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文档简介

1、实验二 蛋白质的沉淀与变性,1、了解使蛋白质胶体溶液稳定的因素。 2、了解蛋白质的可逆沉淀反应和不可逆沉淀反应。 3、掌握蛋白质的沉淀反应、变性作用的原理及 它们的相互关系。,一、实验目的,维持蛋白质胶体溶液稳定的因素：,外面的亲水基团结合一层水，形成水化膜,同种蛋白质表面带有相同电荷,二、实验原理,破坏水化膜,中和电荷,使蛋白质沉淀的原理,聚集体的直径100nm即为不稳定的粗分散系,（1）盐析 （2）有机试剂 （3）重金属盐 （4）有机酸 （5）加热 ,使蛋白质沉淀的方法,蛋白质沉淀变性的常见方法,蛋白质沉淀分类,（1）可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构并未发生显著变化，基本保持原有的性质，沉

2、淀因素除去后，能溶于原来的溶剂中。例如：盐析、乙醇低温短时作用，可用于蛋白质提纯。,（2）不可逆沉淀反应：蛋白质分子内部结构、空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，不再溶于原溶剂。例如：加热、有机酸反应。,蛋白质分子表面,水化膜,同种电荷,稳定的亲水胶,脱水，失去电荷,沉淀反应,可逆沉淀反应 （不变性沉淀反应） 如：盐析作用,不可逆沉淀反应 （变性沉淀反应） 如：重金属盐沉淀作用,蛋白质溶液：取10mL鲜鸡蛋清，用蒸馏水稀释至200ml，搅拌后用2-3层纱布过滤，新鲜配制。加入少量氯化钠可加速溶解球蛋白。 试剂：饱和硫酸铵溶液，硫酸铵粉，95%乙醇，2%硝酸银，0.5%乙酸铅，1%硫酸铜，10%三氯乙酸溶液，5%磺基水杨酸。,1. 试剂,三、实验仪器和试剂,漏斗,滤纸,吸管,试管及试管架,量筒、离心机等。,2. 仪器,1. 蛋白质的可逆反应盐析,四、实验操作,2. 蛋白质的可逆反应乙醇,3. 蛋白质的不可逆反应重金属盐（3支试管）,4. 蛋白质的不可逆反应有机酸（2支试管）,五、结果与分析,列出表格，记录相应的实验现象并对实验现象进行分析！,六、实验结论,哪些反应使蛋白可逆沉淀？ 哪些反应使蛋白不

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