吴乃虎基因工程原理复习提纲.doc

1、第一单元基因的基本槪念和现代概念一. 基因与基因工程1. 概述2. 基因丄程诞生的理论基础a. 40年代确定了遗传信息的携帶者，即基因的分子載体是DNA,而不是蛋白质。b. 50年代揭示 DNA分子的双螺旋结构模型和半保守复制机理，从而解决了基因的自我复制及传递;C. 50年代末和60年代初相继提出广中心法则和操纵子学说并成功地破译了遗传密码，从而阐明了 遗传信息的流向和表达问題。3. 基因工程诞生的技术基础a. DNA分子的切割与连接技术（核酸内切限制酶和DNA连接酶的发现）；b. 测序技术（DNA核酸序列的结构及分析技术）；C.克隆戦体构建技术（质粒载体；I噬菌体戦体;柯斯戦体;单链噬菌体

2、戦体;噬菌粒载体；d. 遗传转化技术（大肠杆菌转化体系）；e. 琼脂糖凝胶电泳技术；f. Southern朵交技术；4. 基因的定义5. 基因的数虽二、基因的命名法1. 通则2. 细菌基因的命名法3. 酵俅基因的命名法4. 线虫基因的命名法5. 果拋基因的命名法6. 植物基因的命名法7. 脊椎动物基因的命名法8. 人类基因的命名法三、基因的结构1. 基因的组成部分a. 编码区(coding region);b非编码区(noncoding region);c. 启动区(promoter region);d. 终止区 9terminator).2. 原核基因定义原核基因的组成：启动区序列区转录区序

3、列区(5 - UTR； CDNA序列区编码区；3 -UTR)；终止序列区3. 真核基因定义a. 真核基因特征：真孩基I大1编码区中往往含有非編码序列的内含子(intron);真核基因是单顺反子，編码的基因产物；成熟mRNA分子的5-端有一个帽的结构，3 -端有一段poly(A)尾巴。b. 真核基因的组成：启动子序列区终止子序列区转录序列区C.真核基因初级转录木的组成：5 -UTR序列区表达子(exon)内含子(intron)3UTR序列区d.真核基因成熟mRNA的结构组成：5端帽的结构；5 UTR;編码序列区；3 UTR；3 端 poly(A)尾巴。四、基因的类型1. 根据拷贝数分类a. 单拷

4、贝基因b. 多拷贝基因2. 根据表达特性分类a. 组成型基I大l(Constitutive gene)又叫看家基閃(Housekeeping gene)b. 诱导空基因(Inducible gene)3 根据产物类型分类a. 结构基因(Structural gene)b. 调节基因(Regulator gene)4. 根据实验用途分类a. 选择基因(Selectable gene)b. 标记基因(Marker gene)c. 报告基W(Reporter gene)5根据排列组合特性分类a. 基因家族(Gene family)b. 基因簇(Gene cluster)c. 弧独基W(orphons

5、)6 根据细胞类型分类a. 原核基W(Prokaryotic gene)b.真核基因(Eukaryotic gene)7.根据结构特点分类a. 断裂基因(Split gene)b. 移动基因(Movable gene)c. 假基W(Pseudogene)&根据序列重复特性分类a.重叠基W(overlapping gene)b嵌套基因(Nested gene)c. 重复基因(Repeated gene)9. 根据同源性分类a. 同源基W(Honologouse gene)b. 共生同源基因(Paralogous gene)c. 直向同源基因(orthologous gene)d. 孤独基因家族(

6、orphon family)10 根据碱基突变分类a. 野生型基I大(Wild type gene)b. 突变型基W(Mutant type gene)五、基閃图与基閃作图1. 基因图(gene map)包括：a.遗传图(genetic map)厘摩(centimorganzcM)遗传图距或是染色体上基因间的距离以摩尔根氓位表示(morgan unit),摩尔根氓位等于100%的重组 率(交换值)。1凰摩(cM)则等于1%的重组率。人类基因组lcM相、|于1000Kb拟南芥基因组1CM相当于290Kb蕃茄基因组1CM相、勺于750Kb小麦基因组1CM相、|于3500Kbb. 物理图(physi

