实训项目十五内标对比法测定对乙酰氨基酚的含量

1、实训项目十五内标对比法测定对乙酰氨基酚的含量一、实验目的1 掌握内标对比法的测定步骤和结果计算方法。2掌握样品、流动相的处理方法，掌握液相色谱仪维护基本知识。二、实验原理内标对比法是内标法的一种，是高效液相色谱法中最常用的定量分析方法之一。分别配制含有等量内标物的对照品溶液和试样溶液，经HPLC分析后，测得上述两溶液中待测组分（i）和内标物（is）的峰面积，按下式计算试样溶液中待测 组分的浓度Cj试样=Cj对照x对乙酰氨基酚（扑热息痛，PCM）为苯胺类解热镇痛药，是治疗发热、镇痛的首选药物之一。对乙酰氨基酚稀碱溶液在波长257 nm附近有最大吸收，可以用于定量测定。在其生产过程中，有可能引入对

2、氨基酚等中间体，这些杂质在 上述波长处也有紫外吸收，若采用紫外分光光度法测定含量，方法影响因素较多。为避免杂质干扰，本实验采用 HPLC内标对比法测定对乙酰氨基酚含量。三、主要仪器和试剂1. 仪器高效液相色谱仪；Ci8色谱柱（4.6 mmx 150mm，5 pm）;电子天平；容量瓶； 移液管。2 试剂对乙酰氨基酚对照品：非那西丁对照品；对乙酰氨基酚原料药；甲醇（色谱纯）；重蒸馏水；针头滤器（0.45pm，有机系）。四、操作步骤1 色谱条件色谱柱：C18色谱柱（4.6 mmx 150mm，5 pm）；流动相：甲醇-水（60: 40）；流速：0.6 mL/min;检测波长：257 nm；柱温：室温

3、；进样量：20此。2. 内标溶液的配制精密称取非那西丁对照品约0.2500g,用适量甲醇溶解后加入100 mL容量 瓶中，并稀释至刻度，摇匀即得内标溶液。3 对照品溶液的配制精密称取对乙酰氨基酚对照品约0.0050g,用适量甲醇溶解后加入 100 mL容量瓶中，再精密加入内标溶液 10.00 mL,用甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量 取1.00 mL,置50 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀即得。4. 试样溶液的配制精密称取对乙酰氨基酚样品约 0.0050g,用适量甲醇溶解后加入100 mL容 量瓶中，再精密加入内标溶液10.00mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取1.00 mL,置50

4、mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。5. 进样分析对乙酰氨基酚对照品溶液经0.45滤膜滤过。用微量注射器吸取滤液，过进样20丄。记录色谱图，重复3次。以同样方法分析试样溶液。五、数据记录与处理按下表记录峰面积，按下式计算对乙酰氨基酚的百分含量。W（ % 戶.x ：- L- 一丄如 对照样式中mi对照是对照溶液中组分i的量序号对照品溶液试样溶液AiAisAi/AisAiA isAi/Ais123平均值六、注意事项1. 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液经过滤后使 用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止滋生细菌变质。2. 实验中可通过选择适当长度的色谱柱， 调整流动相中甲醇和水的比例或流 速，使对乙酰氨基酚与内标物的分离度达到定量分析的要求3内标对比法是内标校正曲线法的应用。 若已知校正曲线通过原点， 并在一 定线性范围内， 则可用内标对比法测定。 该法只需配制一种与待测组分浓度接近 的对照品溶液， 并在对照品溶液与试液中加入等量内标 （可不必知道内标物的准 确加入量），即可在相同条件下进行测定。七、问题与讨论1比较