血浆脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验

1、精选ppt1 第五章第五章 血浆脂蛋白代谢紊乱的血浆脂蛋白代谢紊乱的 生物化学检验生物化学检验 精选ppt2 KEY POINTS Classification and functions of the main lipids, lipoproteins and apolipoproteins in the blood. Characteristics and functions of the main receptors, lipid-binding proteins and enzymes related to the lipoprotein metabolism. Definition

2、and types of hyperlipidemia. Relationship between the abnormity of lipoprotein metabolism and atherosclerosis. Evaluation, comparison and clinical significance of lipid determinations. 精选ppt3 Major Objectives 了解了解脂蛋白代谢紊乱和动脉粥样硬化的关系。脂蛋白代谢紊乱和动脉粥样硬化的关系。 熟悉熟悉脂蛋白的特征、脂代谢有关酶类的特点和生脂蛋白的特征、脂代谢有关酶类的特点和生 理功能、高脂蛋

3、白血症分型及其特征。理功能、高脂蛋白血症分型及其特征。 掌握掌握血浆脂类组成及脂蛋白的分类、主要载脂蛋血浆脂类组成及脂蛋白的分类、主要载脂蛋 白和脂蛋白受体的特征与功能、血浆脂蛋白代谢白和脂蛋白受体的特征与功能、血浆脂蛋白代谢 紊乱的生物化学检验。紊乱的生物化学检验。 重点重点血浆脂蛋白的分类和特征、血浆脂蛋白代谢血浆脂蛋白的分类和特征、血浆脂蛋白代谢 紊乱的生物化学检验。紊乱的生物化学检验。 难点难点血浆载脂蛋白和脂蛋白受体的特征与功能。血浆载脂蛋白和脂蛋白受体的特征与功能。 精选ppt4 Brief Contents 第一节第一节 血浆脂蛋白及其代谢血浆脂蛋白及其代谢 第二节第二节 脂蛋白

4、代谢紊乱脂蛋白代谢紊乱 第三节第三节 脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验 精选ppt5 第一节第一节 血浆脂蛋白及其代谢血浆脂蛋白及其代谢 一、血浆脂蛋白的分类一、血浆脂蛋白的分类 二、血浆脂蛋白的组成和特征二、血浆脂蛋白的组成和特征 三、载脂蛋白的组成和特征三、载脂蛋白的组成和特征 四、脂蛋白受体和脂蛋白结合蛋白四、脂蛋白受体和脂蛋白结合蛋白 五、血浆脂蛋白的代谢五、血浆脂蛋白的代谢 精选ppt6 一、血浆脂蛋白的分类一、血浆脂蛋白的分类 血浆脂质总量为血浆脂质总量为4.07.0g/L。包括：包括： 1. 胆固醇胆固醇 (total cholesterol，TC) 游离

5、胆固醇游离胆固醇 (free cholesterol，FC) 胆固醇酯胆固醇酯 (cholesterol ester，CE) 2. 磷磷 脂脂 (Phospholipid，PL) 3. 甘油三酯甘油三酯 (triacylglycerol/triglyceride，TG) 4. 游离脂肪酸游离脂肪酸 (free fatty acid，FFA) 精选ppt7 血浆脂蛋白结构血浆脂蛋白结构 脂蛋白一般以不溶于脂蛋白一般以不溶于 水的水的TG和和CE为核心，为核心， 表面覆盖有少量蛋白表面覆盖有少量蛋白 质和极性的质和极性的PL、FFA， 从而使脂蛋白颗粒能从而使脂蛋白颗粒能 稳定地分散在血浆中。稳定

6、地分散在血浆中。 精选ppt8 ( (一一) ) 超速离心法超速离心法 根据各种脂蛋白在一定密度的介质中进行离心时，因漂浮根据各种脂蛋白在一定密度的介质中进行离心时，因漂浮 速率不同而进行分离的方法。速率不同而进行分离的方法。 乳糜微粒乳糜微粒(chylomicron，CM) 极低密度脂蛋白极低密度脂蛋白 (very low density lipoprotein，VLDL) 低密度脂蛋白低密度脂蛋白 (low density lipoprotein，LDL) 高密度脂蛋白高密度脂蛋白 (high density lipoprotein，HDL) 精选ppt9 （二）电泳法（二）电泳法 根据血

7、浆脂蛋白表面根据血浆脂蛋白表面 电荷量大小不同，在电荷量大小不同，在 电场中，其迁移速率电场中，其迁移速率 也不同，分为：也不同，分为： 乳糜微粒乳糜微粒 -脂蛋白脂蛋白 前前-脂蛋白脂蛋白 -脂蛋白脂蛋白 精选ppt10 超速离心法与电泳法分离血浆脂蛋白的超速离心法与电泳法分离血浆脂蛋白的 相应关系相应关系 精选ppt11 二、血浆脂蛋白的组成和特征二、血浆脂蛋白的组成和特征 精选ppt12 三、载脂蛋白的组成和特征三、载脂蛋白的组成和特征 脂蛋白中的蛋白部分称为脂蛋白中的蛋白部分称为载脂蛋白载脂蛋白 ( (apolipoproteinapolipoprotein，apoproteinapo

8、protein，Apo)Apo) 。 载脂蛋白在脂蛋白代谢中的载脂蛋白在脂蛋白代谢中的生理功能生理功能： （1）构成并稳定脂蛋白的结构。构成并稳定脂蛋白的结构。 （2）修饰并影响与脂蛋白代谢有关的酶的活性。）修饰并影响与脂蛋白代谢有关的酶的活性。 （3）作为脂蛋白受体的配体，参与脂蛋白与细）作为脂蛋白受体的配体，参与脂蛋白与细 胞表面脂蛋白受体的结合及其代谢过程。胞表面脂蛋白受体的结合及其代谢过程。 精选ppt13 载脂蛋白的特征及生理功能载脂蛋白的特征及生理功能 精选ppt14 四、脂蛋白受体和脂蛋白结合蛋白四、脂蛋白受体和脂蛋白结合蛋白 Brown和和Goldstein于于1974年研究家

