非细胞型微生物

1、病毒：病毒：至少含有核酸和蛋白质核酸和蛋白质两种组分 非非 细细 胞胞 型型 生生 物物 亚病毒亚病毒 类病毒：类病毒：只含具有独立侵染独立侵染性的RNA组分 拟病毒：拟病毒：只含不不具有独立侵染独立侵染性的RNA组分 朊病毒：朊病毒：只含单一蛋白质蛋白质组分 说明：*D=DNA（脱氧核糖核酸）；R=RNA（核糖核酸） *有些细菌与立克次氏体对干扰素也敏感。 电镜下的病毒 噬菌体形态 SAS Virus The comparative sizes of several viruses and bacteria 病毒的形态病毒的形态 病毒的对称体制病毒的对称体制 二十面体立体对称的代表二十面体立

2、体对称的代表腺病毒腺病毒 刺突刺突 顶球顶球 五邻体五邻体 六邻体六邻体 螺旋对称的代表螺旋对称的代表烟草花叶病毒（烟草花叶病毒（TMV） RNA 衣壳粒 E.coli 的的T4 噬菌体模式图噬菌体模式图 二、结构及化学组成二、结构及化学组成 核酸核酸 决定病毒遗传、变异和复制决定病毒遗传、变异和复制 蛋白质蛋白质支架结构和抗原成分，保护核酸支架结构和抗原成分，保护核酸 核心核心 衣壳衣壳 包膜包膜 类脂类脂与病毒的宿主专一性和侵入等有关与病毒的宿主专一性和侵入等有关 吸附 病毒的增殖过程病毒的增殖过程 穿入 脱壳 早期蛋白 晚期蛋白 装配 DNA复制 核酸游离 成熟 释放 图例：各种病毒的复

3、制过程 灰质炎v、粘v、腺v、疱疹v、多瘤v 图例：1.吸附 图例：2.穿入 图例：3.脱壳 图例：4.5.合成、装配、释放 1 1. 2 2. 3 3. 4 4. 5 5. 6 6. 不同核酸型的病毒在感染宿主后的不同核酸型的病毒在感染宿主后的mRNA合成方式合成方式 病毒的抵抗力 耐冷怕热 紫外线敏感 氧化剂敏感 包膜病毒对脂溶剂敏感 耐甘油 （一）细胞的类型（一）细胞的类型 （二）细胞培养的方法（二）细胞培养的方法 静置培养：静置培养：实验室常用。细胞悬液装瓶，实验室常用。细胞悬液装瓶， 5%CO2温箱静置培养，细胞沉降并贴附在玻面温箱静置培养，细胞沉降并贴附在玻面 上生长分裂，最后长成

4、单层。上生长分裂，最后长成单层。 旋转培养：旋转培养：大规模生产疫苗。细胞在玻瓶内生大规模生产疫苗。细胞在玻瓶内生 长时，玻瓶不断缓慢旋转，细胞贴附于玻瓶四周，长时，玻瓶不断缓慢旋转，细胞贴附于玻瓶四周， 长成单层。长成单层。 由病毒感染导致的细胞损伤。由病毒感染导致的细胞损伤。CPECPE能在光学显微镜下观察。能在光学显微镜下观察。 细胞圆缩，如痘病毒和呼肠孤病毒等；细胞圆缩，如痘病毒和呼肠孤病毒等； 细胞聚合，如腺病毒；细胞聚合，如腺病毒； 细胞融合形成合胞体，如副粘病毒和疱疹病毒；细胞融合形成合胞体，如副粘病毒和疱疹病毒； 有些病毒能形成包涵体有些病毒能形成包涵体。 病毒引致的杀细胞变化

5、病毒引致的杀细胞变化 （一）细胞病变效应（一）细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)(cytopathic effect,CPE) 正常细胞正常细胞 CPE CPE观察观察 接种接种CCVCCV后出现细胞拉网后出现细胞拉网 的单层的单层A72A72细胞细胞 CPE观察观察 接种犬冠状病毒（接种犬冠状病毒（CCVCCV）后形）后形 成合胞体的的单层成合胞体的的单层A72A72细胞细胞 合胞体（合胞体（syncytia）是病毒感染后导致感染细胞及相邻细胞细胞膜融）是病毒感染后导致感染细胞及相邻细胞细胞膜融 合的产物，表现为若干细胞的相邻细胞膜消失，成为多核巨细胞。合的产物，表现

