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文档简介

1、ELISA(酶联免疫吸附试验) 凝集反应(ABO血型测定)7A208 蒋朋飞,ELISA (酶联免疫吸附试验) Enzyme Linked Immunosorbent Assay,免疫标记技术: 将抗原、抗体的特异性反应与标记物相结合的新技术，用于定性或定量检测未知的抗原或抗体,免疫荧光法示意图,1.已知抗原包被 （HBsAg,2.加入待测标本（血清,4.加入酶标二抗,6.加入底物,3.洗涤,5.洗涤,ELISA间接法,原理：间接ELISA法(酶联免疫吸附试验,颜色改变 = 待测标本中存在抗体,1.包被已知抗原 2.加入待测标本 （未知抗体？） 3.加入酶标二抗 （即抗抗体 ：抗人Ig的抗体）

2、 4.加入底物,洗涤,洗涤,不显色,实验目的: 检测血清标本中有无HBsAb,材料: 48孔ELISA板 阳性对照血清（HBsAb） 阴性对照血清 酶标二抗 洗涤液 底物A和B 微量加样器，待测血清标本等,乙肝病毒表面抗体 诊断试剂盒,实验方法,微孔板已包被HBsAg,HBsAg,A B C D,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12,步骤： 1、加入待检标本50ul； 同时设阴性对照和阳性对照 (分别各加1滴) 2、加入酶结合物1滴/每孔，混匀，封板，3730min 3、弃去每孔液体, 用洗涤液洗涤每孔，5秒5次， 拍干板 4、每孔加显色液A、B各1滴, 混匀, 37 10-1

3、5min 5、肉眼观察颜色深浅 （+：蓝色； -：无色,颜色变化或OD（吸光度）值,酶标仪,酶标板,实验结果,加样,- 1 2 3 4 5 6,每孔加 50l 不同的血清样本 Positive control (HBsAb) ：1 滴 Negative control (NS): 1 滴,加样,- sample,加酶结合物,每孔加酶结合物1滴,混匀， 37 30 min,加酶标二抗,抗原抗体 复合物,游离,洗涤,加底物,每孔加底物 A and B 各一滴 混匀， 37 10 min,颜色变化或OD（吸光度）值,酶标板,实验结果,凝集反应,原理,颗粒性抗原与相应抗体发生特异性结合，并在一定条件下形成肉眼可见的凝集物,应用：检测未知Ag或Ab,分类： 1.直接凝集反应： 2.间接凝集反应,玻片法-ABO血型鉴定、菌种鉴定 试管法-肥达反应,ABO血型测定,实验目的: 检测待测者ABO血型,材料: 抗A和抗B血清, 生理盐水, 载玻片, 采血针等,实验方法,准备生理盐水管：0.5ml / 管 制备红细胞悬液: 碘酒、酒精消毒无名指端, 采血, 1或2滴血液滴入生理盐水管中 两载玻片分别加抗A, 抗B血清各1滴 两载玻片分别加红细胞悬液各1滴, 混匀, 10-15分钟内观察结果,实验结果,呈红色片状凝集颗粒为阳性,实验结束后，洗涤试管；玻片置于消毒缸中；塑料滴管弃去,思考,E

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