9、族性高胆固醇血年研究家族性高胆固醇血 症症(familial hypercholesterolemia，FH)患者代谢缺患者代谢缺 陷时，在成纤维细胞膜上发现了陷时，在成纤维细胞膜上发现了LDL受体受体(LDL receptor，LDLR)的存在。以后相继发现有的存在。以后相继发现有VLDL 受体受体和和清道夫受体等。清道夫受体等。 精选ppt15 （一）低密度脂蛋白受体（一）低密度脂蛋白受体受体结构受体结构 由由836个氨基个氨基 酸残基组成酸残基组成 36面体结构面体结构 蛋白，分子蛋白，分子 量约量约115kD， 由五种不同由五种不同 的区域构成的区域构成 精选ppt16 LDL受体基因

10、结构及功能受体基因结构及功能 人人LDL受体基因长度受体基因长度45kD，由由18个外显子和个外显子和17个内含个内含 子组成子组成。 受体亲和性受体亲和性 含含ApoB100的脂蛋白可与的脂蛋白可与LDL受体以高亲受体以高亲 和力结合。和力结合。 LDL受体广泛分布于肝、动脉壁平滑肌细胞、肾上腺受体广泛分布于肝、动脉壁平滑肌细胞、肾上腺 皮质细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞、单核细胞和巨皮质细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞、单核细胞和巨 噬细胞噬细胞 。 精选ppt17 LDL受体途径受体途径 （LDL receptor pathway） 若胞内若胞内游离胆固醇游离胆固醇浓度升高，浓度升高， 则：则

11、： 抑制抑制HMGCoA还原酶，以还原酶，以 减少自身的胆固醇合成；减少自身的胆固醇合成； 抑制抑制LDL受体基因的表达，受体基因的表达， 减少减少LDL受体的合成，从而受体的合成，从而 减少减少LDL的摄取；的摄取； 激活内质网激活内质网ACAT，使游使游 离胆固醇在胞质内酯化成胆离胆固醇在胞质内酯化成胆 固醇酯贮存，以供细胞的需固醇酯贮存，以供细胞的需 要。要。 精选ppt18 （二）极低密度脂蛋白受体 结构与结构与LDL受体类似。受体类似。 仅对含仅对含ApoE的脂蛋白的脂蛋白 VLDL、VLDL残粒有高残粒有高 亲和性结合，对亲和性结合，对LDL为显为显 著的低亲和性。著的低亲和性。

12、在肝内几乎未发现，广泛在肝内几乎未发现，广泛 分布在代谢活跃的心肌，分布在代谢活跃的心肌， 骨骼肌、脂肪组织等细胞骨骼肌、脂肪组织等细胞. VLDL受体不受细胞内胆受体不受细胞内胆 固醇负反馈抑制。固醇负反馈抑制。 精选ppt19 （三）清道夫受体（三）清道夫受体 (scavenger receptor，SR) 清道夫受体结构清道夫受体结构 SRs分为分为SR-A、SR-B、SR-C、 SR-D、SR-E和和SRF六大类。六大类。 清道夫受体配体清道夫受体配体 均为多阴离子化合物均为多阴离子化合物。 乙酰化或氧化等修饰的乙酰化或氧化等修饰的LDL； 多聚次黄嘌呤核苷酸，多聚多聚次黄嘌呤核苷酸，

13、多聚 鸟嘌呤核苷酸；鸟嘌呤核苷酸； 多糖如硫酸右旋糖酐；多糖如硫酸右旋糖酐； 细菌脂多糖，如内毒素等。细菌脂多糖，如内毒素等。 清道夫受体功能清道夫受体功能 1.巨噬细胞巨噬细胞通过清道夫受体清除通过清道夫受体清除 细胞外液中的修饰细胞外液中的修饰LDL，尤其尤其 是氧化是氧化LDL，是机体的一种防是机体的一种防 御功能。御功能。 2.具有清除血管过多脂质和病菌具有清除血管过多脂质和病菌 毒素等毒素等。 精选ppt20 （四）（四）LDL受体相关蛋白（受体相关蛋白（LRP） LRP体内分布：广泛，在肝细胞、巨噬细胞、平体内分布：广泛，在肝细胞、巨噬细胞、平 滑肌细胞、神经细胞等均有表达，以肝实

14、质细胞滑肌细胞、神经细胞等均有表达，以肝实质细胞 中含量最丰富。中含量最丰富。 LRP功能：能识别多种配体（蛋白酶一蛋白酶抑功能：能识别多种配体（蛋白酶一蛋白酶抑 制剂、毒素的受体、某些病毒、乳铁蛋白等）并制剂、毒素的受体、某些病毒、乳铁蛋白等）并 在体内清除之。在体内清除之。LRP是含是含ApoE的的CM残粒、残粒、 VLDL残粒的受体，使富含残粒的受体，使富含ApoE的的CM残粒、残粒、 VLDL残粒能从血浆中快速清除。残粒能从血浆中快速清除。 LRP与动脉粥样硬化（与动脉粥样硬化（AS）的形成有密切关系。的形成有密切关系。 LRP参与了参与了LDL的氧化过程，与血管损伤有关。的氧化过程，

15、与血管损伤有关。 LRP与泡沫细胞的生成有关。与泡沫细胞的生成有关。 精选ppt21 （五）（五）HDL受体和受体和HDL结合蛋白结合蛋白 在不同细胞的表面及细胞内已分离出了多种可与在不同细胞的表面及细胞内已分离出了多种可与 HDL结合的蛋白质。结合的蛋白质。 某些蛋白质可特异性识别并以高亲和力与某些蛋白质可特异性识别并以高亲和力与HDL结结 合，引发下游的生物学效应，称之为合，引发下游的生物学效应，称之为HDL-R。 有些蛋白质也可与有些蛋白质也可与HDL结合，但不产生或只产生结合，但不产生或只产生 较弱的效应，则称之为较弱的效应，则称之为HDL结合蛋白（结合蛋白（HBP）。）。 精选ppt

