Waters高效液相色谱仪标准操作规程

1、1. 目的 描述Waters高效液相色谱仪标准操作规程 2. 适用范围 化验室 3. 责任者 化验员应严格遵照该操作规程，QC主管负责监督本规程的实施 4. 定义 HPLCHigh Performanee Liquid Chromatography ,高效液相色谱仪。 5. 安全注意事项 5.1 有机溶媒有害健康，各溶剂瓶口应封严。 5.2 注意检查废液桶中废液应避光，防止废液桶满外溢。 6. 规程 6.1. Waters HPLC的组成：贮液器 输液泵 自动进样器 分离柱（柱温箱） 紫外检测器 控制及数据处理系统（Millennium 32化学工作站）。 6.2. HPLC系统的打开及关闭顺

2、序 6.2.1 打开顺序 ?对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺 序打开开关，待各部分分别显示初始化完毕后，最后 打开Millenn ium 32化学工作站 。 泵与色谱工作站的连接：对于510泵，因 为 此泵与色谱工作站是 单向联系，如要使泵在Remote状态下由工作站控制，首先要在泵 的键盘上按 Menu键，待显示屏切换至Mode状态下，其状态是 Loea，按Edit/E nter键，在Local的L前有闪动的光标显示，按 键， Local转换成Rem，再按Edit/Enter键，此命令已输入进去,最后按 Stop/Run键，使泵处于Run状态这时泵和工作站的连接即告成功。泵 的

3、任何动作都可由工作站来控制。还应注意这一步工作在每次开机 时都要进行。 对于Allianee 2690系统：先打开Allianee 2690主机、检测器电源开关， 待初始化完毕后，再进入Mille nnium 32化学工作站。 对于流动相的要求：对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂；对于所 用到的固体试剂应采用分析纯试剂；对于水，应采用经纯水机处 理过的超纯水；流动相在使用前一定要经0.45 m的滤膜（滤膜分 为水相膜与有机相膜，确保使用正确的滤膜，参见附表）过滤、超声 真空脱气方可使用，严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。 应养成良好操作习惯： 规范操作，树立保护HPLC整套系统的概念，尤其对于输

4、液泵、色 谱柱、检测器，在使用后应及时冲洗，以免污染而使其寿命缩短或 损坏，尤其如操作者使用了含盐的流动相，更应注意清洗的步骤： 首先用脱过气的纯水在流速为1ml/min左右 冲洗3060分钟，再用 含50 %以上甲醇或乙腈的水溶液以相同的流速冲洗2030分钟左 右。 如要卸下柱子，在经过上述冲洗过程之后，再经纯甲醇或乙腈以 1ml/min的流速冲洗20 30分钟，柱子卸下后应马上拧紧柱堵。 流速的变化应采用阶梯式递增或递减的方式，启动泵时，应在2分 钟之内由小流速慢慢增大到所需的流速，泵关闭时亦然（流速递 减）。切忌流速的骤变。 6.2.2 关闭顺序 首先退出Millennium 32化学工

5、作站，再关闭系统的其他部分。 6.3. Millennium 32化学工作站 Mille nn ium 32色谱管理系统是集数据采集、处理、HPLC系统的控制、 结果的管理、报告的打印为一体的综合系统。下面就着重介绍该系 统的基本操作知识。 6.3.1 Millennium 32化学工作站的进入 打开化学工作站，系统自动进入Program Ma nager界面， 双击 Millennium 肖像，这 时进入 Millennium 界面， 双击 Session Manager 图 标，系统将自动初始化，以使工作站和HPLC整套系统进行联 接。初始化后，按系统要求键入你的User Name和Pas

6、sword,这时 你已进入该系统。 6.3.2 Project的进入和建立 ? Pro j ect 的 进 入： 在 Session M an ager 窗 口 下 ， 击 Project 肖 像 （或 从 Vi ew 中 选 择 Projects）, 在 其 中 有 已 建 好 的 Project， 双 击 你 所 需 的 Project 肖 像 ， 再 进 行 你 想 做 的 工 作 。 ? Proj ect 的 建 立 从 File 中 选 择 New， 即 显 示 New Project 的 画 面 。 在 Project Name 中 输 入 你 的 Project 名 称 。 在

7、Initiallze Project 项 目 中 选 择 Copy 中 的 filter and fields 或 Methods。 在 From Project 中 选 择 要 拷 贝 的 现 存 Project。 选 择 Tablespace size。 选 OK， 存 贮并 退出 。 当 Millennium 软 件 在 建 立 一 个 新 的 Project 时 ， 在 屏 幕 上 及 时 显 示 出 完 成建立新Project的百分比。当达到100%时,在SessionManager画面即 出 现 一 个新 的 Project 肖 像 。 6.3.3 收 集 数 据 的 一 般 过

