抑癌p53基因在星形细胞瘤中阳性表达的意义

1、DOC格式论文，方便您的复制修改删减抑癌p53基因在星形细胞瘤中阳性表达的意义(作者：单位：邮编：)作者：薛建荣，秦坤明，陈家康，陆建吾，文超勇【摘要】目的 研究p53在星形细胞瘤发生、增殖过程中的作用及临床意义。方法 采用免疫组织化学法(S拟P法)检测62例资料完 整的星形细胞瘤及10例正常脑组织的p53表达，分析p53蛋白在星 形细胞瘤及正常脑组织中的表达情况。结果正常脑组织中未见 p53蛋白阳性表达，62例星形细胞瘤中共有26例肿瘤p53蛋白表达呈阳 性，二者差异有显著性(X 2=4.872，PV 0.05 )，其中在I级星形细 胞瘤中阳性率为8.33%(1/12)， H级星形细胞瘤中阳

2、性率为 21.05%(4/19)，皿级间变性星形细胞瘤中阳性率为 60%(9/15)，W级 胶质母细胞瘤中阳性率为75%(12/16)。结论 星形细胞瘤中p53蛋白 的表达与肿瘤的级别相关，分化程度越低，p53蛋白阳性表达率越高， 检测p53有助于临床判断预后。【关键词】 星形细胞瘤 抑癌p53基因 免疫组织化学【Abstract Objective To investigate therole of p53 duringthe proccess of the astrocytomaoccurre neeand cellproliferation,soas the clinicalsignif

3、icance.MethodsThepositiveexpressionof p53 proteinwere detected in thespecime ns of 62 cases of astrocytoma by S 拟 P immuno logical tech niq ue,asidewith 10 cases of no rmal bra in tissue. Then theexpressi onof p53prote inin these tissues wereanalysed.Results There were 26 cases positive expression o

4、f p53 protein in 62 astrocytoma specimens and no positiveexpressionof p53 protein in the normal brain tissue. It showed a significant diversity between the two groups(x 2=4.872,P v0.05). The positivepercentage was 8.33%(1/12) in grade Iastrocytomas,21.05%(4/19) in grade II astrocytomas,60%(9/15) in

5、grade III an aplastic astrocytomas(AA) and 75%(12/16) in grade IV glioblastoma multiforme(GBM).C on clusio n The results reveal a correlationbetween p53 proteinexpression andhistopathological typing and grading in astrocytomas. The degree of celldifferentiationis lower, the ratio andintensityof p53

6、expression is obviously higher, which can helpto evalue prog no sis.【Key words astrocytoma ; anti 拟 oncogene p53 ;immun ohistochemistry星形细胞肿瘤是颅内最常见的肿瘤，约占胶质瘤21.2 %51.6 %,因生长迅速，侵袭性强，与正常脑组织分界不清，治疗棘手， 易复发。近年来，随着研究的深入，人们认识到作为重要的抑癌基因 之一的p53基因若发生突变，其基因编码的突变p53蛋白具有促进细 胞无序增殖，演变成肿瘤，并且灭活正常的p53蛋白。本实验采用免 疫组织化学染色

7、技术，检测p53蛋白在星形细胞瘤中的表达。资料和方法1临床资料 收集广西医科大学第一附属医院20042005年临床和病理资料完整的星形细胞瘤 62例，其中男39例，女23例，年 龄1681岁，平均39 13.72岁。肿瘤部位：额叶18例，颞叶13 例，顶叶9例，枕叶5例，颞顶叶7例，小脑5例，脑干1例，脊髓 4例。所有病例术前均未经放疗和化疗，所收集标本均经石蜡包埋处 理，每例石蜡标本病理结果由两名富有经验的神经病理学专家确诊， 分级依据WHO200年中枢神经系统肿瘤分类标准，包括I级星形细胞 瘤12例、H级星形细胞瘤19例，皿级间变性星形细胞瘤 15例， W级胶质母细胞瘤16例。另收集10例