16、22 （六）胆固醇酯转运蛋白（六）胆固醇酯转运蛋白 胆固醇酯转运蛋白（胆固醇酯转运蛋白（CETP）属于脂质转运蛋白（属于脂质转运蛋白（lipid transfer protein，LTP），），是由肝、小肠、肾上腺、脾、是由肝、小肠、肾上腺、脾、 脂肪组织及巨噬细胞合成的一种疏水性糖蛋白。脂肪组织及巨噬细胞合成的一种疏水性糖蛋白。 cDNA编码的编码的CETP含含476氨基酸残基，分子量为氨基酸残基，分子量为53kD；成成 熟熟CETP含含4个天冬酰个天冬酰N-糖链，分子量为糖链，分子量为74kD。 精选ppt23 CETP对胆固醇的逆转运过程对胆固醇的逆转运过程 精选ppt24 五、血浆脂蛋

17、白的代谢五、血浆脂蛋白的代谢 （一）血浆脂蛋白代谢密切相关的酶类（一）血浆脂蛋白代谢密切相关的酶类 参与脂质代谢的酶有：参与脂质代谢的酶有： 脂蛋白脂肪酶（脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase，LPL） 肝脂酶（肝脂酶（hepatic triglyceride lipase，HTGL） LCAT等。等。 精选ppt25 1LPL LPL是脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺是脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺 细胞以及巨噬细胞等实质细胞合成和分泌的一种细胞以及巨噬细胞等实质细胞合成和分泌的一种 糖蛋白，分子量为糖蛋白，分子量为60kD。 ApoC为其必需的辅因子。为其必需的辅因

18、子。 作用是分解脂蛋白核心成分的甘油三酯，并促使作用是分解脂蛋白核心成分的甘油三酯，并促使 脂蛋白之间转移胆固醇、磷脂及载脂蛋白。脂蛋白之间转移胆固醇、磷脂及载脂蛋白。 活性活性LPL以同源二聚体形式存在，通过静电引力以同源二聚体形式存在，通过静电引力 与毛细血管内皮细胞表面的多聚糖结合，肝素可与毛细血管内皮细胞表面的多聚糖结合，肝素可 以使此结合形式的以使此结合形式的LPL释放入血，并提高其活性。释放入血，并提高其活性。 精选ppt26 2HTGL HTGL亦称为肝性亦称为肝性LPL（hepatic LPL）其特其特 点：点： HTGL活性不需要活性不需要ApoC作为激活剂；作为激活剂； S

19、DS可抑制可抑制HTGL活性，而不受高盐浓度及活性，而不受高盐浓度及 鱼精蛋白的抑制；鱼精蛋白的抑制； 主要作用于小颗粒脂蛋白如主要作用于小颗粒脂蛋白如VLDL残粒、残粒、 CM残粒及残粒及HDL，调节胆固醇从周围组织转调节胆固醇从周围组织转 运到肝，使肝内的运到肝，使肝内的VLDL转化为转化为LDL。 精选ppt27 3LCAT LCAT由由416个氨基酸残基组成，分子量为个氨基酸残基组成，分子量为6.3kD， 属于糖蛋白。属于糖蛋白。 LCAT由肝脏合成释放入血液，以游离或与脂蛋由肝脏合成释放入血液，以游离或与脂蛋 白结合的形式存在。白结合的形式存在。 作用是将作用是将HDL中的卵磷脂的中

20、的卵磷脂的C2位不饱和脂肪酸转位不饱和脂肪酸转 移给游离胆固醇，生成溶血卵磷脂和胆固醇酯，移给游离胆固醇，生成溶血卵磷脂和胆固醇酯， 使使HDL变成成熟的变成成熟的HDL球状颗粒。球状颗粒。 精选ppt28 （二）血浆脂蛋白代谢（二）血浆脂蛋白代谢 外源性代谢途径：饮食摄入的胆固醇和外源性代谢途径：饮食摄入的胆固醇和TG 在小肠中合成在小肠中合成CM及其代谢过程。及其代谢过程。 内源性代谢途径：包括内源性代谢途径：包括 由肝脏合成由肝脏合成VLDL，VLDL转变为转变为IDL和和 LDL，LDL被肝脏或其它器官代谢的过程。被肝脏或其它器官代谢的过程。 HDL的代谢过程。的代谢过程。 精选ppt

21、29 1CM代谢代谢 从食物中摄取的脂质从食物中摄取的脂质(主要是主要是TG)，在肠内被胰腺在肠内被胰腺 分泌的脂酶水解成脂肪酸和甘油一酯（分泌的脂酶水解成脂肪酸和甘油一酯（MG），），由由 肠粘膜吸收进入细胞内再重新合成肠粘膜吸收进入细胞内再重新合成TG及磷脂。及磷脂。 新合成的新合成的TG与少量的胆固醇、磷酯、与少量的胆固醇、磷酯、ApoB48、 ApoAI构成构成CM，经淋巴管至胸导管进入血液循环。经淋巴管至胸导管进入血液循环。 CM在血液中从在血液中从HDL转移获得转移获得ApoC和和ApoE而变化而变化 成熟型成熟型CM。 接着接着CM中的中的TG被被LPL水解产生甘油一酯及脂肪水解

22、产生甘油一酯及脂肪 酸，后者被细胞摄取利用或贮存。酸，后者被细胞摄取利用或贮存。 剩下的残留物被称为剩下的残留物被称为CM残粒残粒(CM remnant)，随血随血 液进入肝脏迅速被代谢。液进入肝脏迅速被代谢。 精选ppt30 CM代谢代谢 精选ppt31 2VLDL、IDL、LDL代谢代谢 体内合成的内源性体内合成的内源性TG与与ApoB100、C、E等在肝等在肝 脏合成脏合成VLDL释放入血液。释放入血液。 TG经血管壁的经血管壁的LPL水解生成脂肪酸被末梢组织利水解生成脂肪酸被末梢组织利 用。用。 失去失去TG之后的之后的VLDL转变成转变成VLDL残粒（残粒（IDL）。）。 IDL有两

23、条代谢途径：一是直接经肝脏有两条代谢途径：一是直接经肝脏ApoE受体受体 结合摄取进入肝细胞代谢；二是经结合摄取进入肝细胞代谢；二是经HTGL作用转作用转 变成以变成以ApoB100和游离胆固醇为主要成份的和游离胆固醇为主要成份的LDL， 经末梢组织的经末梢组织的LDL-R结合进入细胞内，进行代谢。结合进入细胞内，进行代谢。 精选ppt32 VLDL、IDL、LDL代谢代谢 精选ppt33 3HDL代谢代谢 在肝脏和小肠合成时属于未成形的在肝脏和小肠合成时属于未成形的HDL（nascent HDL， HDLn）。）。 HDLn获取获取CM、VLDL表层的磷脂和表层的磷脂和ApoA而变成园盘状而