8、程 使 用 Millennuium 32收 集 数 据 的 一 般 过 程 如 下 ：在 Project 窗 口 内 建 立 收 集 数 据 所 需 仪 器 的 仪 器 方 法； 建 立 包 括 此 仪 器 方 法 的 方 法 组；使用此方法组收集数据。 本 部 分 包 括： 建 立 仪 器 方法 ， 建 立 方 法 组 ， 收 集 样 品 。 ? 建 立 /修 改 仪 器 方 法 从 Sessoin Manager窗 口，打开 所需的 Project。 选 择 Method 按 钮 ， 现 存 的 方 法 的 肖 像即 出 现 在 屏 幕上 。 从 命 令 菜 单 中 选 择 File， 然

9、 后 选 择 其 中 的 New Instrument Method ， 即 出 现System Open对 话 框。 在 目 录 中 选 择 收 集 数 据 需 要 使 用 的 色 谱 硬 件 系 统 的 名 称 ， 如 ： System_1。 按 OK， 这 时 Instrument Method 窗 口 即 显 示 出 来 。 窗 口 的 上 部 分 是 该 系 统 的 所 有 仪 器 的 肖 像 。 用 鼠 标 器 将 需 要 设 定 仪 器 参 数 的 仪 器 部 件 激 活 ， 然 后 在 仪 器 肖 像 上 双 击 两 下 ， 即 出 现 Instrument Dialog Bo

10、x 画 面 。 对各个部件设置操作条件，或通过输入新的参数来更改以前的参 数 。 例 如 ： 定 义 泵 参 数 ， 先 双 击 SIM/PCM 的 肖 像 。 填 写 泵 参 数 ， 按 OK 。 当 所 有 参 数 设 置 完 成 后 ， 按 OK。 即 回 到 Instrument Method 窗 口 。 选 File 中 的 Save As 存 贮 仪 器 方 法 文 件 ， 如 有 需 要 ， 起 一 文 件 名 ， 按 OK。 选 择 File 中 的 Exit， 即 回 到 Project 窗 口 。 新 的 仪 器 方 法 肖 像 即 出 现 在 此窗口下。 ? 建 立 方

11、法 组 (M ethod S et) 仪 器 方 法 编 好 后 ， 必 须 存 于 一 方 法 组 中 ， 才 能 在 Quick Set Control 中 调用。 在 Project 窗 口 下 选 方 法 肖 像 。 选 File 中 的 New Method Set， 即 显 示 出 Method Set 对 话 框 。 在 此 画 面 的 Instrument Method 一 栏 ， 选 择 已 确 定 的 仪 器 方 法 。 其 他 项 目 可 空 着 不 填 。 然 后 选 File， Save As。 输 入 方 法 组 名 后 ， 按 OK。 选 File， Exit。

12、即 退 回 到 Project 窗 口 。 新 设 置 的 方 法 组 肖 像 即 出 现 在 此窗口下。 ? 收 集 样 品 ： 完 成 以 上 各 步 骤 后 ， 即 可 收 集 样 品 。 在 Project 窗 口 下 选 择 Quick Set Control 肖 像 。 出 现 System Open 对 话 框 。 选 择 建 立 仪 器 方 法 时 确 定 的 色 谱 硬 件 系 统 ， 按 OK。 即 出 现 Quick Set Control 窗 口 。 在 此 窗 口 下 的 Sample Loading Table 中 用 鼠 标 器 按 第 一 行 ， 这 时 Mil

13、lennium 软 件 会 自 动 填 充 各 项 初 始 参 数 。 通 过 输 入 新 值 可 更 改 表 中 的 各 项 参 数 ， 表 中 的 瓶 号(对 于 高 效 液 相 色 谱 仪 的 进 样 表 ，除 另 有 规 定 外 ， 按 括 号 法 安 排 进 样 顺 序 。 即 第 一 针 为 标 准 品 1作 为 系 统 适 用 性 共 进 6针 ， 要 求 RSD 不 大 于 2%， 随 后 为 标 准 品 2， 进 样 次 数 为 2针 ， 然 后 为 样 品 1 到 样 品 3， 各 进 2 针 。 样 品 3 后 为 标 准 品 1，依 次 类 推 ， 直 到 将 所 有

14、样 品 都 安 排 在 进 样 表 中 ) 进 样 次 数 ， 进 样 体 积，运行时间等项目对自动进样器有控制作用。 在 Method Set Report 一 列 中 选 择 在 前 面 刚 刚 建 立 的 方 法 组 。 在 运 行 方 式 ( mode )中 选 Run Only。 选 择 进 样 方 式： 菜 单 mode 下 选 单 个 样 品 或 样 品 组 进 样 将 Sample Loading Table 中 第 一 行 点 黑 。 击 Setup Instrument 按 钮 ， 启 动 系 统。 系 统 启 动后 可 击 baseline monitor 图 标， 即

