药物残留快速测定方法

1、药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 随着人们环境意识的不断加强，由药物残留引起的食品安全问随着人们环境意识的不断加强，由药物残留引起的食品安全问 题也越来越受到人们的关注。为了保障消费者的安全和健康，提高题也越来越受到人们的关注。为了保障消费者的安全和健康，提高 食品的质量安全水平，我国政府决定加强食品中药物残留的监控，食品的质量安全水平，我国政府决定加强食品中药物残留的监控， 建立健全药物残留的检测体系，实施对蔬菜、瓜果、茶叶生产全过建立健全药物残留的检测体系，实施对蔬菜、瓜果、茶叶生产全过 程的农药监控，对程的农药监控，对有防病治病、促进生长、提高生产性能、改善动有防病治病、促进生长

2、、提高生产性能、改善动 物性食品的一些含有化学的、生物药用成分功效的动物保健品或饲物性食品的一些含有化学的、生物药用成分功效的动物保健品或饲 料添加剂的监控。料添加剂的监控。 食用含有药物残留的食品，使人类的健康受到了极大的危害，食用含有药物残留的食品，使人类的健康受到了极大的危害， 引起了世界各国的关注。因此，对食品中药物残留情况，必须加以引起了世界各国的关注。因此，对食品中药物残留情况，必须加以 监测，以保证食用安全。监测，以保证食用安全。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 药物药物食品食品最高残留限量最高残留限量(mg/kg) 四环素四环

3、素 畜禽：肌肉畜禽：肌肉 0.1 肝肝 0.3 肾肾 0.6 氯霉素氯霉素畜禽肉、水产品畜禽肉、水产品不得检出不得检出(检出限检出限0.01) 磺胺类磺胺类 畜禽（可食性组织）畜禽（可食性组织） 0.1 水产品水产品 0.1(单种）单种） 猪肉、鸡肉、鸡蛋、牛肉猪肉、鸡肉、鸡蛋、牛肉0.1(以总量计以总量计) 呋喃唑酮呋喃唑酮 水产品水产品不得检出不得检出 鸡肉、鸡蛋鸡肉、鸡蛋 0.1 盐酸克伦特罗盐酸克伦特罗 (瘦肉精）瘦肉精） 畜禽肉畜禽肉 不得检出不得检出(检出限检出限0.01) 己烯雌酚己烯雌酚畜禽肉、水产品畜禽肉、水产品不得检出不得检出(检出限检出限0.05) 药物残留快速测定方法药

4、物残留快速测定方法 砷砷 0.5mg/kg 0.5mg/kg， 氟氟 0.5mg/kg 0.5mg/kg， 镉镉 0.03mg/kg 0.03mg/kg， 汞汞 0.01mg/kg 0.01mg/kg， 六六六六六六 0.2mg/l 0.2mg/l， ddt 0.1mg/kgddt 0.1mg/kg， 杀螟硫磷杀螟硫磷 0.4mg/kg 0.4mg/kg， 倍硫磷倍硫磷 0.05mg/kg 0.05mg/kg， 敌敌畏敌敌畏 0.2mg/kg 0.2mg/kg， 乐果乐果 1.0mg/kg 1.0mg/kg， 锌锌 5mg/kg 5mg/kg， 甲拌磷、马拉硫磷、对硫磷等不得检出甲拌磷、马拉硫

5、磷、对硫磷等不得检出 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 （一）药物残留的概念（一）药物残留的概念 农药残留：农药残留：是指农药使用后残存于生物体、食品(农副产品) 和环境中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的 总称。 兽药残留：兽药残留：兽药在动物源食品中的残留”的简称，是指动 物产品的任何可食部分所含兽药的母体化合物及（或）其 代谢物，以及与兽药有关的杂质。 食品中农药残留的快速检测食品中农药残留的快速检测 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 1 1抗生素类：包括青霉素、链霉素、金霉素、土霉素、四环素、泰抗生素类：包括青霉素、链霉素、金霉素、土霉素、四环素、泰 乐菌素等。

6、乐菌素等。 2 2呋喃药类：包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃呾啶等。呋喃药类：包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃呾啶等。 3 3磺胺药类；磺胺药类； 4. 4. 抗球虫药；抗球虫药； 5. 5. 激素药类；激素药类； 6. 6. 驱虫药类驱虫药类。 （二）主要残留药物有以下几类：（二）主要残留药物有以下几类： 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 （三）药物对食品的污染及危害（三）药物对食品的污染及危害 u药物对食品的污染药物对食品的污染 1 1预防和治疗畜禽疾病预防和治疗畜禽疾病 2 2作为饲料添加剂使用作为饲料添加剂使用 3 3保鲜保鲜：在食品的保鲜过程中，有时加入某种抗生素以抑制 微生物的生长

