土壤微生物的分离筛选

1、土壤微生物的分离筛选,一,微生物筛选原理及介绍,二,微生物筛选的流程,三,微生物筛选的操作,content,一、微生物筛选介绍,1、概念 2、筛选及纯化的方法 3、培养基的选择,概念： 在混杂的微生物群体中，按照微生物的代谢特征，分离出特定功能的微生物，并进行纯化直至获得单一菌株的操作过程。 土壤是微生物的大本营，混杂着大量的微生物，从中分离可得到只含有一种微生物的纯培养。,概念 筛选及纯化的方法 培养基的选择,微生物筛选的方法有：稀释涂布法和平板划线法。 稀释涂布法：将土壤溶液稀释成一定的梯度，将其涂布到固体平板培养基上。 平板划线法：挑取稀释涂布后长出的菌落，在固体平板培养基上划线培养，获

2、取纯菌落。,概念 筛选及纯化的方法 培养基的选择,细菌的筛选：选择性培养基 根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选效率。,概念 筛选及纯化的方法 培养基的选择,细菌的保存：牛肉膏蛋白胨培养基 配方（g）：牛肉膏3,蛋白胨10,氯化钠5，琼脂15,蒸馏水1000ml，pH7.2。,概念 筛选及纯化的方法 培养基的选择,二、微生物筛选纯化的流程,样品,富集培养,梯度稀释,涂布培养,平板划线纯化,斜面保存,三 微生物筛选纯化的操作,注意事项： 筛选之前，提前制作好试验用的培养基。 与培养微生物相关的试验器材需

3、要灭菌，方法为在 121 的条件下高压灭菌20分钟。 与微生物相关的操作需要在无菌操作台上进行。操作之前15分钟打开紫外灯。,样品,富集培养,梯度稀释,涂布培养,划线纯化,斜面保存,采样：土壤样品，梅花形布点采样，取得的用四分法进行取样，将样品放入4 冰箱中保存待用。,富集培养：指从微生物混合群开始,对特定种的数量比例不断增高而引向纯培养的一种培养方法。在适于目标微生物而不适于其他微生物生长的条件下继续培养，则目标微生物将成为优势种而得到纯培养。,样品,富集培养,梯度稀释,涂布培养,划线纯化,斜面保存,以筛选产DMS功能微生物为例： 取2.5g土样置于50ml改良基础盐液体培养基中，28 震荡

4、培养4天。,样品,富集培养,梯度稀释,涂布培养,划线纯化,斜面保存,样品,富集培养,梯度稀释,涂布培养,划线纯化,斜面保存,样品,富集培养,梯度稀释,涂布培养,划线纯化,斜面保存, 将菌种用无菌水制成悬液。 取若干只无菌试管，每只内盛9ml无菌水。 吸取上述菌悬液lml加入第1只含有无菌水的试管内。也就是10-1。 从第1只试管内(10-1)吸取lml注入第2只含有无菌水的试管内，也就是10-2。 用同样方法，制成10-310-8的菌悬液。,样品,富集培养,梯度稀释,涂布培养,划线纯化,斜面保存,划线目的：逐步纯化，直至出现单菌落，获得纯菌株。35次。,样品,富集培养,梯度稀释,涂布培养,划线纯化,斜面保存,样品,富集培养,梯度稀释,涂布培养,划线纯化,斜面保存,样品,富集培养,梯度稀释,涂布培养,划线纯化,斜面保存,将接种菌株的斜面放入4