纤维素酶在葛根有效成分提取中的应用

1、纤维素酶在葛根有效成分提取中的应用,一、总设计思路,发现问题，结合已有成果，总结经验,分析总结,二、选题基础,有效成分,植物药材的有效成分被包裹在细胞壁中细胞壁主要成分是纤维素，大量的纤维素阻碍了有效成分的溶出,细胞壁,纤维素酶解提取过程,酶解破壁,有效成分的提取,纤维素酶解提取,酶解优点,两种提取方法的比较,萃取时间长 需要使用大量溶剂 受植物细胞壁纤维组织的 屏障作用 提取率较低（尤其是以富含纤维素的根、茎、皮类药材为原料提取时,纤维素的屏障作用更为突出,酶处理法,可使细胞壁发生不同程度的改变,如软化、膨 胀和崩溃等 可改变细胞壁的通透性 有利于壁内的药效成分溶出,从而提高药效成分的提取率

2、。,传统的水、酸、碱、 有机溶剂提取方法,三、确定实验对象,葛根是一味常用的药材，为豆科植物野葛或甘葛藤干燥根,葛根多为根部用药，常为斜切或纵切的块片，其切面粗糟，纤维性强，对根部入药药材酶解法提取的研究有较好的代表性，因此本次实验选取野葛根药材最为研究对象进行实验设计,葛根主要含黄酮类化合物，含量达12,四、实验设计,1. 制备供试液,20g葛根粗粉 加入100mL乙醇回流提取1.5h， 抽滤（再重复两次） 药 渣 60%乙醇回流提取4次 合并乙醇溶液，减压浓缩 浸 膏 用少量甲醇溶解， 除去不溶物 定容于100mL量瓶中,一）测定纤维素酶对葛根总黄酮的影响,分别取5mL甲醇溶液两份（A,B

3、） A：用甲（乙）醇定容至25ml作为对照组； B：将甲醇蒸干15mLpH4.8的磷酸盐缓冲液超声溶解于25mL三角瓶中加入75mg纤维素酶 50水浴2.5h，水浴蒸干用甲醇超声溶解，定容于25mL量瓶中,处理,1.薄层色谱 分析,液相或 液质联用,3.检测,按照2005年中华人民共和国药典一部葛根项下方法进行薄层色谱检查和HPLC法进行比较,提取物未经任何处理,提取物加酶处理3小时,测定结果,通过薄层比较未发现两实验组的斑点有明显变化 ； 通过高效液相测定，对照组与实验组的谱图上显示峰数目、保留时间等参数均有很大变化,二）测定纤维素酶对葛根的作用,2g葛根粗粉 25mL水 30mL甲醇 超声

4、25min,过滤 药渣 加入30mL甲醇 超声25min 合并甲醇溶液 蒸干 用甲醇溶解 定容于25mL量瓶中,2g葛根粗粉 缓冲液25mL 100mg纤维素酶 50水浴5h 同法处理 定容于25mL量瓶中,1.薄层色谱 分析,2.总黄酮含 量测定,3.液相或 液质联用,检测,原药材未经酶解,原药材经酶解后,测定结果,通过薄层比较未发现两实验组的斑点有明显变化 ； 通过高效液相测定，对照组与实验组的谱图上显示峰数目、保留时间等参数均有很大变化 由于缺少对照品，总黄酮含量并未测定，因此无法确定提取率是否增加,实验特色,实验设置了两个对照组进行比较分析，较全面的考虑了可能的影响因素： 这是本实验研究的独特性 此外，实验中应用三种检测方法分别进行对照分析，这与已经发表的研究文献相比也具有良好的准确性,五、前期工作小结,在前期实验中，应用薄层层析法对各供试品 进行检测分析，显示结果与对照组相比较斑 点无明显变化。这与相应文献记载相符合。 但是样品用高效液相测定之后发现异常现象，对照组与实验组的谱图上显示峰数目、保留时间等参数均有很大变化。因此我对文献中纤维素酶解没有破坏葛根的有效成分这一说法存在质疑,六、后续实验设计,1.用分光光度法对提取物进行含量测定，以确 定酶解是否提高了药