凝血酶原,激活物的形成、凝血酶原激活物催化凝血酶原转,变为凝血酶、凝血酶催化纤维蛋白原转变为纤维,蛋白，最后由纤维蛋白聚合成血凝块。这三个步,骤都需要,Ca,2,的参与,材料和设备,试管、试管架、吸管、秒表,3.8,柠檬酸钠、

2、新鲜血,1,氯化钙,5,草酸钾、烧,杯、酒精灯、肝素、液体石腊、冰瓶、温度计等,方法和步骤,1,影响血凝的物理因素,1,取试管,3,支，一支做对照，另两支分别加少量棉花和涂,少许液体石腊,2,加,1ml,新鲜血液到三支试管内，每,30s,轻轻地倾斜试管,一次，记录三管的凝血时间,2,温度对血凝的影响,取试管,3,支，各加入,1ml,新鲜血液,然后分别置于,37,水浴、常温和冰水中，比较,3,管的凝血,时间,3,Ca,2,对血凝的影响,1,取试管,3,支，一支做对照，另,2,支分别加入,3,滴,3.8,柠,檬酸钠和,5,草酸钾，然后再向各管加入,1ml,新鲜血液,混合后观察血凝情况,2,往加入柠

3、檬酸钠和草酸钾的两管内分别再加,1-2,滴,1,CaCl,2,后，观察结果,4,肝素的作用,取一支试管放入,8,单位肝素，再加入,1ml,新,鲜血液，摇匀后，观察结果,思考题,1,血液凝固包括哪些过程,为什么正常动物血管内血液不,易凝固,2,实验中各种因素能够加速,或延缓血液凝固的原因是什么,实验二,蛙心期前收缩和代偿间歇,目的,观察心肌收缩活动不同时期给予额外刺激时所做出,的不同反应，了解心肌兴奋性的变化及代偿间歇的原理,原理,心肌的一个最大特点是具有较长的不应期，有效不,应期占据了整个收缩期和部分舒张期，因此收缩期给予任,何刺激，心室不发生反应。在心肌动作电位的相对不应期,对应的心室舒张期

4、给予单个阈上刺激，会发生一次节律以,外的收缩，称为期前收缩，静脉窦传来的节律性兴奋正好,落在期前收缩的收缩期，因此心室不产生收缩，需要等到,下一次的静脉窦兴奋传来。因此在期前收缩后会发生较长,时间的舒张期，称为额外收缩的代偿间歇,材料和设备,蛙或蟾蜍,BL-420S,生物机能实验系统、张,力换能器、刺激电极、支架、双凹夹、蛙板、蛙类手术器,械、蛙心夹、玻璃小烧瓶或培养皿、滴管、任氏液、丝线,方法和步骤,1,用探针损毁蟾蜍的脑、脊髓，暴露心脏。在心舒,期用蛙心夹夹住心尖，将系于蛙心夹的线与张力,换能器连接，调节张力换能器高度，使连线保持,垂直，松紧适当。按图连接线路，张力换能器输,入端接生物机能

5、实验系统相应通道。打开计算机,启动,BL-420S,生物机能实验系统。进入“期前,收缩与代偿间歇”程序。调节参数，其中,G,100,倍,T:DC,F:10HZ,扫描速度,1.0s/div,刺,激电极接触心室：刺激参数选单刺激、波宽,5ms,幅度,0.5V(0.02V-1V,脉冲数,1,延时,1ms,然后进行实验项目,2,实验观察,1,记录正常的心跳曲线。确定曲线哪一部分代表心室收缩,哪一部分代表心室舒张,2,先描记几个正常心跳曲线作为对照，然后选择适当强度,的阈上刺激，分别在心室收缩期和舒张的早、中、晚期刺,激心室，观察心跳曲线有何变化,3,在心室舒张的中、晚期改变刺激强度刺激心室，观察心,室

6、收缩的幅度是否发生变化,4,如果连续刺激心室肌，观察心肌是否会出现强直收缩,注意事项,1,实验过程中，应经常用任氏液湿润心脏,2,安放在心室上的刺激电极应避免短路,3,心跳曲线的上升支应代表心室收缩，下降支代表心室舒,张。如相反则应将换能器倒向,4,选择适当刺激强度时，可先用刺激电极刺激蟾蜍腹壁肌,肉，以检查强度是否有效,思考题,1,讨论期前收缩和代偿间歇产生的原因,2,心肌的有效不应期长有何生理意义,3,当心率过速或过缓时，期前收缩后是否会出现代偿间歇,为什么,4,存在不应期的实验依据是什么,实验三、蟾蜍坐骨神经,腓肠骨标本的制备,目的,学习坐骨神经,腓肠肌标本制备方法，掌握,基本操作技术,

