常用缓冲液配置

1、实验室常用缓冲液配置方案 1)1 M Tris-HCl (pH7 4,7. 6, 8、0) 组份浓度：1 M Tris-HCl 配制量：1 L 配制方法： 1、称1： 121.1 gTris置于1 L烧杯中。 2、加入约800ml得去离子水，充分搅拌溶解。 3、按下表量加入浓盐酸调节所需要得pH值。 PH值 浓HC1 7、4 约 70ml 7、6 约 60ml 8、0 约 42ml 4、将溶液泄容至1 L。 5、高温高压灭菌后，室温保存。 注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液得pH值随温度得变化差异很大，温 度每升髙1C,溶液得pH值大约降低0、03个单位。 2)10 xT

2、E Buffer (pH7 4,7、6,8、0) 组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量:1 L 配制方法： 1、量取下列溶液.置于IL烧杯中。 IM Tris-HCl Buffer(PH7. 4,7、6lmol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g于足量水中使终体积 为1L。 1 mol/L 磷酸二氢钠（ml） 1 mol/L 磷酸氢二钠（ml） 最终pH值 877 123 6、0 850 150 6、1 815 185 6. 2 775 225 6. 3 735 265 6. 4 685 315 6、5 625 375 6、6 565 435

3、6、7 510 490 6、8 450 550 6、9 390 610 7、0 330 670 7、1 280 720 7、2 TE（用于悬浮与贮存DNA） 成分及终浓度 配制100ml溶液各成分得用量 lOmmol/L Tris 一 HC1 1 mmol/L EDTA 水 1ml 1 mol/LTris-HCl(pH7. 4-8. 0.25C) 200U10. 5 mol/L EDTA(pH8. 0) 98、8ml Tris 缓冲液(Tris-HCl buffer) 将12lg得Tris緘溶解于约0.9L水中，再根据所要求得pH(25C下)加一上量得浓盐酸(11、6N) 用水调整终体积至lL

4、o 浓盐酸得体积(ml) pH 8、6 9、0 14 8、8 21 8、6 28、5 8、4 38 8、2 46 8、0 56 7、8 66 7、6 71、3 7、4 76 7、2 二. 电泳缓冲液、染料与凝胶加样液 电泳缓冲液 50 xTris-乙酸(TAE)缓冲液 成分及终浓度 配制1L溶液各成分得用量 2mol/LTris 碱 lmol/L乙酸 100 mmol/L EDTA 水 242g 57、1ml 得冰乙酸(17、4 mol/L) 200ml 得 0、5 mol/L EDTA(pH 8. 0) 补足IL SxTris-硼酸(TBE)缓冲液 成分及终浓度 配制IL溶液各成分得用量 4

5、45 mmol/L Tris 碱 445 mmol/L硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g硼酸 20 ml 得 0、5 mol/L EDTA(pH 8、0) 补足IL 染料 1%澳酚蓝(bromophenol blue) 加lg水溶性钠型渓酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1 %二甲苯青 FF(xylene cyanole FF) 溶解lg二甲苯青FF于足量水中,左容到lOOmlo 10mg/ml 得漠化乙锭(ethidium bromide) 小心称取lg浪化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解用铝 箔包裹装液管，于4C

6、贮存。 凝胶上样液(gel loading solutions) 6x碱性凝胶丄样液(童温贮存) 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0、3N氢氧化钠 6 mmol/L EDTA 18%聚蔗糖(400型) 0、15%浪甲酚绿 )、25%二甲苯青FF 300ul 10N氢氧化钠 120U1 0. 5mol/LEDTA(pH8 0) 1.8g 15mg 25mg 水I补足到1乔? 6x聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0、15%浪酚蓝 0、15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15%聚蔗糖（400型） 水 1、5ml 1%浪酚蓝 1、5ml 1