24、变成园盘状 的新生的新生HDL。 新生新生HDL从末梢组织细胞膜获得游离胆固醇，经从末梢组织细胞膜获得游离胆固醇，经LCAT作用作用 生成生成CE进入进入HDL内部，形成成熟型内部，形成成熟型HDL3和球型和球型HDL2。 HDL3在在CETP介导下，与介导下，与VLDL、LDL进行进行CE/TG交换，交换， 使末梢组织的使末梢组织的FC输送到肝脏。输送到肝脏。 HDL2中的中的TG经肝脏的经肝脏的HTGL作用，可以再变成作用，可以再变成HDL3，使使 HDL在逆转运中再利用，从而防止动脉粥样硬化的发生。在逆转运中再利用，从而防止动脉粥样硬化的发生。 精选ppt34 第二节第二节 脂蛋白代谢紊

25、乱脂蛋白代谢紊乱 一、高脂蛋白血症一、高脂蛋白血症 二、低脂蛋白血症二、低脂蛋白血症 精选ppt35 一、高脂蛋白血症一、高脂蛋白血症 高脂血症（高脂血症（hyperlipidemia）是指血浆中胆固醇和是指血浆中胆固醇和 /或或TG水平升高。水平升高。 由于血脂在血中以脂蛋白形式运输，因而实际上由于血脂在血中以脂蛋白形式运输，因而实际上 高脂血症就是高脂蛋白血症高脂血症就是高脂蛋白血症 （hyperlipoproteinemia，HLP）。）。 精选ppt36 （一）高脂蛋白血症的分型（一）高脂蛋白血症的分型 精选ppt37 （二）原发性高脂蛋白血症（二）原发性高脂蛋白血症 家族性多基因性高

26、胆固醇血症家族性多基因性高胆固醇血症 家族性高胆固醇血症家族性高胆固醇血症 家族性异常家族性异常-脂蛋白血症脂蛋白血症 家族性乳糜微粒血症家族性乳糜微粒血症 家族性高甘油三酯血症家族性高甘油三酯血症 其他家族性高脂血症其他家族性高脂血症 精选ppt38 （三）继发性脂蛋白血症（三）继发性脂蛋白血症 糖尿病糖尿病 甲状腺功能减退甲状腺功能减退 肾脏疾患肾脏疾患 肥胖症肥胖症 酗酒酗酒 药物药物 精选ppt39 （四）高（四）高HDL血症血症 血浆血浆HDL-胆固醇（胆固醇（HDL-C）含量超过含量超过2.6mmol/L，定义为高定义为高 HDL血症。血症。 CETP及及HTGL活性降低是引起高活

27、性降低是引起高HDL血症的主要原因。若血症的主要原因。若 CETP缺陷，缺陷，HDL内的内的CE蓄积，使蓄积，使HDL增多；若增多；若HTGL活性活性 降低，降低，HDL被肝细胞摄取减少并使被肝细胞摄取减少并使HDL2HDL3转换过程减转换过程减 慢而停留在血液中，并使其浓度增加，出现高慢而停留在血液中，并使其浓度增加，出现高HDL血症。血症。 高高HDL血症分为原发性和继发性两类。血症分为原发性和继发性两类。 原发性高原发性高HDL血症的病因有：血症的病因有：CETP缺损；缺损；HTGL活性活性 降低；其他。降低；其他。 继发性高继发性高HDL血症病因有：运动失调；饮酒过量；原血症病因有：运

28、动失调；饮酒过量；原 发性胆汁性肝硬化；治疗高脂血症的药物引起；其他。发性胆汁性肝硬化；治疗高脂血症的药物引起；其他。 精选ppt40 二、低脂蛋白血症二、低脂蛋白血症 低脂蛋白血症的诊断低脂蛋白血症的诊断 血清血清TC在在3.3mmol/L以下，或以下，或TG在在0.45mmol/L 以下，或以下，或LDL-C在在2.1mmol/L以下者，属于低脂以下者，属于低脂 蛋白血症。蛋白血症。TC和和TG同时降低者多见，脂蛋白中同时降低者多见，脂蛋白中 多见多见HDL、LDL和和VLDL降低。降低。 病因病因 原发性低脂蛋白血症的原因有原发性低脂蛋白血症的原因有ApoA缺乏或变异、缺乏或变异、 LC

29、AT缺乏症、无缺乏症、无-脂蛋白血症（脂蛋白血症（Tangier病）、病）、 无无-脂蛋白血症、低脂蛋白血症、低-脂蛋白血症等。脂蛋白血症等。 精选ppt41 三种无脂蛋白血症的主要特点三种无脂蛋白血症的主要特点 精选ppt42 第三节第三节 脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验 一、血浆脂质测定一、血浆脂质测定 二、血浆脂蛋白测定二、血浆脂蛋白测定 三、血浆载脂蛋白测定三、血浆载脂蛋白测定 四、血浆脂代谢相关酶的测定四、血浆脂代谢相关酶的测定 五、脂质相关蛋白基因突变分析五、脂质相关蛋白基因突变分析 六、血脂和脂蛋白检测的临床应用六、血脂和脂蛋白检测的临床应用 精选ppt

30、43 一、血浆脂质测定一、血浆脂质测定 （一）（一）TG测定测定 1化学法化学法 2酶法测定酶法测定 （二）（二）TC测定测定 1化学法化学法 2酶法测定酶法测定 （三）（三）FFA测定测定 （四）磷脂测定（四）磷脂测定 精选ppt44 （一）甘（一）甘 油油 三三 酯酯 测测 定定 1化学法化学法 基本操作步骤包括：基本操作步骤包括： TG的的抽提抽提分离（有机溶剂），去除干扰物分离（有机溶剂），去除干扰物PL、FG等等 （吸附剂）或分溶抽提；（吸附剂）或分溶抽提； 皂化皂化 使使TG水解生成甘油；水解生成甘油； 氧化氧化 甘油成甲醛甘油成甲醛 （过碘酸）；（过碘酸）； 显色显色定量甲醛。定