7、cal map)c. 限制图(restriction map)2. 基因作图(gene maping)六、DNA非编码序列的功能1 中心法则质疑2. RNA的功能a假基因的功能b.反义RNA的功能C. RNA的干扰作用d. 微 RNA(micro RNA)的功能e. 孩糖开关3. 表观遗传学a. 遗传印记(Genetic imprinting)b. 遗传印记与遗传性疾病表观遗传信息层(Epigenetic lager of information)生命有机体遗传信息的第三层次，它贮藏在隔绕D NA分子周鬧并与DNA分子结合的蛋白质及化学物质中.表观遗传信息层可能比RNA县基因更为重要。C.甲基

8、化作用与遗传印记d. 甲基化药物与癌症治疗七. 基快I扩増1. 基因増加与基因减少2. 基因扩増的五种情况：a. PCR基因扩增b. 克隆基因扩增c环境压力基因扩増d程序基因扩增(Programmed gene amplipication)e. 生物进化基I大I扩增A.基因表达1. 正义链与反义链2. 基因表达定义：基因通过DNA的转录和RNA的转译等过程，将其遗传信息转变成贵白质(RNA转录木)的过程叫做 基因表达。3. 基因表达产物a. 有些基I大1如tRNA基因利rRNA基I大限终表达产物是RNAb. 大部分基因的表达的昴终产物是贵白质4. 基因表达的时空特界性5. 基因表达活性的调控九

9、、基閃克隆与基因工程1. 克隆的词义2. 基因克隆与DNA克隆3. 基因克隆的方法a. 互补作用基因克隆b. CDNA克隆C基因组DNA克隆d. 基因定位克隆4. 基因克隆与基閃分离笫二单元DNA分子的体外切割与重组一、基因克隆涉及的一些重要的酶1. 核酸酚(Nuclease)a. 核酸外切酹b. 核酸内切酶2. 貳白 (Proteinase)3. 基伙I：程中涉及的主要的酶a. 2型核酸内切限制的b. DNA 连接酹(Ligase)c. DNA聚合酶d. 反转录酶(Reverse transcriptase)e. 女核昔酸激酚(Polynucteotide kinase)f. 末端转移酶(T

10、erminal transferase)g. 核酸外切轉(Exonuclease)h. 碱性磷酸(Alealine phosphatase)小牛肠碱性磷酸酚(CIP)细菌碱性磷酸酶(BAP)L Tag DNA 聚合酶(Tag DNA polymerase)二、核酸内切限制曲与DNA分子的体外切割1. 寄主控制的限制与修饰现彖2. 核酸内切限制酚及其类型：1型核酸内切限制晦2型核酸内切限制酶3型核酸内切限制晦a. 识别序列b. 粘性末端(Cohesive ends)c. 平末端(Blunt ends 或 flush ends)平末端连接方法：T4 DNA连接酚连接法；同聚物加尾法；衔接物(Lin

11、ker)连接法；DNA接头(Adapter)连接法。4. 同裂酶与同尾酶a. 同裂酶(Isoschizomers)具有同样的识别位点，产生同样的粘性末端，但是从不同的细菌中分离出來的类核酸内切限制酶。b 同尾 (Isocaudamers)一组來源不同、识别序列各片，但能够切割形成相同的粘性末端的核酸内切限制酚。5. 界裂 fift(Neoschizomer)这是一组來源不同.但具有相同的识别序列和不同的切点(cleave point)的核酸内切限制酶。6. 彩响核酸内切限制關活性的因素三、DNA连接酶与DNA分子的体外连接1. DNA 连接酶(DNA ligase)简称连接酶，是抬利用ATP分

12、子中的卜磷酸基团为能虽，催化在两条并排DNA链的5 -磷酸基团和3 逻基之间或是双链DNA单链断裂位迓形成一个磷酸二酯键，而使两个DNA片段共价连接起來的一种胡。2. DNA分子连接的条件：a. 3端具有一个游离的疑基(-OH)；b. 另一条DNA链的5, 末端具有一个磷酸基团(-P)；C.连接反应需ATP的参加。3. 影响DNA分子体外连接反应的因素:ATP浓度；连接酶浓度；反应时间；反应温度；插入片段与戦体分子间的摩尔比值。第三单元：基因克隆的载体一、质粒載体1. 质粒载体定义2. 质粒DNA分子的构型及其在凝胶电泳中泳中的位宜a. SC构型（双链.共价、闭合的超盘旋DNA）-走在凝胶最前

