蜱类不同发育期性信息素成分研究

1、蜱类不同发育期性信息素成分研究Berger1首次发现 2,6-二氯酚（2,6-DCP）为后沟类硬蜱中的吸引性信息素（attractant sex pheromone,ASP）成分，目前确定该成分至少在 7 属 18 种硬蜱中存在2-5.刘敬泽等6在长角血蜱（Haemaphysalis longicornis）雌蜱提取物中检测到 2,6-DCP,并研究了该成分在不同发育期的含量变化和生物学作用6. 2,6-DCP 作为蜱类防治的药物已有成功先例7.多年来，人们一直在寻找蜱类性信息素中是否还存在 2,6-DCP 以外的其他物质。 Hanson 等8在变异革蜱（Dermacentor variabi

2、lis）雌蜱提取物中鉴定出 2,4-DCP,同时确定 2,4-DCP 与 2,6-DCP 的含量比例为19,该物质对雄蜱也具有吸引作用，且 2,4-DCP 可以作为 2,6-DCP 的替代物9 ,2,4-DCP 和 2,6-DCP 对变异革蜱吸血雄蜱、吸血若蜱具有相同的作用10-11. 迄今，仅在革蜱属（Dermacentor）中有 2,4-DCP 的报道。为阐明其他蜱种中是否存在 2,4-DCP,分析该种性信息素成分在蜱类不同发育期的含量变化，本研究以长角血蜱为对象，对其雌蜱挥发性 ASP 的主要成分、生物学作用等进行了分析。1 材料与方法1.1 蜱的采集和喂养长角血蜱采自河北省小五台山国家

3、自然保护区。饥饿的幼蜱、若蜱和成蜱均在兔耳上饱血，非寄生期在人工气候箱中培养，培养温度（26±1），相对湿度75%,6 L（光照）18 D（黑暗）。 不同发育期的雌蜱：饥饿期（未吸血）、刚吸血（吸血 1 d）、吸血期（吸血 23 d）、交配期（吸血 35 d）、交配后（吸血 57 d）、饱血当天（吸血 57 d），分别取材用于研究。1.2 样品制备将不同发育期的成蜱 20 头分别放入磨口玻璃管中，加入 5.0 mL 正己烷后，封紧玻璃管，置 4 下充分抽提 2 h,正己烷重提 2 次，每次 30 min. 浓缩定容至20 μL,用于生物测定、色谱和质谱分析。1.3 色谱条件

4、1.3.1 气相色谱条件色谱柱为 OV-101 毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.15 μm），气化室温度和 Fid 检测器温度为 280 ，柱温为 60 （5 min），以 10 /min 升温至 280 ，信号采集时间 25 min,载气为高纯度氮气。1.3.2 质谱条件色谱柱为 DBS-MS 毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.15 μm），气化室温度和 Fid 检测器温度为 280 ，柱温为 80 （5 min），然后以 10 /min 升温至 280 ，信号采集时间 25 min,载气为氦气。 扫描质量范围为308

5、00 m/z,电子能量为 70 eV.1.4 生物测定用蘸有正己烷的脱脂棉在刚开始吸血雌蜱的体表进行擦拭，上、下午各 1 次；不做任何处理（作为空白对照）；在处理后连续 3 d 在雌蜱体表点滴正己烷，每天 1 μL（作为正己烷对照）；在处理后连续 3 d 点滴不同发育期雌蜱体表抽提物，每天 1 μL;在（1）处理后连续 3 d 点滴标准样品，分别为 2,4-DCP（100 ng）、2,6-DCP（30 ng）和 2 种成分的混合物（100 ng 的 2,4-DCP 和 30 ng 的 2,6-DCP）。 各处理组重复 5 次。2 结果与讨论2.1 雌蜱不同发育期体表抽提物的生物学测