7、%二甲苯青 FF lOOulO、5mol/LEDTA(pH8. 0) l5g 补足到10ml 6x漠酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0、25%浪酚蓝 0、25%二甲苯青FF 15%聚蔗糖（400型） 水 2、5ml 1%浪酚蓝 2、5ml 1%二甲苯青 FF l5g 补足到10ml 6x甘油凝胶上样液（49贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0、15%?臭酚蓝 0、15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50%甘油 水 1、5ml 1%浪酚蓝 K 5ml 1%二甲苯青FF lOOulO. 5mol/LEDTA(pH8

8、 0) 3ml 3、9ml 6x蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0、15%浪酚蓝 0、15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40%聚蔗糖 水 1、5ml 1%淚酚蓝 1、5ml 1%二甲苯青 FF 100U10. 5mol/LEDTA(pH8. 0) 4g 补足到10ml 10 x十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 0、2%浪酚蓝 0、2%二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0. 1%SDS 50%甘油 水 20mg 20mg 4ml Ox 5mol/LEDTA(pH8、0) lOOul

9、 10% SDS 5ml 补足到10ml 三、常用培养基 1） LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白陈 log 酵母提取物 5g 氯化钠 10g 如果需要用INNaOH（lml）调整pH至7。再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L, 上层琼脂平板添加琼脂粉7g/Lo SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白腺 20g 酵母提取物 5g 氯化钠 0.5g 1 mol/L氯化钾 2、5 ml 用水补足体枳到1L.分成100ml得小份，髙压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml得小 份中加1ml灭过菌得lmol/L氯化镁。 2）SOC培养基 成分、方法同SOB培

10、养基得配制，只就是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml得小份中加 lml火过菌得lmol/L氯化镁外，再加2ml火菌得lmol/L匍萄糖（18g匍萄糖溶于足够水中，再 用水补足到100ml,用0、22um得滤膜过滤除菌）。 3）TB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白腺 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml 各组分溶解后高压火菌。冷却到60C,再加100ml火菌得170mmol/L KH2PO4/0. 72 mol/L K2HPO4得溶液（2、31g得KH2PO4与12、54gK2HPO4溶在足呈:得水中，使终体积为100ml。 高压灭菌或用0、22um得滤膜过滤除菌）。 4）

11、2xYT培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白陈 16g 酵母提取物 10g 氯化钠 4ml 如果需要用IN NaOH（lml）调整pH至7、0,再补足水至1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉12g/L. 上层琼脂平板添加琼脂粉7g/Lo 5）YPD培养基 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白陈 20g 酵母提取物 10g 匍萄糖 20g 用水补足体积为1L后，髙压火菌。建议在髙压火菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添 加1、6g色氨酸，因为YPD培养基就是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在髙压火菌 前加入20g琼脂粉。 四、常用抗生素 1) 氨节青霉素(ampicinin)(100m

12、g/ml) 溶解lg氨节青卷素钠盐于足量得水中，最后沱容至10ml分装成小份于-20C贮存。常以 25ug/ml-50ug/ml得终浓度添加于生长培养基。 2) 竣节青霉素(carbenicillin)(50mg/ml) 溶解0、5g竣节青霉素二钠盐于足量得水中，最后立容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常 以25ug/ml-50ug/ml得终浓度添加于生长培养基。 3) 甲氧西 (methicillin)(100mg/ml) 溶解lg甲氧西林钠于足量得水中，最后左容至10ml。分装成小份于-2(TC贮存。常以37、5ug/ml 终浓度与100iig/ml氨节青霍素一起添加于生长培养基。

13、4) 卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml) 溶解lOOmg卡那瞪素于足量得水中，最后泄容至10mL分装成小份于-20C贮存。常以 10ug/ml50ug/ml得终浓度添加于生长培养基。 5) 氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml) 溶解250mg氯霉素足屋得无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20C贮存。常以12、 5ug/ml25ug/ml得终浓度添加于生长培养基。 6) 链霉素(streptomycin)(50ing/ml) 溶解0、5g链靈素硫酸盐于足量得无水乙醇中，最后左容至lOmL分装成小份于-20C贮存。 常以10ug/ml50ug/ml得终浓度添加于生长培养基。 7) 蔡噪酮酸(nalidixic acid)(5mg/