31、量甲醛。 A.甲醛与变色酸在硫酸溶液中加热产生紫红色（甲醛与变色酸在硫酸溶液中加热产生紫红色（Eegriwe反反 应），应），570nm测定吸光度。测定吸光度。 B.甲醛与乙酰丙酮在铵离子存在下加热生成黄色的产物甲醛与乙酰丙酮在铵离子存在下加热生成黄色的产物 （Hantgsch反应），反应），412nm测定吸光度。测定吸光度。 精选ppt45 2甘甘 油油 三三 酯酯 酶酶 法法 测测 定定 评价：操作简便，快速准确，并能在自动化生物化学分析仪评价：操作简便，快速准确，并能在自动化生物化学分析仪 上进行批量测定。上进行批量测定。 所测结果包括了血清中所测结果包括了血清中FG，如何解决？如何解决

32、？ 精选ppt46 TG参考范围与临床意义参考范围与临床意义 血清血清TG参考范围：成人参考范围：成人0.451.69mmol/L （40150mg/dl）。）。目前我国的血脂异常防治建议目前我国的血脂异常防治建议 提出，成年人的合适提出，成年人的合适TG水平水平1.69mmol/L （150mg/dl）；）；1.69mmol/L为为TG升高。升高。 TG升高可见于家族性高升高可见于家族性高TG血症、家族性混合性血症、家族性混合性 高脂血症、冠心病、动脉粥样硬化、糖尿病、肾高脂血症、冠心病、动脉粥样硬化、糖尿病、肾 病综合症、甲状腺功能减退、胆道梗塞、糖原累病综合症、甲状腺功能减退、胆道梗塞、

33、糖原累 积症、妊娠、口服避孕药、酗酒等。积症、妊娠、口服避孕药、酗酒等。 精选ppt47 （二）（二） 总总 胆胆 固固 醇醇 测测 定定 血清中胆固醇血清中胆固醇：CE占占70；FC占占30。 测定方法分为化学法和酶法两大类。测定方法分为化学法和酶法两大类。 精选ppt48 1化学比色法化学比色法 一般包括：抽提；皂化；毛地黄皂苷沉淀纯化；一般包括：抽提；皂化；毛地黄皂苷沉淀纯化； 显色比色四个阶段。显色比色四个阶段。 颜色反应颜色反应有三类：有三类： （1）胆固醇与醋酐）胆固醇与醋酐-硫酸试剂产生蓝绿色。如硫酸试剂产生蓝绿色。如L-B法、法、 Abell法。法。 （2）胆固醇与高铁硫酸试剂

34、产生紫红色，如硫磷铁法。）胆固醇与高铁硫酸试剂产生紫红色，如硫磷铁法。 （3）胆固醇与邻苯二甲醛硫酸生成紫红色，如邻苯二甲）胆固醇与邻苯二甲醛硫酸生成紫红色，如邻苯二甲 醛法。醛法。 代表性的方法：代表性的方法： （1）硫磷铁法（硫磷铁法（Bowman法）法）：用无水乙醇提取胆固醇，：用无水乙醇提取胆固醇， 沉淀蛋白质，提取液中加硫磷铁试剂显色。沉淀蛋白质，提取液中加硫磷铁试剂显色。 （2） Abell法：法：血清中加入氢氧化钠乙醇溶液，使血清中加入氢氧化钠乙醇溶液，使CE皂皂 化为化为FC；加入正己烷加入正己烷-水提取后，水提取后，FC进入正己烷相，以进入正己烷相，以醋醋 酐酐-硫酸试剂显色

35、定量。硫酸试剂显色定量。 精选ppt49 2. 总总 胆胆 固固 醇酶法测定醇酶法测定 l（1） CE在胆固醇酯酶在胆固醇酯酶(cholesterol esterase，CHE)作用作用 下水解成下水解成FC和和FFA； l（2）FC再经胆固醇氧化酶再经胆固醇氧化酶(cholesterol oxidase，COD)氧氧 化成化成4胆甾烯酮和胆甾烯酮和H2O2； l（3）再分别定量再分别定量O2的消耗或者的消耗或者H2O2的生成量，或者的生成量，或者4 胆甾烯酮生成量，以作为胆甾烯酮生成量，以作为FC的定量依据。的定量依据。 lA.测定测定4胆甾烯酮法胆甾烯酮法 240nm lB.定量定量O2的

36、消耗的消耗 电位测量电位测量 lC.测定测定H2O2的生成量的生成量 精选ppt50 TC参考范围与临床意义参考范围与临床意义 血清血清TC参考范围：成人参考范围：成人2.855.69mmol/L （110220mg/dl）。）。目前我国的血脂异常防治建目前我国的血脂异常防治建 议中以议中以5.17mmol/L（200mg/dl）为合适水平，为合适水平， 5.205.66mmol/L（201 219mg/dl）为临界范围为临界范围 或边缘升高，或边缘升高，5.69mmol/L（220mg/dl）为升高。为升高。 高胆固醇血症和高胆固醇血症和AS的发生有密切关系。的发生有密切关系。 TC升高见于

37、各种高脂蛋白血症、梗阻性黄疸、肾升高见于各种高脂蛋白血症、梗阻性黄疸、肾 病病综合征综合征、甲状腺功能低下、慢性肾功能衰竭、甲状腺功能低下、慢性肾功能衰竭、 糖尿病等。此外，吸烟、饮酒、紧张、血液浓缩糖尿病等。此外，吸烟、饮酒、紧张、血液浓缩 等也可使等也可使TC升高。升高。 TC降低见于各种脂蛋白缺陷状态、肝硬化、恶性降低见于各种脂蛋白缺陷状态、肝硬化、恶性 肿瘤、营养不良、巨细胞性贫血等。肿瘤、营养不良、巨细胞性贫血等。 精选ppt51 （三（三）游离脂肪酸测定游离脂肪酸测定 FFA在血中浓度很低，成人在血中浓度很低，成人0.40.9mmol/L；儿童和肥胖成人儿童和肥胖成人 稍高。其含量

