冰冻切片弹性纤维(ELASTIC)马森(MASSON)染色试剂

1、冰冻切片弹性纤维( ELASTIC )马森( MASSON )染色试剂盒产品说明书 (中文版) 主要用途 冰冻切片弹性纤维( ELASTIC )马森( MASSON )染色试剂是一种旨在使用标准化的化学脱蜡方法和伟郝 夫( Verhoeff )苏木素以及三色染料( trichrome )，分析和区分冰冻组织切片中的弹性纤维的权威而经典的 技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。广泛用于结缔组织、肌肉组织和纤维蛋白的 研究等。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。 技术背景 弹性纤维( elastic fiber )，又称为黄色纤维( yellow fiber )，

2、是固有结缔组织( Connective tissue proper)细胞 外基质的成分之一，由平滑肌细胞和成纤维细胞产生弹力蛋白质(elastin)、原纤维蛋白( fibrillin ；FBN ) 等构成。弹性纤维具有可伸展性。 存在于皮肤、 肺、动脉、静脉、弹力软骨、 牙周韧带(periodontal ligament )、 脂肪组织中。弹性纤维缺失导致皮肤松弛症( cutis laxa )、威廉姆斯综合征( Williams Syndrome )等疾病。 基于摩罗利 ( mallory )首次应用三色系统的方法，马森( masson)进行了改良，在三色复合染料体系中， 使用苯胺篮( ani

3、line blue )替代绿篮。同时使用伟郝夫( Verhoeff )苏木素选择性染色弹性纤维，三色复合 染料帮助区别其它包括肌肉、胶原纤维、纤维蛋白( fibrin )等组织成分。马森方法操作复杂，可以细致区 分多种组织成分。 产品内容 清理液( Reagent A) 固着液( Reagent B) 韦格液( Reagent C) 祛色液( Reagent D) 岑克液( Reagent E) 范氏液( Reagent F) 比氏液( Reagent G) 酸性液( Reagent H) 染色液( Reagent I) 修正液( Reagent J) 脱水液 A (Reagent K) 脱水

4、液 B ( Reagent L) 透明液( Reagent M) 产品说明书 200 毫升 10 毫升 100 毫升 20 毫升 100 毫升 10 毫升 10 毫升 10 毫升 10 毫升 10 毫升 10 毫升 10 毫升 10 毫升 1份 保存方式 6月 保存在 4冰箱里，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意安全；有效保证 用户自备 小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器 培养箱或烘箱：用于样品反应孵育 微波炉：用于样品反应孵育处理 中性树脂：用于切片封片 光学显微镜：用于切片染色后观察分析 实验步骤 样品固着处理 1 准备好 5 微米厚的冰冻切片 2 小心加上 200 微升 清理液( Re

5、agent A) 在切片上，铺满整个切片样品表面 3 室温下孵育 2 分钟 4 5 小心移去切片上的 清理液( 小心加上 200 微升 固着液( Reagent A) Reagent B) 在切片上，铺满整个切片样品表面 6 室温下孵育 5 分钟 7 小心移去切片上的 固着液( Reagent B) 8 9 小心加上 200 微升 清理液( 室温下孵育 2 分钟 Reagent A) 在切片上，铺满整个切片样品表面 10小心移去切片上的 清理液( Reagent A) 样本染色处理 1 操作一：标准染色 2 小心加入 1 毫升韦格液( Reagent C)在切片上，铺满整个切片样品表面 放进

6、60恒温培养箱孵育 60 分钟 3 4 5 6 7 小心移去 韦格液( Reagent C) 室温下，小心将切片置入 50 毫升清理液 小心移去切片上的 清理液( Reagent A) 小心加入 200 微升祛色液( Reagent D) 室温下孵育 5 分钟 Reagent A)中孵育 2 分钟 在切片上，铺满整个切片样品表面 小心移去 祛色液( Reagent D) 室温下，小心将切片置入 50 毫升清理液 10小心移去切片上的 清理液( Reagent A) 11小心加入 1 毫升岑克液( Reagent E)在切片上，铺满整个切片样品表面 12放进 60恒温培养箱孵育 60 分钟 8

7、9 Reagent A)中孵育 2 分钟 13小心移去 岑克液( Reagent E) 14室温下，小心将切片置入 50 毫升清理液( Reagent A)中孵育 2 分钟 15小心移去切片上的 清理液( Reagent A) 16小心加入 200 微升范氏液( Reagent F)在切片上，铺满整个切片样品表面 17室温下孵育 30 分钟 18小心移去 范氏液( Reagent F) 19室温下，小心将切片置入 50 毫升清理液 20小心移去切片上的 清理液( Reagent A) 21小心加入 200 微升祛色液( Reagent D) 22室温下孵育 5 分钟 23小心移去 祛色液( R

8、eagent D) 24室温下，小心将切片置入 25小心移去切片上的 清理液 Reagent A)中孵育 2 分钟 在切片上，铺满整个切片样品表面 50 毫升清理液 Reagent A) Reagent A)中孵育 2 分钟 26小心加入 200 微升 比氏液 在切片上，铺满整个切片样品表面 Reagent G ) 可以延长至 15 分钟，增强染色效果 ) 39小心移去切片上的 修正液 40室温下，小心将切片置入 41小心移去切片上的 清理液 小心加上 200 微升脱水液 A(Reagent K)在切片上，铺满整个切片样品表面(注意： Reagent J) 50 毫升清理液( Reagent