13、血；b. OC构型（单链断裂的开环DNA）走在凝胶垠后面；C. L构型（双链断裂呈线型DNA）-走在凝胶的中间位宜。3. 质粒载体的组成：a. 具有复制区或复制伙I子（replicator）b. 具有1-2个抗菌素抗性基因；c具有若干种限制酶的单一识别位点；d具有较小的分子虽:和较岛的拷贝数。4. 质n DNA的自我转移5. 质R DNA 的迁移作用（mobilization）迁移作用的分子机理6. 质粒的拷贝数7. 质粒的不亲和性8. 质U DNA的复制与拷贝数的控制质粒复制控制的分子模型：抑制蛋白稀释模型；自体阻遏蛋白质模型9. 严紧型质粒与松驰型质粒10. 质粒戦体的类型：a. 插入失活

14、型载体b. 表达型质粒载休；c. 正选择质粒载体11重要的质粒载体：PBR322质粒载体：pUC质粒载体。二、噬菌体载体1. 噬菌体的一般生物学问題；a. 烈性噬菌体与温和噬菌休；b. 混浊型噬菌斑和淸亮型噬菌班；c 噬菌体的溶源化与溶源性细菌；d 噬菌体的整合作用与原噬菌体；e. 超感染免疫2. I噬菌体载体a. cos位点(粘性末端位点)b. I噬菌休载体构建原理；c. 插入型I噬菌体载体与替换型I噬菌体戦体；d. 具有内删除作用的I噬菌体載体；I zap a体的结构：含有一个发生内删除作用的pBluescript噬菌粒的DNA区段；在pBluescript的两侧含有fx的起始子和终止子(

15、T);在pBluescript的内部具有LacZ基I大;在LacZ基因内部具有两端分别为T3和T7噬菌体启动子和多克隆位点区(MCS)；e. 内删除作用的原理3. I重组体DNA分子的休外包装a. 体外包装原理b. 包装限制C. I噬菌体载体的克隆能力（23Kb理论值）三. 柯斯质粒载体1. 柯斯质粒载体的定义2. 柯斯质粒载体的组成部分：a.质粒的复制起点；b带有1-2个抗菌素抗性基因；c來自I噬菌体DNA的cos位点；d. 來自质粒的相十数址的核酸内切限制臨单一识别位点3. 柯斯质粒载休的特点：a. 來自I噬菌体的特点，体外包装后可高效转导感受态细胞.导入细胞后可重新坏化.无法进入溶 菌周

16、期.因此无法形成子代噬菌体b. 具有质粒载体的特点，带有质粒复制子，可像质粒一样复制，在有氟霉素下扩増;具有抗生素抗性 基因因此可像质粒载体一样筛选重组体。C.具有商容虽的克隆能力（31-45Kb）四、单链噬菌体载体1. M13*i链噬菌体的一般生物学特性2M13克隆体系列组成：a. M13克隆载体；b. M13的寄主菌株3. X-gal显色反应原理4. 顺反子内互补作用（/互补作用）5. Mi3 a体系列的优点：a.制备的链DNA序列b.重组子可用组织化学检测c. LacZ基因上有一段多克隆位点序列区(MCS)d. 可定向克隆五、噬菌体展示载体1. 构建噬菌体展示載体的原埋2. 丝状噬菌体展

17、示载体3. 噬菌体表面展示文库六. 噬菌粒载休1. 噬菌粒載体的定义2. 噬菌粒載体的组成：來自质粒部分：a.來自ColEl的复制起点(ori);b.抗菌素抗性标记；來自噬菌体部分：a. f!单链噬菌体的复制起点(ori);b.与形态发生有关的DNA序列。3. 噬菌粒载体的优点：a.可像质粒一样复制.产生双链DNA；b.复制方向可改变，形成单链DNA C.不必亚克隆.可直接用于测序；d可产生大片段的外源讯链DNA。4. pBluescript 噬菌粒a. 体外转录载体定义；b. pBluescript 结构特点c. pBluescript噬菌粒载体的组成：怡.具ColEl质粒的复制起点(ori

18、)可产生双链DNA;*b.具Amp抗性基I虬提供转化子筛选;*C.具PUC19的銳克隆位点(MCS).克隆外源基坎I；*d.在MCS两端具有T3利T7启动子，抬导外源基因录*e.具LacZ基I虬可组织化学选择重组子；*f.具M13单链噬菌休的复制起点，可产生单链DNA亚克隆可进行测序第四单元基因克隆与基因分离一、基因克隆1. 基因克隆的概念a. 基因克隆与DNA克隆b. 基因克隆的基木过程C.基因文库的类型(基因组文库与CDNA文库)2. 基因克隆与分离的实验策略a. 物理策略b. 生物学策略c. 克隆样品的选择：从蛋白质出发；从mRNA出发；从DNA大分子出发。3. 基因文库库容测算4. C