6、为若干细胞的相邻细胞膜消失，成为多核巨细胞。 能够使半数组织细胞在一定条件下发生细能够使半数组织细胞在一定条件下发生细 胞病变的病毒量。用于判定病毒的毒力。胞病变的病毒量。用于判定病毒的毒力。 50%50%组织细胞感染量（组织细胞感染量（TCIDTCID50 50） ） （二）空斑试验（二）空斑试验 将适当浓度的病毒悬液加入单层细胞培养中，将适当浓度的病毒悬液加入单层细胞培养中， 当病毒吸附细胞后，再覆盖一层融化的琼脂。当病毒吸附细胞后，再覆盖一层融化的琼脂。 病毒在细胞内复制后产生局限性病灶，病灶逐病毒在细胞内复制后产生局限性病灶，病灶逐 渐扩大，肉眼也能看见，此即空斑试验。渐扩大，肉眼也能

7、看见，此即空斑试验。 空斑是由一个感染性病毒粒子复制形成的，类似于空斑是由一个感染性病毒粒子复制形成的，类似于 细菌的菌落，称为细菌的菌落，称为空斑形成单位（空斑形成单位（PFU）。）。病毒悬病毒悬 液中的感染性病毒量以每毫升含有的液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU来表示。来表示。 CELLS 空斑试验的用途：空斑试验的用途： 1. 测定病毒数量测定病毒数量 2. 纯化病毒纯化病毒 单个空斑作悬液，梯度稀释后再作空斑，单个空斑作悬液，梯度稀释后再作空斑， 可获得病毒克隆。可获得病毒克隆。 3. 鉴定病毒鉴定病毒 不同病毒的空斑具有不同的特征。不同病毒的空斑具有不同的特征。 （三）包涵体（三

8、）包涵体（inclusion body) 定义：是某些病毒感染细胞产生的特征性的定义：是某些病毒感染细胞产生的特征性的 形态变化，在普通光学显微镜下可见胞浆或形态变化，在普通光学显微镜下可见胞浆或 胞核内出现的呈嗜酸性或嗜碱性染色、大小胞核内出现的呈嗜酸性或嗜碱性染色、大小 数量不等的圆形或不规则形的团块状结构，数量不等的圆形或不规则形的团块状结构， 称为包涵体。称为包涵体。 狂犬病毒包涵体（狂犬病毒包涵体（Negri body） 亚病毒（亚病毒（subviruses）是一类比病毒更为简单，仅）是一类比病毒更为简单，仅 具有某种核酸不具有蛋白质，或仅具有蛋白质而不具有核具有某种核酸不具有蛋白质

9、，或仅具有蛋白质而不具有核 酸，能够侵染动植物的微小病原体。它包括类病毒、拟病酸，能够侵染动植物的微小病原体。它包括类病毒、拟病 毒、朊病毒。毒、朊病毒。 1981年年Randles等首次在绒毛烟的班驳病毒中分离等首次在绒毛烟的班驳病毒中分离 得到，是二十面体病毒，在病毒的蛋白质衣壳内含得到，是二十面体病毒，在病毒的蛋白质衣壳内含 有有3种种RNA分子分子(RNA-1, RNA-2, RNA-3)； RNA-2和和RNA-3单独存在时不具有侵染性，只有单独存在时不具有侵染性，只有 当当RNA-1与其合在一起时才能感染宿主。具有此特与其合在一起时才能感染宿主。具有此特 性的称其为拟病毒。性的称其

10、为拟病毒。 拟病毒拟病毒（Virusoid） 19821982年，美国的年，美国的PrusinerPrusiner发现引起羊搔痒病的病原是一种发现引起羊搔痒病的病原是一种 蛋白质蛋白质(PrP)(PrP)，称该病原为，称该病原为prionprion，由此荣获，由此荣获19971997年诺贝尔年诺贝尔 生理和医学奖；生理和医学奖； 可引起与哺乳动物脑部相关的疾病，如：可引起与哺乳动物脑部相关的疾病，如： 人的克人的克- -雅氏病（雅氏病（CJD CJD ） ； 羊搔痒病；羊搔痒病； 疯牛病（疯牛病（BSEBSE） 库鲁病（一种震颤病）库鲁病（一种震颤病） 三、朊病毒（三、朊病毒（prion） 构成朊病毒的蛋白质有两种形式。一种是正常的细胞构成朊病毒的蛋白质有两种形式。一种是正常的细胞 型蛋白型蛋白PrPc ，属蛋白酶敏感型；另一种是异常的致病，属蛋白酶敏感型；另一种是异常的致病 型蛋白型蛋