7、、繁殖，使用后也会对食品造成污染。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 u药物的残留对人体的危害药物的残留对人体的危害 药物虽然有预防和治疗疾病的作用，但同时对机体也产生有害的作用。 药物与毒物之间并无明显的界限，有些毒物在适当的剂量时具有治疗作 用，而所有药物过量或应用时间过长，均有毒性。残留的药物对人体的 不良影响主要有： 1 1毒性作用毒性作用 2 2使某些细菌产生抗药性使某些细菌产生抗药性 3 3过敏反应过敏反应 4 4造成菌群失调造成菌群失调 5 5致癌作用致癌作用：现已证明残留在食品中的克球粉、雌激素具有致癌 作用。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 国际上用于农药残

8、留快速检测方法种类繁多，究其原理来说主要分为两大国际上用于农药残留快速检测方法种类繁多，究其原理来说主要分为两大 类：类：生化测定法生化测定法和和色谱快速检测法色谱快速检测法。 生化检测法生化检测法是利用生物体内提取出的某种生化物质进行的生化反应来判断农药是利用生物体内提取出的某种生化物质进行的生化反应来判断农药 残留是否存在以及农药污染情况，在测定时样本无需经过净化，或净化比较简残留是否存在以及农药污染情况，在测定时样本无需经过净化，或净化比较简 单，检测速度快。生化检测法中又以酶抑制法和酶联免疫法应用最为广泛。单，检测速度快。生化检测法中又以酶抑制法和酶联免疫法应用最为广泛。 色谱快速检测

9、法色谱快速检测法通过尽可能的简化样品净化步骤，直接提取进样分析蔬菜和水通过尽可能的简化样品净化步骤，直接提取进样分析蔬菜和水 果中的有机磷类农药残留。上述快速检测方法在具体应用中可以根据实际情况果中的有机磷类农药残留。上述快速检测方法在具体应用中可以根据实际情况 和方法各自适用范围及优缺点来选择使用。和方法各自适用范围及优缺点来选择使用。 （五）农药残留主要检测方法（五）农药残留主要检测方法 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 传统的农残化学分析传统的农残化学分析主要是主要是气相气相或或液相色谱液相色谱等仪器等仪器 优点：优点：敏感敏感(10l2 106 moll) 、准确、准确 缺点：

10、缺点：操作复杂、费时及成本高。操作复杂、费时及成本高。 发展适合我国的快速检测技术发展适合我国的快速检测技术 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 u适合我国的农药残留快速检测方法适合我国的农药残留快速检测方法 生化检测生化检测 生物检测生物检测 化学比色法化学比色法 酶抑制法 免疫分析法 发光菌检测法 敏感家蝇检测法 速测仪 速测卡 主要为酶免疫法 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 酶抑制技术酶抑制技术是研究比较成熟、应用最广 泛快速的农药残留 检测技术，是根据有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯 酶（ache)的特异性生化反应建立起来的农药残留的微量和痕 量快速检测技术。 1、

11、速测卡法、速测卡法 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 “-”阴性（蓝色）阴性（蓝色） “+”弱阳性（淡蓝）弱阳性（淡蓝） “+”强阳性（白色）强阳性（白色） 速测卡检测结果速测卡检测结果 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 原理原理:在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶 正常功能有抑制作用，其正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关抑制率与农药的浓度呈正相关。酶酶 催化催化乙酰胆碱水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物乙酰胆碱水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物 质质。 用分光光度计在用分光光度计在412n

12、m处测定吸光度随时间的变化，计处测定吸光度随时间的变化，计 算出抑制率，通过算出抑制率，通过抑制率抑制率可以判断出样品中是否含有有机磷可以判断出样品中是否含有有机磷 或氨基甲酸酯类农药的存在。或氨基甲酸酯类农药的存在。 2、速测仪、速测仪 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 农药残留快速测试仪农药残留快速测试仪 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 判定依据 说明 抑制率小于等于50 合格 抑制率大于50超标，说明含有有机磷 或氨基甲酸酯类农药 抑制率与农药残留量成正相关，抑制率越高说明残留量抑制率与农药残留量成正相关，抑制率越高说明残留量 越高越高 速测仪检测结果 药物残留快速测定

13、方法药物残留快速测定方法 免疫分析技术 免疫分析技术免疫分析技术是将免疫反应与现代测试手段相结合而建 立的超微量分析技术，是基于抗原抗体特异性结合和反应 为基础的分析方法。 目前应用于农残检测的是酶免疫分析(eia)和放射性免疫 分析(ria)。其中酶联免疫分析技术应用最为普遍。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 3、酶联免疫技术 elisa是一种以酶作为标记物的免疫分析方 法，也是目前应用最广泛的免疫分析方法之一， 它将酶标记在抗体抗原分子上形成酶标抗体 酶标抗原，酶作用于能呈现出颜色的底物，通过 仪器或肉眼进行辨别。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 elisa法基本原理是