7、原理,蛙类的离体组织所需的理化条件比较简单,易于控制和掌握。因此，在实验中常用蟾蜍或,蛙坐骨神经,腓肠肌标本来观察兴奋性、兴奋过程,刺激的一般规律以及骨骼肌的收缩特点等,材料和设备,蟾蜍或青蛙、任氏液，蛙板，玻璃,板，粗剪刀，组织剪，眼科剪，组织镊，眼科镊,探针，玻璃针，大头针，滴管，培养皿，锌铜,弓，丝线，瓷盘,方法和步骤,破坏脑和脊髓：取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。右手,持探针从枕骨大孔垂直刺入，然后向前剌入颅腔，左右搅,动捣毁脑组织；将探针抽出再由枕骨大孔向后刺入脊椎管,捣毁脊髓。此时如蟾蜍的四肢松软，呼吸消失，表示脑脊,髓已完全破坏，否则应按上法再行捣毁（见图,A,剪除躯干上部及内脏：

8、在骶髂关节水平以上,0,5,1,厘,米处剪断脊柱，使蟾蜍头与内脏自然下垂，右手持粗剪刀,沿两侧剪除其一切内脏及头胸部,注意勿损伤坐骨神经,仅留下后肢、骶骨、脊柱及由它发出的坐骨神经（见图,B,剥皮：左手握脊柱断段（注意不要握住或接触,神经），右手捏住其上的皮肤边缘，向下剥掉全,部后肢的皮肤将标本放在盛有任氏液的培养皿中,将手及用过的剪刀、镊子等全部手术器械洗净,再进行下述步骤,分离两腿：用镊子从背位夹住脊柱将标本提起,剪去向上突出的骶骨,注意勿损伤坐骨神经,然后沿正中线用剪刀将脊柱分为两半并从耻骨联,合中央剪开两侧大腿，这样两腿即完全分离。将,两条腿浸于盛有任氏液的培养皿中,制作坐骨神经腓肠肌

9、标本：取一条腿放于玻璃,板上,游离坐骨神经：将标本背侧向上放置，把梨,状肌及其附近的结缔组织剪断，再循坐骨神经沟,股二头肌及半膜肌之间的裂缝处,找出坐骨神经,之大腿部分（见图,C,，用玻璃针小心剥离，在,神经完全暴露后，然后用粗剪刀剪下与神经相连,的从脊柱，用镊子提起小块脊柱，用眼科剪剪断,坐骨神经的所有分支，并将神经一直游离至膝关,节处,完成坐骨神经小腿标本：将游离干净的坐骨,神经搭于腓肠肌上，在膝关节周围剪掉全部大腿,肌肉并用粗剪刀将股骨刮干净，然后在股骨中部,剪去上段股骨，保留的部分就是坐骨神经小腿标,本,完成坐骨神经腓肠肌标本：将上述坐骨神经,小腿标本在跟腱处穿线结扎后剪断跟腱。游离腓

10、,肠肌至膝关节处，然后沿膝关节将小腿其余部分,全部剪掉，这样就制得一个具有附着在股骨上的,腓肠肌并带有支配腓肠肌的坐骨神经的标本,7,用锌铜弓检查标本：用经任氏液沾湿的锌,铜弓迅速接触坐骨神经，如腓肠肌发生明,显而灵敏的收缩，则表示标本的兴奋性良,好，即可将标本放在盛有任氏液的培养皿,中，以备作实验之用,如无锌铜弓设备,可用中等强度单个电刺激检查标本的兴奋,性,注意事项,1,操作过程中，勿污染、压榨、损伤、过度,牵拉神经和肌肉,2,经常给神经和肌肉上滴加任氏液，防止表,面干燥，以保持标本正常兴奋性,实验四、刺激强度、刺激频率与肌肉收缩,收缩的关系,目的,观察刺激强度与肌肉收缩张力之间的关系,观

11、察刺激频率与肌肉收缩形式之间的关系,原理,腓肠肌由许多肌纤维组成。当刺激支配腓,肠肌的坐骨神经时，不同的刺激强度会引起兴奋,性不同的肌纤维不同的反应。当刺激强度过小时,不引起肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下,刺激。刺激强度逐渐增强时，可引起少数肌纤维,发生收缩反应，该刺激强度为阈刺激。随着刺激,强度的增大，被兴奋的肌纤维数目增多，收缩幅,度逐渐增大，此时的刺激强度为阈上刺激。当全,部肌纤维同时收缩时，肌肉收缩幅度达到最大,此后再增加刺激强度，肌肉收缩的幅度不再增加,此时的刺激为最大刺激,由一次单个阈上刺激引起的收缩称为单收缩。如果,给肌肉以连续的脉冲刺激，肌肉的收缩形式随刺,激频率而有不同表