38、水平受脂代谢、糖代谢和内分泌功能等因素影响。稍高。其含量水平受脂代谢、糖代谢和内分泌功能等因素影响。 血中血中FFA半寿期为半寿期为12min，极短。血清中的极短。血清中的FFA是与清蛋白是与清蛋白 结合进行运输。结合进行运输。 FFA测定标本测定标本：一定要注意在：一定要注意在4条件下分离血清并进行测定。条件下分离血清并进行测定。 因为血中有各种脂肪酶存在，易使血中因为血中有各种脂肪酶存在，易使血中TG和和PL的酯型脂肪酸的酯型脂肪酸 分解成非酯化的分解成非酯化的FFA，使血中使血中FFA值上升。贮存的标本仅限于值上升。贮存的标本仅限于 24h内。内。 血清血清FFA测定方法测定方法： 1非

39、酶法测定非酶法测定 非酶法测定包括滴定法、比色法、原子吸收非酶法测定包括滴定法、比色法、原子吸收 分光光度法和分光光度法和高效液相层析法高效液相层析法。前三种方法准确性差，高效液。前三种方法准确性差，高效液 相层析法仪器太昂贵，不便于批量操作。相层析法仪器太昂贵，不便于批量操作。 2酶测定法酶测定法 血清中主要用脂肪酶测定。可分别测定产物乙血清中主要用脂肪酶测定。可分别测定产物乙 酰酰CoA、AMP或辅酶或辅酶A(CoA)，进行定量。酶法测定结果准确进行定量。酶法测定结果准确 可靠快速，易于批量检测。可靠快速，易于批量检测。 精选ppt52 （四）磷脂测定（四）磷脂测定 血清中血清中PL包括包

40、括：卵磷脂：卵磷脂(60)和溶血卵磷脂和溶血卵磷脂(210)； 磷脂酰乙醇胺等磷脂酰乙醇胺等(2)； 鞘磷脂鞘磷脂(20)。 血清血清PL定量方法定量方法: 1化学测定法化学测定法 抽提分离；灰化；抽提分离；灰化； 显色、比色。显色、比色。 2酶测定法酶测定法 可分别利用磷脂酶可分别利用磷脂酶A、B、C、D等等4种酶作用，加种酶作用，加 水分解，测定其产物，对水分解，测定其产物，对PL进行定量，一般多采用磷脂酶进行定量，一般多采用磷脂酶D(PL- D)。PL-D可作用于含有卵磷脂、溶血卵磷脂和鞘磷脂以及含胆可作用于含有卵磷脂、溶血卵磷脂和鞘磷脂以及含胆 碱的磷脂，这三种磷脂约占血清总磷脂的碱的

41、磷脂，这三种磷脂约占血清总磷脂的95。 该法快速准确，便于自动化仪器进行批量检测。该法快速准确，便于自动化仪器进行批量检测。 精选ppt53 二、血浆脂蛋白测定二、血浆脂蛋白测定 （一）电泳法（一）电泳法 （二）超速离心法（二）超速离心法 （三）脂蛋白胆固醇测定（三）脂蛋白胆固醇测定 1沉淀分离法沉淀分离法 2均相测定法均相测定法 3间接法间接法 （四）（四）Lp(a)测定测定 精选ppt54 二、血浆脂蛋白测定二、血浆脂蛋白测定 （一）电泳分离法（一）电泳分离法 原理：原理：不同脂蛋白因蛋白质含量不同、其电荷量不不同脂蛋白因蛋白质含量不同、其电荷量不 同，故可用电泳方法进行分离，并根据血浆脂

42、蛋白同，故可用电泳方法进行分离，并根据血浆脂蛋白 电泳迁移率不同予以判断确认。电泳迁移率不同予以判断确认。 方法：方法： （1）预染、电泳预染、电泳:血浆脂蛋白用亲脂染料如苏丹黑血浆脂蛋白用亲脂染料如苏丹黑B 等进行预染再电泳；等进行预染再电泳； （2）扫描、计算：扫描、计算：置于光密度计内进行扫描，计算置于光密度计内进行扫描，计算 出各种脂蛋白的百分比，该数值乘以血浆总脂量，出各种脂蛋白的百分比，该数值乘以血浆总脂量， 即可求出即可求出-脂蛋白、脂蛋白、-脂蛋白和前脂蛋白和前-脂蛋白含量。脂蛋白含量。 电泳支持物电泳支持物一般常用醋酸纤维薄膜、琼脂糖凝胶或一般常用醋酸纤维薄膜、琼脂糖凝胶或

43、聚丙烯酰胺凝胶。聚丙烯酰胺凝胶。 精选ppt55 （二）超速离心分离纯化法（二）超速离心分离纯化法 超速离心法：超速离心法：根据血浆中各种脂蛋白的比重根据血浆中各种脂蛋白的比重(密密 度度)的差异，在强大离心力作用下进行分离纯化的差异，在强大离心力作用下进行分离纯化 的一种方法。的一种方法。 一般操作方法一般操作方法：将血浆置于已准备好的不同密：将血浆置于已准备好的不同密 度梯度的盐溶媒介质中，在强大离心力作用下，度梯度的盐溶媒介质中，在强大离心力作用下， 各脂蛋白依其自身的各脂蛋白依其自身的Sf不同，分散于离心管中不同，分散于离心管中 的密度梯度溶媒层，达到分离纯化的目的。的密度梯度溶媒层，

44、达到分离纯化的目的。 超速离心法是分离纯化脂蛋白的有效技术超速离心法是分离纯化脂蛋白的有效技术,目前目前 广泛应用于脂蛋白、载脂蛋白代谢的研究中。广泛应用于脂蛋白、载脂蛋白代谢的研究中。 精选ppt56 （三）血浆脂蛋白胆固醇测定（三）血浆脂蛋白胆固醇测定 脂蛋白中胆固醇含量较为稳定，因此目前脂蛋白中胆固醇含量较为稳定，因此目前 以测定脂蛋白中胆固醇总量的方法作为脂以测定脂蛋白中胆固醇总量的方法作为脂 蛋白的定量依据。蛋白的定量依据。 高密度脂蛋白高密度脂蛋白-胆固醇胆固醇(HDL-C) 低密度脂蛋白低密度脂蛋白-胆固醇胆固醇(LDL-C) 极低密度脂蛋白极低密度脂蛋白-胆固醇胆固醇(VLDL