14、预先结合在固相载体上的抗体或抗原 分子与样品中的抗原或抗体分子在一定条件下进行免疫 学反应。 该法因不需昂贵仪器设备，对人体无害等优点而被广泛 采用，具有灵敏、特异、快速、稳定以及易于自动化操 作等特点。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 酶标板酶标板 u型型 96孔孔 目前，elisa方法常用的固相载体是96孔聚苯乙烯酶 标板，常用的酶是辣根过氧化物酶，常用的底物 是邻苯二胺和四甲基联苯胺等。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 4、发光菌检测法 农药与细菌作用后可影响细菌的发光程度，通过细 菌发光情况，可测出农药残留量。 此方法简便但是特异性差 药物残留快速测定方法药物残留快

15、速测定方法 5、敏感家蝇检测法 敏感家蝇对杀虫剂具有敏感性，记录家蝇存活情况，根据 家蝇的死亡率可知农药残留情况。 该技术方法直接、过程简单、容易掌握，但定性粗糙，只 对少数农药有效，而且由于其他生物对不同农药的毒性反 应与人畜可能不同，因此影响对农药残留量的判断。如家 蝇对毒性较低的除虫菊酯类敏感，远超过有机磷和氨基甲 酸酯类中毒或高毒的农药。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 6、化学比色法 目前常用的化学比色法包括各种检测试剂 和试纸，两者都是利用迅速产生明显颜色的化 学反应检测待测物质，可通过与标准比色卡比 较进行目视定性或半定量分析。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法

16、 化学比色分析法与一般的仪器分析方法相比，具有价格低，化学比色分析法与一般的仪器分析方法相比，具有价格低， 操作相对简便，结果显示直观，一次性使用，不需检修维操作相对简便，结果显示直观，一次性使用，不需检修维 护，有一定的灵敏度和专一性等优点。随着检测仪器的不护，有一定的灵敏度和专一性等优点。随着检测仪器的不 断发展，与其相配套的微型检测仪器也相应出现。如与试断发展，与其相配套的微型检测仪器也相应出现。如与试 剂检测方法相配套的剂检测方法相配套的微型光电比色计微型光电比色计目前已发展得比较成目前已发展得比较成 熟。熟。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 u 抗生素类：氯霉素、四环素、土

17、霉素、青霉素等；抗生素类：氯霉素、四环素、土霉素、青霉素等； u 磺胺类：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶等；磺胺类：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶等； u 呋喃类：呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等；呋喃类：呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等； u 激素和激素和- -兴奋剂：盐酸克伦特罗、己烯雌酚、孕酮等；兴奋剂：盐酸克伦特罗、己烯雌酚、孕酮等； u 抗寄生虫类：左旋咪唑、苯丙咪唑、克并咪唑、克球酚、吡喹酮等抗寄生虫类：左旋咪唑、苯丙咪唑、克并咪唑、克球酚、吡喹酮等 。 1.兽药残留的类型 兽药残留检测兽药残留检测 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 2、兽药残留的分析方法 兽药残留分析技术的特点兽药残留分析技

18、术的特点 u待测物质浓度低 u样品基质复杂，干扰物质多 u兽药残留代谢产物多样或不明 u动物种类多样，对药物代谢存在差异 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 对检测方法的要求对检测方法的要求 快速 高通量 定量 准确度和精确度 确证 理想的仪器装备理想的仪器装备 样品经简单处理即可上机 测定 不需萃取和净化 快速、准确的定量分析 自动的资料处理 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 分析方法的总体思路分析方法的总体思路 v高水平(level )方法确证和定量被分析物质 v中等水平(level )方法定量但不需要确证被 分析物质 v低水平(level )方法筛选 药物残留快速测定方法药

19、物残留快速测定方法 u 筛选方法筛选方法 u 检检测和确认方法：理化检验技术（测和确认方法：理化检验技术（gc、hplc、tlc、gc-ms、 hplc-ms等）。等）。 微生物检验（微生物抑制试验）微生物检验（微生物抑制试验） 免疫法（免疫检测试剂盒）免疫法（免疫检测试剂盒） 阳性阳性 u兽药残留的检验分析方法包括兽药残留的检验分析方法包括筛选、检测和确认筛选、检测和确认。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 uelisaelisa：简单、快速、灵敏度，但容易产生假阳性，一般只适用进行样品简单、快速、灵敏度，但容易产生假阳性，一般只适用进行样品 粗筛粗筛，阳性结果需进行确证。，阳性结果