8、因重型颅脑损伤而行颅内减 压手术切除的正常脑组织制成石蜡标本作为阴性对照。所有标本均制 成厚4卩m连续组织切片，置于已经过胶（APES的清洁载玻片上。2. 方法 采用免疫组化染色法（S拟P法），所有试剂均购自 福建迈新生物技术有限公司。切片经烤片，脱蜡，梯度酒精水化，3% H2O2灭活内源性过氧化物酶，磷酸盐缓冲液（PBS冲洗，微波抗原 修复，10%E常山羊血清封闭，湿盒内孵育在同一组织蜡块所切的组 织切片分别加入p53单克隆抗体，PBS代替一抗作为空白对照，PBS 冲洗后滴加生物素标记的二抗工作液 （抗小鼠），均置于湿盒内，37C 孵育30分钟，滴加链霉菌抗生物素拟过氧化物酶（辣根过氧化物酶

9、）； DABS色剂显色，苏木素复染，盐酸酒精分化，氨水中反蓝；封片后 显微镜观察结果。采用试剂公司提供的阳性组织切片作阳性对照，PBS 代替一抗作空白对照。正常脑组织标本切片作为阴性对照。3. 结果判定 细胞内出现棕黄色颗粒即定为阳性，无棕黄色 颗粒为阴性。每张切片选取具有代表性的肿瘤区域在高倍镜下（X 400）随机选择5个以上视野，计数1000个肿瘤细胞，计阳性细胞百 分率，坏死区和血管内皮细胞不被计算在内。4. 统计学处理根据实验资料的性质，对于所得数据采用SPSS for Windows 13.0 统计软件进行x 2检验，Pv 0.05为差异有 统计学意义。结果1.p53在星形细胞瘤和正

10、常脑组织中的表达情况 p53在星形细 胞瘤和正常脑组织的表达率分别为 41.94%和0%经卡方检验，二者 差异有显著性意义（X 2=4.872，Pv 0.05 ），见表1。p53在星形细胞 中的阳性表达见图1。表1 p53在星形细胞瘤和正常脑组织的表达（略）注：X 2=4.872 : PV 0.05图1 p53在星形细胞瘤中的阳性表达（X 400）（略）2.p53在各级别星形细胞瘤中的表达情况 星形细胞瘤级别 不同，p53蛋白阳性表达情况不同，差异有显著性意义（x 2=18.161 , PV 0.01 ）。随着星形细胞瘤级别的提高，阳性表达率增高，见表 2。表2星形细胞瘤中p53蛋白的阳性表达

11、情况（略）注：各级阳性率比较，X 2=18.161，PV 0.01讨论现代分子生物学理论认为，肿瘤的发生主要是由于原癌基因的激 活或抑癌基因的失活，造成细胞增殖周期的失控而形成。p53基因是抑癌基因的一种，定位于人17号染色体短臂上（17p13.1），有11个 外显子和10个内含子，起着防止肿瘤发生的作用，主要生物学功能 是对细胞增殖、凋亡、分化起负性调控作用，通过独立和非独立机制 确保细胞进入有效的死亡程序过程，其他p53基因家族成员也能够促 进肿瘤细胞的程序性凋亡，这一作用与p53基因并行或协调1p53 可由于多种细胞应激而激活，包括DNA损伤、组织缺氧和促有丝分裂 的肿瘤基因。p53基因

12、应对细胞过多增殖而激活，其肿瘤抑制活力来 源于消除存在肿瘤基因表达的细胞2。在各种致癌因子作用下，p53基因发生突变后，失去野生型的各种生物功能，不能保持基因的稳定性，不能够发挥程序性凋亡作 用，从而促进肿瘤的发生和抗药性3。当发生p53基因突变和杂合、 丢失、重排而失活时，常引起肿瘤的发生和发展4。Gil拟Perotin 等研究室管膜下区胶质瘤发现p53缺失提供了该区细胞群全速或快速增殖的优势，这与迅速出现的变异相关，细胞数量和密度增加，当 缺乏p53的诱变刺激时，导致细胞自我更新及分化功能受损的变化， 这可能是成人室管膜下区慢增殖细胞产生胶质瘤的机制5。正常脑发育过程中神经胶原控制途径异常