19、DNA基因克隆d概述e. CDNA文库的构建：第一步：分离细胞总RNA.根据poly(A)尾巴用oliga(dT)柱分离纯化出mRNA;第二步：用适、勺的引物.通常用oliga(dT)和反转录的合成第一链cDNA;第三步：双链CDNA的获得:用RNaseH鮒降解mRNA-cDNA分子中的mRNA链，再用第一链为模板合 成第二链CDNA.第四步：与适、勺载体重组.将重组体分子导入大肠杆菌寄主细胞増殖即构成CDNA文库。fCDNA克隆的优越性：*a.以mRNA出发，对一些在増殖过程中不经过DNA中间过程的RNA病话，持别适用；*b.从mRNA出发.其复杂度要比蛋白质低10-100倍；*c假阳性比例

20、低。每一个克隆都含有一个mRNA;*d.具有特殊用途：克隆的真核基I大I在原核细胞中表达；*e.测定基因核昔酸序列;发育调节基因表达特性分析.即时空特界性。d全长CDNA的合成5. 基因组DNA克隆a. CDNA克隆的局限性b. 基因组DNA克隆的过程：*a分离基因组DNA；*b 体外切割片段化（超声波处理;机械切割;限制酶局部消化）与适、勺载体重组；*C.转化大肠杆菌细胞增殖即构成基因组文库。C.基因组文库的优越性：*a.基因类型的全面性.一个完整的基因组文库中，该生物有机体的基因都有一个克隆；*b.基因结构的完整性，包括启动子、表达子、间隔子、终止子等所有结构；*c基因的恒定性，即不受材料

21、组织部位和发育阶的影响；*d.基因的功能性，适于研究基因的表达与调控。6. 基因的定位克隆（用于分离编码产物未知基坎I的方法之一）a.定位克隆的程序和条件b.分子标记RFLP在定位克隆中的应用C. RFLP作图过程d. 染色体步移e. 大尺度物理图谱的构建二、目的基1*1的分离1. 分离克隆基因的若T方法：a. 应用孩酸探针分离克隆的目的基因b. 应用差别杂交法和扣除杂交法分离克隆的基因C. PCR技术.dmRNA差别显示技术(产物未知基I大I分离方法)e. 表达文库技术f酵母双朵交体系(Y2H.产物末未知基因分离方法)g. 定位克隆分离产物未知基因h. DNA标签法分离产物末未知基因L应用D

22、NA芯片技术2. 应用mRNA差别显示技术分离产物末未知基I大Ia. mRNA差别显示的原理：基木原理是，以女细胞(或但组织)的总RNA反转录成的CDNA群体为模板，通过合理设汁的5端与3 端引物的配对组合.将细胞(或组织)中表达的约15%的基因片段扩增，直接显示在DNA测序胶上.从而 找出一对细胞或组织中表达有差异的CDNA片段。*a.商等真核生物的mRNA3端大筝具有poly(A)尾巴故可用oligo(dT)作引物，反转录成cDNA;*b根据mRNA poly(A)前2个碱基可把所有的mRNA分成12类群，如按一个碱基可归为3大类群， 3端作锚定引物也就为3大类群；叱根据数理统讣，5端的随

23、机引物需80种.因此80X3=240组合对;就有可能分离到目的基I大1。基因差界表达(differential expression)：在生物个体发育的不同阶段，或在不同组织或细胞中发生的. 不同基因按时间、空间进行有序表达的方式，叫做基因差界表达。b. mRNA差别显示技术的优点和缺点3. 应用DNA标签法分离产物未知的基因原理：DNA标签法(DNA tagging).是根据DNA的插入作用发展岀來的。其原理：a、勺一段己知的特定DNA序列插入到基閃组中目的基因的内部、或附近，便会诱发该基因发生突变. 并昴终导致表型变化.形成突变体(突变株)b. 以特定的己知序列为DNA朵交的分子探针.从突

24、变株的基因组DNA文库中筛选到突变的基因。C.利用标签序列以外的突变基閃序列为探针.再从野生型基因组DNA文库中克隆出野生型的目的基 因。类型：d转位子标签法：可分为一元转位子标签法(one-element tagging systebm)二元转位子标签法仃wo- element tagging system)e. T-DNA标签法4 酵母双朵交体系(Y2H)分离产物未知的基因a. 转录因子定义b. 转录因子的结构：(a) DNA结构域(DNA-BD)(b)转录调节域：(转录激活域(AD)；转录抑制域)(C)核定位信号区(d)寡聚化位点C.酵俅半乳糖昔臨基因的转录WY-GAL4d. E.col