6、定长角血蜱的生殖行为在吸血 35 d 后进行。 刚开始吸血的雌蜱经正己烷擦拭后生殖行为基本中止，施加不同发育期雌蜱的体表抽提物后，长角血蜱生殖行为的恢复程度如表 1 所示。由表 1 可以看出，从饥饿期开始，随着雌蜱发育的成熟，体表抽提物作用于正己烷处理过的长角血蜱后，其完成生殖行为的百分率增大，交配期雌蜱的体表抽提物效果最好。2.2 气相色谱/质谱分析根据不同发育期的雌蜱体表抽提物的生物测定结果，选取典型时期（交配期）样品进行气相色谱/质谱分析，结合 2,4-DC 与 2,6-DCP 标准样品的保留时间和质谱特征。 结果如图 1 所示，可知保留时间 9.90 min的成分为 2,4-DCP,保

7、留时间 10.53 min 的成分为 2,6-DCP.2.3 标准样品的生物测定2,4-DCP 与 2,6-DCP 标准品对交配成功率的效果如表 2 所示。 由表 2 可以看出，未处理的雌蜱（空白对照）均可饱血，擦拭正己烷后的对照组的雌蜱交配成功率不足 10%. 雌蜱体表经正己烷擦拭后无法完成生殖行为，施加测试样品后生殖行为得到不同程度的恢复。 施加 2,4-DCP 的处理组饱血率接近 70%;施加2,6-DCP 的处理组饱血率略高于施加 2,4-DCP 的处理组，差异没有统计学意义（p0.05）。 2,4-DCP 与 2,6-DCP 混合组分对饱血率的影响高于单独施加其中的一种成分的影响，差

8、异具有高度统计学意义（p2.4 不同发育期雌蜱 2,4-DCP 与 2,6-DCP 分泌量的动态变化通过外标法测定不同发育期时雌蜱的 2,4-DCP与 2,6-DCP 分泌量，结果如表 3 所示。由表 3 可以看出，饥饿期的雌蜱体表已经存在2,4-DCP 和 2,6-DCP;吸血开始后，2 种成分的分泌量都开始增加；交配期达到峰值，此后下降。 在所有发育期，2 种成分分泌量的比例关系基本保持一致。3 结论气相色谱及气质联用分析结果表明，长角血蜱雌蜱所有发育期均可分泌 2,4-DCP 和 2,6-DCP,并随雌蜱发育期而变化，交配期达到高峰，高峰后分泌量又逐渐下降，这与刘敬泽等12用气相色谱法在

9、长角血蜱盾窝腺丙酮提取物中检测的 2,6-DCP 含量动态变化基本吻合。 不同发育期，雌蜱体表分泌 2,4-DCP 和2,6-DCP 量的比例基本保持不变，约为 31,而 Hanson等8报道的变异革蜱中该比例为 19,这说明不同蜱种间存在差异，可以实现种间识别的隔离。根据硬蜱的交配行为，吸引性信息素由雌蜱在吸血后直至交配前不断释放，刺激并吸引性活动的雄蜱对雌蜱准确定位并完成交配行为。 本研究证实长角血蜱中这 2 种成分的分泌量动态变化与交配行为相吻合，且均对交配行为的完成有显着促进作用，因此可确定 2,4-DCP 和 2,6-DCP 均为性信息素成分，有关两种成分的作用机制及其在蜱类防治中的

10、应用尚需进一步研究。参考文献：1 BERGER R. 2,6-dichlorophenol,sex pheromone of the lone star tickJ.Science,1972,177（4050）：704-705.2 SONENSHINE D,KHALIL G,HOMSHER P. Dermacentor variablisand Dermacentor andersoni:genital sex pheromones J. ExperimentalParasitology,1982,54（3）：317-330.3 DE BRUYNE M,GUERIN P. Isolation

11、of 2,6-dichlorophenol from thecattle tick Boophilus microplus:receptor cell responses but no evidencefor a behavioural response J. Journal of Insect Physiology,1994,40（2）：143-154.4 BORGES L,EIRAS A,FERRI P. The role of 2,6 -dichlorophenol assex pheromone of the tropical horse tick Anocentor nitens（Acari:Ixodidae）J. Experimental and Applied Acarology,2002,27（3）：223-230.5 SARA F,LIGIA M. Electrophysiological responses of the olfactoryreceptors of the tick Amblyomma cajennens