20、需进行确证。 u gcgc：灵敏度较高，但大多数兽药极性或沸点偏高，需繁琐的衍生化步骤灵敏度较高，但大多数兽药极性或沸点偏高，需繁琐的衍生化步骤 ，限制了应用。，限制了应用。 uhplchplc：操作简单，但灵敏度不高；某些残留，检出限达不到要求。操作简单，但灵敏度不高；某些残留，检出限达不到要求。 u仪器联用：仪器联用：分离、定性、定量一体，灵敏、准确、选择性都高，是国际分离、定性、定量一体，灵敏、准确、选择性都高，是国际 公认的确认方法公认的确认方法。 gc/msgc/ms、lc/mslc/ms等等 兽药残留的分析方法 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 u gcgc灵敏度较高，但易

21、出现假阳性、阳性结果需进一步确证；灵敏度较高，但易出现假阳性、阳性结果需进一步确证；hplchplc 操作简单，但灵敏度不高；操作简单，但灵敏度不高；elisaelisa简单、快速、灵敏度，但容易产生简单、快速、灵敏度，但容易产生 假阳性，一般只适用进行样品粗筛，阳性结果需进行确证；目前灵假阳性，一般只适用进行样品粗筛，阳性结果需进行确证；目前灵 敏度较高、确证率较好的是敏度较高、确证率较好的是gc/msgc/ms、gs-ms/msgs-ms/ms 。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 gcgc和和gc-msgc-ms的区别的区别 gcgc是指气相色谱仪是指气相色谱仪 一般来说一般来说

22、 气象色谱仪使用的检测器气象色谱仪使用的检测器 有有npd fid npd fid fpd ecdfpd ecd等等等等. . 如果气象色谱器没加上述常用检测器如果气象色谱器没加上述常用检测器 而是用质谱当做检测器而是用质谱当做检测器 那么就那么就 是是gc-msgc-ms了，了， gc-msgc-ms一般指的是单级质谱一般指的是单级质谱 如果是二级质谱就是如果是二级质谱就是 gc-ms-ms gc-ms-ms了。了。 gcgc就是一个分离装置就是一个分离装置 严格说严格说 gc gc是没法单独用的是没法单独用的 必须加检测器必须加检测器 只不只不 过人们习惯吧过人们习惯吧 gc-fid gc

23、-fid 、gc-ecdgc-ecd、gc-fpdgc-fpd等等等等 简称为简称为gcgc而而已。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 质谱分析质谱分析 mass spectrometry，ms 质谱分析法是通过对被测样品离子的质荷比的测定来进行分析的 一种分析方法。 化合物分子受到电子流冲击后，形成的带正电荷分子离子及碎片离子， 按照其质量m和电荷z的比值m/z（质荷比）大小依次排列而被记录下来 的图谱，称为质谱。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 质谱分析的过程与原理质谱分析的过程与原理 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 1、进样、进样 化合物通过汽化引入离子化室；

24、化合物通过汽化引入离子化室； 2、离子化、离子化 在离子化室，组分分子被一束加速电子碰在离子化室，组分分子被一束加速电子碰 撞（能量约撞（能量约70ev），撞击使分子电离形），撞击使分子电离形 成正离子；成正离子； m m+ + e 或与电子结合，形成负离子或与电子结合，形成负离子 m + e m 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 3、离子也可因撞击强烈而形成碎片离子：、离子也可因撞击强烈而形成碎片离子： 4、荷电离子被加速电压加速，产生一定、荷电离子被加速电压加速，产生一定 的速度的速度v，与质量、电荷及加速电压有关：，与质量、电荷及加速电压有关： ) 1 ( 2 1 2 mvzh

25、药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 5、加速离子进入一个强度为、加速离子进入一个强度为h的磁场，发的磁场，发 生偏转，半径为：生偏转，半径为： )2( zh mv r 将（将（1）（）（2）合并：）合并： ) 3( 2 22 v rh z m 当当 r 为仪器设置不变时，改变加速电压或为仪器设置不变时，改变加速电压或 磁场强度，则不同磁场强度，则不同m/z的离子依次通过狭缝的离子依次通过狭缝 到达检测器，形成质量谱，简称质谱。到达检测器，形成质量谱，简称质谱。 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 不同的物质有不同的质量谱质谱，利用 这一性质，可以进行定性分析（包括分子质 量和相关结构信息）；谱峰强度也与它代表 的化合物含量有关，可以用于定量分析。 化合物化合物c5h12o 的质谱图的质谱图 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 gc-ms的基本流程的基本流程 药物残留快速测定方法药物残留快速测定方法 gc-msgc-ms联用的优缺点联用的优缺点 色谱仪有很强的色谱仪有很强的分