9、A)中孵育 2 分钟 Reagent A) 42 选择步骤) 43 44 45 46 47 选择步骤) 选择步骤) 选择步骤) 选择步骤) 选择步骤) 果比氏液(Reagent G)染色过深，建议使用由此步骤开始的选择步骤，并快速操作 A( Reagent K) B( Reagent L ) 在切片上，铺满整个切片样品表面 B( Reagent L ) Reagent M )在切片上，铺满整个切片样品表面 Reagent M ) 小心移去切片上的 脱水液 小心加上 200 微升 脱水液 小心移去切片上的 脱水液 小心加上 200 微升 透明液 小心移去切片上的 透明液 27室温下孵育 5 分钟

10、(注意： 28小心移去 比氏液( Reagent G ) 29小心加入 200 微升清理液( Reagent A)在切片上，铺满整个切片样品表面 30小心移去切片上的 清理液( Reagent A) 31重复实验步骤 29 至 30 二次 32小心加入 200微升酸性液( Reagent H)在切片上，铺满整个切片样品表面(注意：可以孵育15分钟， 增强染色效果) 33小心移去切片上的 酸性液( Reagent H ) 34小心加上 200 微升 染色液( Reagent I) 在切片上，铺满整个切片样品表面 35室温下孵育 5 分钟，避免光照(注意： 可以延长至 15分钟，增强染色效果 )

11、36小心移去切片上的 染色液( Reagent I ) 37小心加上 200 微升 修正液( Reagent J) 在切片上，铺满整个切片样品表面 38室温下孵育 2 分钟 48放上盖玻片或封片(中性树脂) 49即刻在一般光学显微镜下观察： 弹性纤维呈现黑色 细胞核 呈现黑色 细胞质 呈现红色 肌纤维 呈现红色 角蛋白 呈现红色 胶原纤维 呈现蓝色 操作二：热处理染色 1 2 准备 3 个 50 毫升烧杯或小型染色缸，分别加入 50 毫升清理液 岑克液( Reagent E ) 小心放进上述固着处理的切片到 Reagent A)、韦格液( Reagent C) 和 3 4 5 6 7 8 50

12、 毫升韦格液( Reagent C) 放进微波炉( 600 瓦)加热 45 秒 小心移去切片上的 韦格液 室温下，小心将切片置入 小心移去切片上的 清理液 小心加入 200 微升 祛色液 室温下孵育 5 分钟 Reagent C) 50 毫升清理液 Reagent A) Reagent D) 小型染色缸里 Reagent A) 中孵育 2 分钟 在切片上，铺满整个切片样品表面 小心移去 祛色液( Reagent D) 10室温下，小心将切片置入 50 毫升清理液 11小心移去切片上的 清理液( Reagent A) 12小心将切片置入 50 毫升岑克液( Reagent E)小型染色缸里 13

13、放进微波炉( 600 瓦)加热 60 秒 14小心移去 岑克液( Reagent E) 15室温下，小心将切片置入 50 毫升清理液( Reagent A)中孵育 2 分钟 16小心移去切片上的 清理液( Reagent A) 17小心加入 200 微升范氏液( Reagent F)在切片上，铺满整个切片样品表面 18室温下孵育 30 分钟 19小心移去 范氏液( Reagent F) 20室温下，小心将切片置入 50 毫升清理液 21小心移去切片上的 清理液( Reagent A) 22小心加入 200 微升祛色液( Reagent D) 23室温下孵育 5 分钟 24小心移去 祛色液( R

14、eagent D) 25室温下，小心将切片置入 26小心移去切片上的 清理液 27小心加入 200 微升 比氏液 28室温下孵育 5 分钟(注意： 29小心移去 比氏液( Reagent G ) 30小心加入 200 微升清理液( Reagent A)在切片上， 31小心移去切片上的 清理液( Reagent A) 32重复实验步骤 30 至 31 二次 9 50 毫升清理液 Reagent A)中孵育 2 分钟 Reagent A)中孵育 2 分钟 在切片上，铺满整个切片样品表面 Reagent A)中孵育 2 分钟 Reagent A) Reagent G ) 可以延长至 15 分钟，增强

15、染色效果 ) 在切片上，铺满整个切片样品表面 铺满整个切片样品表面 33小心加入 200 微升酸性液( Reagent H)在切片上， 34室温下孵育 10 分钟(注意： 可以延长至 15 分钟， 35小心移去切片上的 酸性液( Reagent H ) 36小心加上 200 微升 染色液( Reagent I) 在切片上， 37室温下孵育 5 分钟，避免光照(注意： 可以延长至 15分钟，增强染色效果 ) 38小心移去切片上的 染色液( Reagent I ) 39小心加上 200 微升 修正液( Reagent J) 在切片上，铺满整个切片样品表面 40室温下孵育 1 分钟 铺满整个切片样品

16、表面 增强染色效果 ) 铺满整个切片样品表面 41小心移去切片上的 修正液 42室温下，小心将切片置入 43小心移去切片上的 清理液 Reagent J) 50 毫升清理液( Reagent A)中孵育 2 分钟 Reagent A) 44 45 选择步骤）小心加上 200 微升脱水液 A（Reagent K）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意： 果比氏液（ Reagent G）染色过深，建议使用由此步骤开始的选择步骤，并快速操作 ） 选择步骤） 46 47 48 选择步骤） 选择步骤） 选择步骤） 小心移去切片上的 脱水液 A（ Reagent K） 小心加上 200 微升脱水液 B（Reagent L）在切片上，铺满整个切片样品表面 小心移去切片上的 脱水液 B（ Reagent L ） 小心加上 200 微升 透明液（ Reagent M ）在切片上，铺满整个切片样品表面 选择步骤） 50放上盖玻片或封片（中性树脂） 51即刻在一般光学显微镜下观察： 49 小心移去切片上的 透明液（ Reagent M ) 弹性纤维呈现黑色