15、可观 察 基 线 。 待 基 线 平 稳 后 ， 击 绿 灯 或 样 品 盘 肖 像 准 备 进 样 。 出 现 Injector wait 提 示 信 息 ，随 即 进 样。 在 样 品 测 试 过 程 中， 系统 会在 Quick Set 窗 口 下 显示 瓶 号 和进 样 次 数 及运行时间。并可在此窗口下观察检测器的输出情况。屏幕上显 示 的 检 测器 输 出 是 自 动满 量程 方 式 （即自 动 按 最 大 信号 满格 输 出 ）。 当 收 集 完 色 谱 数 据 后 ， 选 择 File， Exit。 退 出 Quick Set 窗 口 。 样 品 收 集 完 成 后， Mill

16、ennuium 32会自 动 存 贮 收 集 的 数 据。 6.3.4 建 立 数 据 处 理 的 方 法 在 Millennuium 32 中 ， 完 成 不 同 的 任 务 需 编 辑 不 同 的 方 法 ， 如 仪 器 方 法 （收 集 数 据 ）， 处 理 方 法 （定 性 定 量 分 析 ） ， 报 告 方 法 （ 打 印 实 验 报 告 ）等 。 本部分包括： *重 新调 出色 谱 峰 进 行 观察 。 *谱 图积 分及 确 定 积 分 表中 的 参 数 。 *输 入组 分表 资 料 。 *存 贮数 据处 理 方 法 。 ?调阅色谱图 进 入 在 其中 收 集 样 品 的 Proj

17、ect， 在 此 窗口 下 选 Channel 肖 像。 在 Channel View Table 中 选 择 欲 进 行 色 谱 分 析 的 文 件 行 并 使 其 变 黑。 在 Tools 下 选 择 Review 肖 像 ， 这 时 在 Review Data 窗 口 下 即 显 示 出 你 调 入的色谱图。 选 File ， New Method 。 在 New Method 对 话 框 中 指 定 数 据 处 理 的 类 型 ， 如 LC ， 选 OK 。 ?色谱图的积分 选 View ， Integration Table。 在 屏 幕 下 部 即 出 现 Integration

18、Event Table。 在 Peak Width， Minimum Area ， Minimum Height 方 框 中 输 入 适 宜 的 数 值 。 按 Integration 按 钮 ， 观 察 积 分 情 况 ， 并 适 当 进 行 积 分 参 数 的 调 整 。 ?输入组分资料 选 View ， Component Table。 即 可 见 到 空 的 组 分 表 。 选 Options， Fill Table From Result ， 即 可 自 动 填 充 积 分 完 毕 的 色 谱 图 的 组分表。也可用手动方式修改表中的参数。 按 Calibration/Quantit

19、ate 后 ， 选 View ， Result Table。 即 可 看 到 积 分 的 结 果。 ?存贮数据处理方法 在 Review Data 窗 口 下，选 File ， Save Method。 在 Processing Method Save As 对 话 框 的 窗 口 下输 入 数 据 处 理 方 法 名 称 。 按 OK ， 贮 存 Processing Method。 在 组 分 表 的 上 方 可 看 到 新 的 Processing Method 的 名 称 。 选 File， Exit。 即 可 退 出 Review Data 窗 口 ， 回 到 Project 窗 口

20、 。 6.3.5 重 新 观 察 色 谱 结 果 ? 进 入 你 所 需 的 Proj ect 窗口。击 R esul t Vi ew 肖 像 。 ? 在 R esul t Vi ew Tabl e 中 选择你想 观 察 的 色 谱 数 据 。 ? 击 Revi ew 肖 像 ， 你 所 选择的第 一 个 色 谱 数 据 的 谱 图将在 Revi ew Data 窗 口 下 ， 其结果将 显 示 在 Resul t Table中的第 一行。 ? 按 Next Ch/ In j 的 方 框 即 可 看 到 下 一 针 进 样 的 有 关 资 料 。 ? 选 Fi le， Ex it 。 即 可

21、回 到 Proj ect 窗 口 。 6.3.6 报 告 方 法 的 编 辑 及 试 验 报 告 的 打 印 ?启动报告出版系统 进入 “PROJECT”窗 口。 在 Views 下 按 一 下 方 法 肖 像。 选 择 File ， New Report Method。 这 时 即 可 编 辑 新 的 报 告 方 法。 在 报 告 排 版 窗 口 中， 右边 为 一张 模 拟的 白 纸， 左 上 方的 列 表为 排 版时 可放置 在 右边纸 上的项 目。 如 图谱， 积 分表， 样 品 信息， 仪 器 方法等，左下方为报告头标和脚标（如土。选择In dividual为每个 结 果 有 一 个

