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文档简介

1、福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质的浓度,一、原理,蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸，在碱性条件下，可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色（生成钼蓝和钨蓝化合物）。蓝色的深浅与蛋白质的含量成正比，可用比色法测定,二、实验仪器 1.卵清蛋白片 2.7220分光光度计 3.试管 4.移液管 三、实验试剂 1.Folin-酚试剂A：碱性铜溶液 甲液：取Na2CO32g溶于100ml0.1mol/l氢氧化钠溶液中 乙液：取CuSO4.5H2O晶体0.5g，溶于1%酒石酸钾100ml中。 临用时按甲：乙=50：1混合使用。 2.Folin-酚试剂B：将100g钨酸钠、25g钼酸钠、700ml蒸

2、馏水、50ml85%磷酸继100ml浓盐酸置于1500ml的磨口圆底烧瓶中，充分混匀后，接上磨口冷凝管，回馏10小时，再加入硫酸锂150g，蒸馏水50ml及液溴数滴，开口煮沸15分钟，在通风橱内驱除过量的溴。冷却，稀释至1000ml，过滤，滤液成微绿色，贮于棕色瓶中。临用时，用1mol/l的氢氧化钠溶液滴定，用酚酞作指示剂，根据滴定结果，将试剂稀释至相当于1mol/L的酸。 3.1mg/mL牛血清蛋白液：称取1g牛血清蛋白片溶于0.9%氯化钠溶液中，并稀释至 1000ml,四、实验步骤,1.标准曲线的绘制 取7支干燥的试管，编号，按下表加入试剂，比色后，以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标作图

3、。 2.样品测定 准确吸取样液0.5ml于干燥的试管中，同样按下表加入试剂，测出光密度值后，对照标准曲线求出样液的蛋白质浓度,蛋白质含量测定的方法有哪些，各有什么优缺点,下次试验：氨基酸纸层析和维生素C定量测定-2，6，二氯酚靛酚法,附：7200型分光光度计的操作程序,连接仪器电源线，确定仪器供电电源有良好的接地性能。 接通电源，使仪器预热20分钟。 用键设置测试方式：投射比（T），吸光度（A），已知标准样品浓度值方式（C）和已知标准样品斜率（F）方式。 用波长选择旋钮设置您所需的分析波长,将参比样品溶液和被测样品溶液分别倒入比色皿中，打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样

4、品室盖。一般情况下，参比样品放在第二个槽位中。 将0T校具（黑体）置入光路中，在T方式下按“0T”键，此时显示器显示“000.0,按 MODE键选择A模式 将参比样品拉入光路中，按“0A/100T”键调0A/100T，此时显示器显示的“BLA”直至显示“0.000”A为止。 当仪器显示器显示出“0.000”A后，将被测样品推入光路，这时，您便可从显示器上得到被测样品的吸光度,分光光度计的使用注意事项,比色皿的清洁程度，直接影响实验结果。因此，特别要将比色皿清洗干净。装样前处理：自来水反复冲洗蒸馏水漂洗2次待装溶液漂洗2次。用完后用自来水和蒸馏水洗净并用檫镜纸檫干放回比色皿盒中,拿放比色皿时，应持其“毛面”，不要接触“光面,若比色皿外表面有液体，应用擦镜

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