45、-C) 精选ppt57 1. 沉淀分离法沉淀分离法 原理：原理：脂蛋白的组成及理化性质不同，在不同的聚阴离脂蛋白的组成及理化性质不同，在不同的聚阴离 子、子、2价金属离子价金属离子(Mn2+，Mg2+、Ca2+、Ni2+、Co2+)及不及不 同同pH值条件下，使脂蛋白与聚阴离子结合形成复合物沉值条件下，使脂蛋白与聚阴离子结合形成复合物沉 淀，以达到分离定量各种脂蛋白的目的。淀，以达到分离定量各种脂蛋白的目的。 方法：方法： （1）肝素肝素-锰锰沉淀血清中沉淀血清中VLDL和和LDL，离心沉淀，离心沉淀，HDL 则留在上清液，再定量则留在上清液，再定量HDL-C量，即为血浆量，即为血浆HDL的量

46、。的量。 （2）聚乙烯硫酸盐聚乙烯硫酸盐沉淀沉淀LDL，离心去上清液留沉淀。再离心去上清液留沉淀。再 定量沉淀其中的定量沉淀其中的LDL-C，即血浆的即血浆的LDL量。量。 评价：评价：操作简单，无需昂贵的仪器，是临床应用的检测操作简单，无需昂贵的仪器，是临床应用的检测 方法。方法。 精选ppt58 2匀相测定法匀相测定法 （1 1）血浆高密度脂蛋白胆固醇测定）血浆高密度脂蛋白胆固醇测定 原理：原理：CM、VLDL、LDL在多聚阴离子在多聚阴离子 存在下与试剂存在下与试剂发生凝集形成遮避圈，抑发生凝集形成遮避圈，抑 制其表面的游离胆固醇反应或试剂制其表面的游离胆固醇反应或试剂与与CMCM、 V

47、LDLVLDL、LDLLDL中的胆固醇反应生成中的胆固醇反应生成H2O2，并并 将将H2O2清除；试剂清除；试剂与与HDL形成可溶性形成可溶性 复合体，使复合体，使HDLHDL中的胆固醇直接与酶试剂中的胆固醇直接与酶试剂 反应。反应。 精选ppt59 SPD法测定法测定HDL-CHDL-C 在血清中加入试剂在血清中加入试剂，在反应促进剂（合成的多，在反应促进剂（合成的多 聚物聚物/表面活性剂）的作用下，血清中表面活性剂）的作用下，血清中CM、 VLDL及及LDL与试剂形成可溶性复合物，其表层与试剂形成可溶性复合物，其表层 的的FC在在CHOD的催化下反应生成的催化下反应生成H2O2，H2O2在

48、在 POD的作用下被清除。的作用下被清除。 加入试剂加入试剂，与，与HDL颗粒成为可溶性复合物，颗粒成为可溶性复合物， HDL中的胆固醇与胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶反中的胆固醇与胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶反 应，生成应，生成H2O2，并作用于色原体产生颜色反应，并作用于色原体产生颜色反应， 其颜色的深浅与其颜色的深浅与HDL-CHDL-C的含量成正比。的含量成正比。 精选ppt60 HDL-C参考范围与临床意义参考范围与临床意义 血清血清HDL-C参考范围：参考范围： 成年男性成年男性1.161.42mmol/L（4555 mg/dl） 女性女性1.291.55 mmol/L（5060mg/dl）

49、 HDL-C与冠心病的发展成负相关。与冠心病的发展成负相关。 HDL-C降低见于急性感染、糖尿病、慢性降低见于急性感染、糖尿病、慢性 肾功能衰竭、肾病综合征等。肾功能衰竭、肾病综合征等。 HDL-C含量过高（如超过含量过高（如超过2.6mmol/L），），也也 属于病理状态，为高属于病理状态，为高HDL血症。高血症。高HDL血血 症可分为原发性和继发性两类。症可分为原发性和继发性两类。 精选ppt61 （2） 血浆血浆LDL-C测定测定SUR法法 SUR法检测原理：法检测原理： 试剂试剂中的表面活性剂中的表面活性剂1能改变能改变LDL以外的脂蛋以外的脂蛋 白（白（HDL、CM和和VLDL等）结

50、构并解离，所释等）结构并解离，所释 放出来的微粒化胆固醇分子与胆固醇酶试剂反应，放出来的微粒化胆固醇分子与胆固醇酶试剂反应， 产生的产生的H2O2在缺乏偶联剂时被消耗而不显色；在缺乏偶联剂时被消耗而不显色； 加试剂加试剂，表面活性剂，表面活性剂2使使LDL颗粒解离释放胆颗粒解离释放胆 固醇，参与固醇，参与Trinder反应而显色，色泽深浅与反应而显色，色泽深浅与 LDL-C量呈比例。量呈比例。 精选ppt62 LDL-C参考范围与临床意义参考范围与临床意义 血清血清LDL-C参考范围：成人参考范围：成人2.073.11 mmol/L （80120 mg/dl） LDL是是AS的主要危险因素之一

51、，血清的主要危险因素之一，血清LDL-C水平越高，水平越高，AS 的危险性越大。的危险性越大。 血清血清LDL-C水平随年龄增加而升高。高脂、高热量饮食、运水平随年龄增加而升高。高脂、高热量饮食、运 动少和精神紧张等可使动少和精神紧张等可使LDL-C水平升高。水平升高。 临床上临床上LDL-C升高可见于家族性高胆固醇血症、家族性升高可见于家族性高胆固醇血症、家族性 apoB缺陷症、混合性高脂血症、糖尿病、甲状腺功能低下、缺陷症、混合性高脂血症、糖尿病、甲状腺功能低下、 肾病综合征、梗阻性黄疸、慢性肾功能衰竭、肾病综合征、梗阻性黄疸、慢性肾功能衰竭、Cushings综综 合征、妊娠、多发性肌瘤、