22、 报 告， 选 Summary of Result Sets All 方 式为 打 一个 集 中的 报 告。 按 OK 。 ? 设 计 报 告 格 式 按 一 下 Chromatogram Groups 肖 像。 在 Chromatogram Groups 列 表 中 选 择 Auto-scaled Chromatogram 。 并 在 报 告 页 面 上 按 一 下， 用 鼠 标 器 将 此 图 形放在 画面 合适的位 置上。 用 鼠 标 器 将 箭 头 放 在 画 面的 边 缘， 当箭 头 变 成双 箭 头 时 将 图形 放 大或缩 小。 选 择 Format， Landscape。 可将

23、 图谱 垂直放置。 按 一 下 Method Group 肖 像， 从 Method Group 的 列 表 中 选 择 Instrument Method， 并 在 报 告 页 面 上 的 合 适 处 按 一 下。 这 时 Instrument Method 方 框将出 现在 报 告 页面 上。 按 一 下 Table Groups 肖 像， 在 Table Groups ， 并 在 报 告 格 式上 的 合适 位 置上按 一下。 选 择 Format， Page Size。 可 改变 报告 尺寸的大 小。 选 择 Customize， Header。 即 出 现 Header 窗 口。 在

24、 此 窗 口 下 选 择 General information 肖 像。在 General information Field 列 表 中 按 一 下 Date。 这 时 在 Field Name的方框中即出现Date方框。可用鼠标器将此方框移动到合 适的 位 置。 可用文字，箭头，方框等工具在Header窗口下增加你感兴趣的内 容。 选File， Sava 输入Header的名称（如：My_Header，按0K，返回到 Header 窗 口。 选 File， Exit。 即 回 到 Report Publisher窗 口。 在 Customize， Footer。 即 出 现 Footer

25、 窗 口。 按 一 下 General information 肖 像， 在 General information Field 列 表 中 按 一 下 Page Number的方框。将此方框放在报告页面的注脚位置上。 选 File，Save。 输 入 Footer 的 名 称 （ 如： My_ Footer ）， 按 OK， 返 回 到 Footer 窗 口。 选 File， Exit 。 回 到 Report Publish 窗 口。 在 Footer 列 表 中 选 刚 编 好 的 脚 标。 ?存储报告方法 选File, Sava 输入此报告的方法名（如：My_ Report ）,按OK

26、,返回到 Report Publisher窗 口。 选File, Exit。 即回到PROJECT窗口。在此窗口下即可看到My_ Report 报告 方 法的 肖像。 ? 报 告 格 式 预 览： 报 告 格 式 设 计 好 后, 在 打 印 之 前, 可 在 此 预 先 看 到 打 印 效 果, 如 需 修 改 可 随 时 切 换 到 报 告 出 版 窗 口, 边 看 边 修 改, 直 到 满 意 为 止。 在 PROJECT 窗 口下，选 Result 肖像，即出现 Result View Table 表。 在 此 表 上选 择需要报 告的 结果 文件, 使其 变黑。 按一下 Previe

27、w 肖像，即出现 Report Method Selection窗 口。 从目 录 上选 择 刚 才已 建 立 好的 报 告 方 法， 按 OK。 这 时即 出 现刚才 所选结 果的 报告。 在上画面上按NextPage或PrevPage即可看到报告的下一页或上一页。 按 方 法 编辑 肖 像即 可 对当前 方法 进 行编辑。 按 打 印 肖 像， 即 可 将 此 报 告 打 印 出 来。 选择File，Exit。即可退出报告画面，回到“ PROJECT”窗口。 6.3.7 批量 进样 结果 的 处理及 打印 报告 ? 当 已 有 确 定 的 处 理 方 法 后 ， 可 用 此 方 法 处 理

28、 数 据 。 在 Channel View Table 表 中 选 择 你 要 的 样 品 行 并 将 其 按 黑 。 在 Tools 下 击 Processand Report 肖 像 。 这 时 即 出 现 Process and Report Options 对 话 框 。 在 处 理 方 法 一 栏 中 选 择 Use Specified Prosessing method 并 指 定 处 理 方 法 ， 把 Print 选 择 框 的 叉 扇 掉 。 按 OK。 这 时 开 始 处 理 你 所 选 的 数 据，在屏幕下方显示出Result Gen erator肖像。 按 Result View 肖 像 ， 处 理 后 的 数 据 即 出 现 在 Result View Table 中。 ?打印报