25、i-Yeast穿梭质粒(定义)穿梭质粒(Shuttle vetor)：是一类人工构建的具有两种不同的复制起点和选择记号，可在两种不同的 寄主细胞中进行复制和存留的质粒载体。这种质粒載体可以携帶外源DNA在原核细胞和真核细胞往返穿 梭。e 酵母双杂交体系(a)构建两种穿梭质粒載体DNA-BD质粒载体(具有色氮酸编码基因Trp)产生第一种杂种蛋白AD质粒载休(具有亮氮酸编码基I大1 Leu)产生第二种杂种蛋白(b)酵母双杂交休系的寄主菌株特点：*a.丧失了表达内源GAL4转录因子的能力；*b具有LacZ报告基因；*c. trpl和Ier2转化标记，在缺少色宓酸和亮抵酸的培养基中无法生长。5. 酵母

26、单朵交体系(Y1H)原理：酵母单杂交体系是一种体内分析系统，用于分离与顺式作用调控元件结合的特定蛋白质之編码许女真核转录因子都是结构上可以分开、功能上相互独立的两个结构域组成C用一种未知貳白质代替BD和AD形成融合蛋白质.如果此未知贵白质能够与调控序列结合.它就可以 携带AD釜近起始复合物，从而起动基脚转录。通过筛选CDNA-AD表达文库，可以分离与鉴定新的DNA 结合蛋白质。6. 酵僚三杂交体系(Y3H)第五单元新基因的功能鉴定一、新基伏I功能鉴定的技术1. 转基因技术与基因过表达技术：a.转正义基因(目的基I大1)b.转基因(目的基因)的过表达。2基因剔除技术(基因打靶)3. RNA F扰

27、技术与新基伙I功能鉴定4. 基因序列同源比对技术，验证新基因的功能5. 茨白质产物的结构与功能的检测6基因定点突变途径探索新基因的功能7. 报告基因技术8. 反义RNA技9. 化学遗传学方法；10. 遗传互补法11基因表达系列分析法12噬菌体表面展示技术与酵母双杂交技术二、同源性分析与基因功能鉴定1. 序列同源性与相似性.一致性及保守性概念2. 基因序列同源性比对技术原理a. DNA分子的核昔酸序列或是蛋白质多.肽链的抵基酸序列，具有商度相似性或显音相似性的基因或蛋 白质.往往是同源的Cb. 亲缘关系密切的或相关的基因.具有相似的(或相近的)核昔酸序列结构.可以通过机算机的检索已 经测序并己知

28、其生物学功能的其它物种的和关基因(同源基I大I)并根据核昔酸序列比对分析所得出的相似性 程度，推断待鉴定的新基因之可能的生物学功能。c. 同源基因的类型：直向同源W(orthologous gene)共生同源基因(Paralogous gene)三、基因失活与新基因功能鉴定1. 同源重组与基因失活a同源重组(Homologous recombination)：是抬两条同源DNA序列之间发生的遗传信息的重组或交 换的过程。.b.主要技术：*a.醇酵母缺失盒技术；*b基因剔除技术c酵母缺失盒技术与新基閃功能鉴定，其核心是使用一种特殊的分子结构即酵母缺失盒通过同源重组 途径使待鉴定中的目的基因失活。

29、d. 酵僚缺失盒的分子结构：*a 中央部分是一种抗菌素抗性基因的编码序列；*b.在此基因的两侧各有一个核酸内切限酶的识别位点(R1和R2);*c在缺失盒的5端.位于限制位点R1和抗菌素抗性基因之间.还有一个酵母启动子。2. 基因剔除(基伙I打耙)与新基因功能鉴定a. 基因剔除技术主要应用于哺乳动物，其原埋也是利用同源重组使基因失活。b. 基因打耙(Gene targeting)定义：使外源基因定点地整合到核基因组上的一种特殊的基因匸程技术。 也叫做基伙I定点重组或基因剔除C.基因打靶的分子基础：通过转染的细胞中发生的外源打靶基因与核基I刘组上的目标基因之间的DNA 同源重组事件，使外源打靶基因

