培养基母液的配制方法

1、页眉内容培养基母液的配制方法一、实验目的1. 了解无菌操作2. 掌握培养基母液的配制方法 二、实验原理 配制培养及时，为了使用方便和用量准确， 通常采用母液法进行配制， 即将所选培养基配方中各试剂的用量， 扩大若干倍后再准确称量， 分 别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存， 使用时按比例吸取母液进 行稀释配制即可。三、实验器材和药品 器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。药 品：NH4NO、KNO3CaCI2 2H2O MgS04 7H2Q KH2PO、KI、H3BO3MnSO44H2O ZnSO47H2ONa2MoO4?H2O CuSO45H2OCoCI2 6H2OFeS

2、O4 7H2O Na2-EDTA 2H2O肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇（维生素B6）、盐酸硫胺素（维生素B1）、甘氨酸。四、实验步骤1 、大量元素母液的配制各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到1000ml的容量瓶中,即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。表1 MS培养基大量元素母液制备序号药品名称培养基浓度(mg/L)扩大10称量(mg)1NHNO1650165002KNO1900190003CaCl2 2H2C44044004MgSO. 7H2C37037005KHP

3、O1701700注意:(1)配制大量元素母液时，某些无机成分如 Ca2+ SO42-、Mg 2+和H2PO4-等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解， 药品采用等级较高的分 析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混 合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42、Mg2十和H2PO4 一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。(2)CaCI2 2H2O要在最后单独加入，在溶解 CaCI2 2H2O时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的 CO2以防沉淀。另外，CaCI2 2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。2、微量元

4、素母液的配制MS培养基的微量元素无机盐由7种化合物(除Fe )组成。微量元素 用量较少，特别是 CuSO4- 5H2O CoCI2 6H2O，因此在配制中分微量I、n配制。按照表2,表3配方，用电光天平称量，其它同大 量元素。配制培养基时，每配制1L培养基，取微量I 10ml，微量H0.1ml。序号化合物名称培养基浓度扩大10000倍称表2MS培养基微量I的配制序号化合物名称培养基浓度(mg/L)扩大100倍称量(mg)1MnSO- 4h2O22.322302ZnSO 7HO8.68603HBO6.26204KI0.83835NaMoO 2HO0.2525表3MS培养基微量n的配制(mg/L)

5、量(mg)1CuSO 5H2O0.0252502CoCl2 - 6H2O0.025250注意:使用电子分析天平时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用吸耳 球将天平内的脏物清理干净。3、铁盐母液的配制铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只需和大量元素一起配 成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合 物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不 易发生沉淀。配制方法同上，直接用蒸馏水加热搅拌溶解，定容至1L。配制培养基时，配制1L取此液10ml。表4 MS铁盐母液的配制序号化合物名称培养基浓度(mg/L)扩大100倍称量(mg)1Na-EDTA37.337

6、302FeSO 7H2O27.82780注意:在配制铁盐时，如果加热搅拌时间过短，会造成FeS04和Na2-EDTA鳌 合不彻底，此时若将其冷藏，FeSO4会结晶析出。为避免此现象发生, 配制铁盐母液时，FeS04和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合，并置 于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色（约加热20 - 30 min），调 pH值至5 .5，室温放置冷却后，再冷藏。4、有机母液的配制MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆素。培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。配制直接用蒸馏水溶解，定容至1L,注意称量时用电子分析天平。配制培养基时,每配1L培养基取此液5ml

7、。注意:由于维生素母液营养丰富，因此贮藏时极易染菌。被菌类污染的维生素母液，有效浓度降低，并且易给后期培养造成伤害，不宜再用。避 免此现象发生的方法是：配制母液时用无菌重蒸馏水溶解维生素，并 贮存在棕色无菌瓶中，或缩短贮藏时间。表5MS培养基有机物质母液的制备序号化合物名称培养基浓度（mg/L）扩大200倍称量（mg）1甘氨酸24002肌醇100200003盐酸硫胺素(Vbi)0.51004盐酸吡哆素(Vb6)0.51005烟酸0.51005、激素母液配制植物组织培养中使用的激素种类及含量需要根据不同的研究目的而 定。一般激素母液的配制的终浓度以 0.5mg/ml为好，需要注意的是: (1)配制生长素类，例如IAA、NAA 2.4-D、6BA应先用少量95沱醇或无水乙醇