12、现。在刺激频率较低即后一次,刺激在前一次收缩舒张期结束后到达肌肉，会出,现连续的单收缩；当刺激频率增大到一定程度时,后一次刺激在前一次收缩的舒张期结束前到达,肌肉，肌肉收缩曲线表现为锯齿形，称为不完全,强直收缩；如果刺激频率继续增加，后一次刺激,落在前一次收缩的收缩期，肌肉收缩曲线表现为,一光滑的、更高的曲线，称为完全强直收缩,材料和设备,蟾蜍或蛙、任氏液,BL-420S,生物信,号采集处理系统,蛙类手术器械，肌槽，张力换能,器，铁柱架，双凹夹，任氏液，培养皿,方法和步骤,1,制备蛙坐骨神经腓肠肌标本,2,连接实验仪器,将坐骨神经腓肠肌标本固定于肌,槽，股骨残端固定于肌槽的小孔中，腓肠肌的跟,

13、腱通过结扎线缚在张力换能器悬梁的着力点上,换能器固定于铁柱架的双凹夹上，并与生物信号,采集处理系统的输入通道插孔相连。坐骨神经放,置于肌槽的刺激电极上，刺激电极连接刺激输出,插孔,实验项目,1,刺激强度对骨骼肌收缩张力的影响,1,刺激参数设置,单次方式，波宽,0.1-0.3ms,2,观察记录,点击“刺激”按扭，选择最小刺激,强度,0.1V,，然后逐渐增大刺激强度，记录阈,刺激和最大刺激值,3,测量每一刺激强度对应的肌肉收缩张力；测,量最大刺激时肌肉的收缩期和舒张期的时间，比,较两者之间的差异,2,刺激频率对骨骼肌收缩形式的影响,1,选择连续单刺激，波宽,0.3-0.5ms,最大刺激,强度，刺激

14、间隔时间大于肌肉收缩时程，记录肌,肉的单收缩张力曲线,2,选择双刺激（其余刺激参数不变），改变刺激,波间隔，使刺激间隔时间小于肌肉单收缩时程,长于收缩期时间，记录两个收缩的复合曲线,3,选择连续刺激，其余刺激参数不变，由低到高,调整刺激频率，记录肌肉不完全强直收缩和完全,强直收缩的张力曲线,不同频率对骨骼肌收缩的影响,刺激强度对骨骼肌收缩的影响,思考题,1,骨骼肌的收缩与刺激强度之间的关系如,何,2,为什么在达到最大刺激之前，骨骼肌收,缩会随刺激强度的增加而增大幅度,3,为什么刺激频率增加时，肌肉收缩幅度,也增大,4,如果刺激直接施加在肌肉上会出现什么,现象？为什么,实验五、小肠运动和吸收观察

15、,目的,观察小肠运动情况以及某些药物对肠运动,的影响，观察溶液浓度对小肠吸收速度的影响,原理,胃肠道平滑肌有自律性收缩，但受到神经,和体液的调节时其紧张性和运动节律会发生改变,肠内容物的渗透压是制约肠吸收的重要因素,同种溶液在一定浓度范围内，浓度愈大，吸收愈,慢；浓度过高（高渗溶液）时，出现反渗透现象,水分由血液进入肠腔，使内容物的渗透压降低,至等渗时，才被吸收,材料和设备,兔,1,只、解剖器械,0.01,肾上腺,素,0.01,乙酰胆碱、结扎线、蒸馏水,0.9,氯,化钠,5,氯化钠等,实验步骤,1,先将两只家兔用,20,戊巴比妥钠麻醉，仰卧,固定在手术台上，沿腹中线切开，暴露其小肠,注意观察正

16、常状态下小肠的运动情况。然后在一,只家兔的小肠上滴,2,滴,0.01,肾上腺素，另一只,家兔滴上,2,滴,0.01,乙酰胆碱，注意观察小肠的,运动发生了什么变化,2,选取一段小肠，将内容物挤向一侧，然后用结,扎线将内容物的部分结扎成等长的三段，用注射,器将蒸馏水,0.9,氯化钠,5,氯化钠分别等量,的注射到每一段中，然后，将腹腔用止血钳闭合,半小时后观察结果,思考题,1,试分析肾上腺素和乙酰胆碱对小肠运动,影响的机理,2,三段肠管中溶液的量有什么变化？为什,么,实验六、脊髓反射,目的,观察脊髓反射的基本特征,屈肌,和伸肌反射、搔扒反射,原理,中枢神经系统活动的基本方式是反,射。脊髓是中枢神经系统的最低级部位,它的机能最简单，便