30、定点地整合到核基因组的特定位迓上，从而达到改变细胞遗传特性的目的。d. 基因打耙的类型：(a)插入型基因打耙；(b)取代型基因打靶e. 基因打把载体(Gene targetion vector)f基因打耙的过程g.基因打耙的应用：(a)新基因功能鉴定；(b) 提高基因表达效率；(c) 遗遗传挨病的基因治疗四、转译抑制与新基因功能鉴定1. RNA 干扰(RNA interference, RNAi)槪念：a. 近年來研处表明，一些小分子塑的外源双链RNA(dsRNA)、”其导入寄主细胞之后，便可促进与其同 源的内源mRNA发生特异性的降解作用.从而高效特界地阻断体内相应基因的表达活性，在细胞内发

31、生奠 基因剔除作用。b. 这种RNA水平的基因抑制.是生物界普遍存在的RNA水平调控基大I表达的一种方式，提供J一种 特异性失活功能基因的方法。C.研究表明.RNAi广泛存在于真菌、拟南芥.水媳、斑马鱼等大多数真核生物中.是生物体内抵御外 来來感染们的重要保护机理。d. RNAi的应用：新基坎I的功能鉴定;有望在疾病防御和治疗的新药开发上发挥重要的作用2. 有关的名词术语和略语dsRNA：双链 RNA(double stranded RNA)siRNA：小分子址丁扰 RNA (small interference RNA)RISC： RNA 诱导的沉默复合物(RNA induced 引lenc

32、ion complrx)RdRP：依赖于 RNA 的 RNA 聚合(RNA-dependent RNA polymerase)PIGS：转录后基因沉默(Post-transcripotional gene 引lencing)TIGS：转基因诱导的基因沉默(Transgene-induced gene 引lencing)VIGS：橋港诱导的基伙I沉默(Virus-induced gene 引lencing)Dicer：切丁輙 是一种RNasell 1样的核酸内切(Rnaselll-Like)c能把dsRNA切割成21-25bp的 小分子址的干扰RNA,即引RNA,但这是需要能量ATP的过程。3.

33、 RNAi的分子机理研究a. 依赖于RdRP的RNAI途径b. 不依赖于RdRP的RNAi途径c. 关于Dicer和Slicer酶功能的作用机理d. RNAi 的触发剂(Triggers of RNA silencing)4. SiRNA的來源：a.由人工导入细胞的dsRNA经Dicer酶切割成的siRNAb由浸染的RNA病毒复制的dsRNA经Dicer酶切割成的siRNAc由脂质体运点的siRNAd. 由小分子RNA前休(MicroRNAprecusor)等产生的dsRNA经Dicer酶切割e. ill psiRNA *戈体持续合成的siRNAf. psiRNA克隆载体g. RNAi的新基因

34、功能鉴定的优越性*a.效率商，无需筛选突变体因此匸作址小；*b.具有耙向性根据psiRNA载体插入序列的方向断定被失活的目的基因的功能；*C具有多重失活功能，疏可特异地使某一特定基因沉默.也可同时使该基因家族的女个成员沉默；*d. RNAi技术不会导致致死效应，便于研究植物生长发育的相关基閃的表达活性与功能。五、基因表达系列分析与新基因功能鉴定1 基伙I的差界表达(Differntial expression of gene)a. 看家基W(House-keeping gene)b. 发育调节基因(Developmental regulated gene)基因的差界表达2. 基因表达系列分析法

35、的定义基因表达系列分析法（Serial analysis of gene expression）简称SAGE.它是一种基于2型孩酸内切限 制醐和3型核酸内切限制酶.对于CDNA分子联合切割反应的基囲表达分析法。此法可快速.有效、系统、 全而地检测某种特定组织或细胞中基快I表达的状况.适于对大虽基因的差界表达状况进行系统的分析。SAGE技术是使用惟一的序列标签去鉴定每一种mRNA分子。可同时检测许多种基I大I在同一时空条件 下是否表达及其表达水平，而还可比较不同组织不同条件下.基閃表达的差界。3原理基因表达系列分析法的基木原理是，CDNA分子中同一种核酸内切限制酶位点旁侧的9个核昔酸序列. 可以代表一种CDNA分子的序列结构特征。根据这种长度为9bp的核昔酸序列.能够区分基因组中的95% 的基伙L （49=262144种mRNA分子）所以这一段序列可以作为持定基閃的标签，持称之为SAGE标签。应用特定的技术程序，能够制备某一组织中各种CDNA3端序列结构和丰度特征的S