牛肉膏蛋白胨培养基配方资料_第1页
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文档简介

1、精品文档牛肉膏蛋白胨培养基配方:牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养 基。它含有牛肉膏、蛋白胨和 nacl。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白 胨主要提供氮源,而 nacl 提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。 琼脂在常用浓度下 96时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化, 以免琼脂烧焦。琼脂在 40时凝固,通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量 根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。由于这种培养基多用于培养细菌(荤食),因此,要用稀酸或稀碱将其 ph 调至中性或微 碱性,以利于细菌的生长繁殖

2、。牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、nacl 5g、琼脂 1520g、水 1000ml、ph 7476(7.0 8.0)三、器材牛肉膏,蛋白胨, nacl,琼脂;1mol/l naoh, 1mol/l hcl;试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅, ph 试纸( ph 5590),棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等。四、操作步骤1称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、nacl 放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑 取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上,称量后直接 放入水中,这时如稍微加热,

3、牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸 潮,在称取时动作要迅速。另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称 取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错。2溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。 待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已 溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。 最后补足所失的水分。3调 ph在未调 ph 前,先用精密 ph 试纸测量培养基的原始 ph 值,如果 ph 偏酸,用滴管向培养 基中逐滴加入 1mol

4、/l naoh,边加边搅拌,并随时用 ph 试纸测其 ph 值,直至 ph 达 76。 反之,则用 1mol/l hcl 进行调节。注意 ph 值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响 培养基内各离子的浓度。对于有些要求 ph 值较精确的微生物,其 ph 的调节可用酸度计进行(使用方法,可参考有 关说明书)。4过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利结果的观察。一般无特殊要求的情况下,这一步可以省去 (本实验无需过滤)。5分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图-1。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。(1)液体分装分装高度以试管高度的

5、1/4 左右为宜。精品文档精品文档(2) 固体分装分装试管,其装量不超过管高的 1/5,灭菌后制成斜面,如图-2。分装三角烧 瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。(3) 半固体分装试管一般以试管高度的 1/3 为宜,灭菌后垂直待凝。6加塞培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而 造成污染,并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。7包扎加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉 塞,其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期 。三角烧瓶加塞后,外 包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好,使用时容易解

6、开,同样用记号笔注明培养基名称、组别、 日期。8灭菌将上述培养基以 105kg/cm2(15 磅/英寸 2),1213, 20 分钟高压蒸汽灭菌。如因 特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。9搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至 50左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过 试管总长的一半为宜。10无菌检查将灭菌的培养基放入 37的温室中培养 2448 小时,以检查灭菌是否彻底。pda 培养基配方:特点及用途pda 培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称,即 potato dextrose agar (medium ),依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。一种常用的培养基, 宜培

7、养酵母菌、 霉菌、蘑菇等真菌 (素食)。酵母菌 ph(3.86.0 ), 霉菌( 4.05.8 )等。按物理性状划分:固体培养基 ,按培养基成分划分:半合成培养基配方马铃薯 200 克 葡萄糖 20 克 琼脂 1520 克 自来水 1000 毫升 自然 ph配制步骤其做法是称取 200g 马铃薯,洗净去皮切成小块,加水煮烂(煮沸2030 分钟,能被玻璃棒戳破即 可),用四层纱布过滤,再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂,继续加热搅拌混匀,稍冷却后再补足水分至1000 毫升,分装试管,加塞、包扎, ( 121 )灭菌 20 分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。精品文档精品文档其他事项1. 培养基

8、经灭菌后,必须放在37c 温箱培养 24h ,无菌生长者方可使用。2.pda 培养基一般不需要调 ph 。对于要调节 ph 的培养基,一般用 ph 试纸测定其 ph 。如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmol lnaoh 或 lmol lhcl 溶液进行调节。调节时应逐滴加入 naoh 或 hcl 溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。3. 培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养。4. 培养基也可以加入氯霉素或土霉素,加入量为 的生长,减少干扰性0.1g/l 培养基,主要是为了抑制细菌高氏 1 号培养及配方:培养放线菌用 ,改良的高氏可溶性淀粉 2g ,kno3 0.1

9、g ,k2hpo4 0.05g ,mgso4 7h2o 0.05g , nacl 0.05g , feso4 7h2o 0.001g (母液),琼脂 2g ,自来水 100ml ,ph 7.2 7.4 ,灭菌 1.05kg/cm2 ,20min配制时, 先用少量冷水, 将淀粉调成糊状, 倒入少于所需水量的沸水中, 在火上加热, 边搅拌边依次逐一溶化其他成分, 溶化后,补足水分到 100ml ,调 ph ,121灭菌 20min 。高温灭菌后,倒平皿前加入 10% 酚 2 滴至 100ml 培养基中混匀,将培养基倒入平皿内 约 15ml/ 皿。高氏 1 号:可溶性淀粉(20g ),kno3(1g ),k2hpo4(0.5g ),mgso4 7h2o(0.

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