52、某些药物的使用等。合征、妊娠、多发性肌瘤、某些药物的使用等。 LDL-C降低见于家族性无降低见于家族性无或低或低-脂蛋白血症、营养不良、脂蛋白血症、营养不良、 甲状腺功能亢进、消化吸收不良、肝硬化、慢性消耗性疾病、甲状腺功能亢进、消化吸收不良、肝硬化、慢性消耗性疾病、 恶性肿瘤等。恶性肿瘤等。 精选ppt63 3间接法间接法 利用血清中利用血清中TC、TG和和HDL-C含量，按公式推算含量，按公式推算 出出LDL-C的量。的量。 Friedewald于于1972年发明的一个经验式：年发明的一个经验式： LDL-C=TC HDL-C TG/2.2（以以mmol/Lmmol/L 计）计） 或或 L

53、DL-C=TC HDL-C TG/5（以以mg/dl计）。计）。 应注意运用这一公式有如下条件：应注意运用这一公式有如下条件： 空腹血清不含空腹血清不含CM CM TGTG浓度在浓度在4.604.60mmol/Lmmol/L以下以下 型高脂血症除外型高脂血症除外 精选ppt64 （四）（四） Lp(a)测定法测定法 目前主要采用免疫透射比浊法（目前主要采用免疫透射比浊法（ITA）、）、免疫散射免疫散射 比浊法比浊法(INA)、酶联免疫吸附试验（酶联免疫吸附试验（ELISA）、）、发发 射免疫测定法（射免疫测定法（RIA）和免疫扩散法（和免疫扩散法（RID）。）。 免疫透射比浊法使用最为广泛，其

54、原理是利用免疫透射比浊法使用最为广泛，其原理是利用 Apo(a)的单克隆抗体，采用多点定标（的单克隆抗体，采用多点定标（57点），点）， 用用log-logit多元回归方程进行曲线拟合运算，该法多元回归方程进行曲线拟合运算，该法 灵敏度高，便于自动化批量检测。灵敏度高，便于自动化批量检测。 Lp(a)-C测定法测定法：避免或减少因为抗原：避免或减少因为抗原Apo(a)多态多态 性不同所造成的性不同所造成的Lp(a)定量的准确性。定量的准确性。 测定方法有超速离心法、麦胚血凝素法和琼脂糖测定方法有超速离心法、麦胚血凝素法和琼脂糖 凝胶电泳法，后两种方法在临床应用较广。凝胶电泳法，后两种方法在临床

55、应用较广。 参考值参考值：30mg/L以下以下 精选ppt65 三、载脂蛋白测定三、载脂蛋白测定 血清载脂蛋白血清载脂蛋白(Apo)包括包括ApoAI、A 、B100、C 、C、E和和(a)，已属常规检测项目。已属常规检测项目。 血清中载脂蛋白均结合于脂蛋白中，测定时要加血清中载脂蛋白均结合于脂蛋白中，测定时要加 用解链剂，使脂蛋白中用解链剂，使脂蛋白中Apo暴露再进行测定。暴露再进行测定。 目前测定血清中载脂蛋白的含量的方法是利用相目前测定血清中载脂蛋白的含量的方法是利用相 应特异抗体试剂进行测定。应特异抗体试剂进行测定。 现有羊抗人现有羊抗人ApoAI、A、B100、C、C、E 和和(a)

56、等抗体试剂。测定原理是将某一特异抗体加等抗体试剂。测定原理是将某一特异抗体加 到待测人血清中，即与血清中相应抗原形成抗原到待测人血清中，即与血清中相应抗原形成抗原 抗体复合物，根据复合物的量，即可测出血清中抗体复合物，根据复合物的量，即可测出血清中 某一某一Apo含量。含量。 精选ppt66 ApoA参考范围与临床意义参考范围与临床意义 血清血清ApoA参考范围：成人参考范围：成人1.201.60 g/L ApoA的含量不一定与的含量不一定与HDL-C成比例，同时测成比例，同时测 定定ApoA与与HDL-C对病理发生状态的分析更有对病理发生状态的分析更有 帮助。帮助。 ApoA降低主要见于降低

57、主要见于型和型和a型高脂蛋白血症、型高脂蛋白血症、 冠心病、脑血管病、感染、血液透析、慢性肾炎、冠心病、脑血管病、感染、血液透析、慢性肾炎、 吸烟、糖尿病、药物治疗、胆汁郁积阻塞、慢性吸烟、糖尿病、药物治疗、胆汁郁积阻塞、慢性 肝炎、肝硬化等。肝炎、肝硬化等。 ApoA升高主要见于妊娠、雌激素疗法、锻炼、升高主要见于妊娠、雌激素疗法、锻炼、 饮酒等。饮酒等。 精选ppt67 ApoB参考范围与临床意义参考范围与临床意义 血清血清ApoB参考范围：成人参考范围：成人0.801.20g/L。 流行病学与临床研究已确认，流行病学与临床研究已确认，ApoB增高是冠心增高是冠心 病危险因素。一般情况下，

58、血清病危险因素。一般情况下，血清ApoB主要代表主要代表 LDL水平，它与水平，它与LDL-C成显著正相关。成显著正相关。 ApoB 与与LDL-C同时测定有利于临床判断。同时测定有利于临床判断。 ApoB升高主要见于冠心病、升高主要见于冠心病、a和和b型高脂蛋型高脂蛋 白血症、脑血管病、糖尿病、妊娠、胆汁梗阻、白血症、脑血管病、糖尿病、妊娠、胆汁梗阻、 脂肪肝、吸烟、血液透析、肾病综合症、慢性脂肪肝、吸烟、血液透析、肾病综合症、慢性 肾炎等。肾炎等。 ApoB降低主要见于降低主要见于型高脂血症、雌激素疗法、型高脂血症、雌激素疗法、 肝硬化、药物疗法及感染等。肝硬化、药物疗法及感染等。 精选ppt68 四、血浆脂代谢相关酶的测定四、血浆脂代谢相关酶的测定 脂蛋白脂肪酶脂蛋白脂肪酶 按每公斤体重按每公斤体重10单位的肝素量静脉注射，单位的肝素量静脉注射，10分钟后采集分钟后采集 静脉血，再测定静脉血，再测定LPL活性。活性。 LPL测定方法有：酶法，将血浆用测定方法有：酶法，将血浆用SDS或抗体抑制或抗体抑制 HTGL活性，以活性，以LPL催化的基质减少量进行定量；催化的基质减少量进行定量；