13、，如神经干细胞分化成星形细胞的 过程，可能导致多型性胶质母细胞瘤形成，这些途径包括生长因子介导的信号转导途径和细胞周期进程的控制过程，例如pl曲CDK4： RB和AR曲!.MDM2p53途径6。p53基因突变后其编码的蛋白构象也 发生了改变，半衰期延长，在细胞中稳定性增加。由于其半衰期延长能 够被免疫组化法检测出来，因而可作为p53基因突变的间接指标。本实验显示p53蛋白阳性表达主要位于细胞核，免疫组织化 学呈棕黄色染色。p53蛋白阳性细胞呈局灶性、分散性不均匀分布。 正常脑组织中无p53蛋白阳性表达，而星形细胞瘤中p53蛋白阳性表 达率为41.94%,二者之间的差异有显著性(x 2=4.87

14、2，Pv 0.05 )， 这进一步证实了 p53在星形细胞瘤的发生中起重要作用。 随着肿瘤分 级的增高，p53蛋白阳性细胞数表达率也增高(x 2=18.161,P v0.01), 这表明突变型的 p53基因的存在与星形细胞瘤的恶性程度有关。 Ganigi等回顾性分析54例年龄从9岁到15岁的部位不同的儿童多型性胶质母细胞瘤，发现p53在53.7%病例中免疫组化反应阳性，其 中主要是位于丘脑（75%）和大脑半球（62.2%）的多型性胶质母细胞瘤， 其次是位于脑干的肿瘤（30%），而在小脑肿瘤不表达 p53蛋白。与 p53阴性表达的肿瘤相比，p53阳性的的肿瘤具有高的Ml期1（Ki拟67） LI

15、（P=0.003 。p53和bcl拟2阳性表达的病人预后差， 并且p53在幕上肿瘤表达更多，认为p53和bcl拟2阳性表达与不良 预后相关7。本实验中p53蛋白在多型性胶质母细胞瘤中的表达率 比Ganigi的结果略高，可能是因为选取病例的年龄段不同，肿瘤部 位不同的原因也不能排除，本实验的病例年龄跨度大，多位于幕上。Deb等认为多型性胶质母细胞瘤生存期（中位数）为 1012月，超 过3年到5年的很少，他研究6例平均生存时间达9年（范围515 年）多型性胶质母细胞瘤，发现其中的5个病例中有4个p53蛋白免 疫表达呈阳性，MI1LI平均为12% （范围6%20%）,认为对于有 少突胶质细胞和（或者

16、）巨细胞组成的年轻的病人，包括有增殖指数 和p53表达的，应该谨慎的评价预后，这部分病人可能有预后的不确 定性8。可见，p53对于星形细胞瘤的肿瘤分级有一定的帮助，可 作为判断星形细胞瘤恶性程度及预后的指标。【参考文献】1 Fridman JS,Lowe SW.Control of apoptosis by p53J .Oncogene,2003, 22（56）: 9030-9040.2 LoweSW.Activation of p53 by oncogenes J .EndocrRelat Cancer,1999,6(1):45-48.3 Afshar GJelluma N,Yang X,e

17、t al. Radiation-induced caspase-8 mediates p53-i ndepe ndent apoptosis in glioma cellsJ .Cancer Res,2006, 66(8):4223-4232.4 Soussi T.Role of p53 gene in human malignant tumous.A major discovery in on cology J .Rev Prat,1993,43(19):2531-2535.5 Gil-Perotin S,Marin-Husstege M,Li J, et al.Lossof p53 in duces cha nges in the behavior of subve ntricular zonecells: implicatio n for the gen esis of glial tumors J .JNeurosci, 2006, 26(4):1107-1116.6 Hulleman E,Helin K.Molecularmechanisms ingliomagenesis J .Adv Cancer Res, 2005, 94: 1-27.7 Ganigi PM,Santosh V,An