外科学(骨科)专业毕业论文[精品论文]滑膜成纤维细胞中促炎因子IL-6、VEGF影响骨关节炎病情进展的实验研究

1、外科学(骨科)专业毕业论文 精品论文 滑膜成纤维细胞中促炎因子il-6、vegf影响骨关节炎病情进展的实验研究关键词：滑膜成纤维细胞 骨关节炎 促炎因子 血管内皮细胞生长因子 白细胞介素 免疫组织化学 流式细胞分析术摘要：第一部分 il-6、vegf在膝骨关节炎患者关节滑膜和滑液中的表达及其意义 目的：检测不同阶段的膝骨关节炎(osteoarthritis，oa)患者关节滑膜组织和滑液中白细胞介素-6(interleukin-6，il-6)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，vegf)的表达情况，明确滑膜组织在oa发生发展过程中的作用，

2、评价vegf作为进展期oa标志的可行性。 方法：临床收集膝关节镜或关节置换手术患者的关节滑液和滑膜组织，根据x线平片的k-l分级进行分组。以k-l分级均为0级的单纯膝关节半月板损伤的患者作为对照组。酶联免疫吸附测定(erlzyme-linked immunosorbent assay，elisa)法检测各组关节液中il-6、vegf的含量，免疫组织化学染色方法检测il-6、vegf在滑膜组织中的原位表达。 结果：k-l ii、级的关节滑液中il-6水平显著增高，差异有统计学意义；而k-l iv级患者关节滑液中il-6水平下降接近对照组。各实验组的滑液中vegf水平逐级增高，明显高于对照组。oa

3、滑膜组织普遍存在不同程度的炎症，滑膜色泽变暗红，组织增生，甚至呈绒毛样增生改变。免疫组织化学染色显示，il-6在滑膜衬里层及衬里下层细胞表达；vegf在在滑膜衬里层及血管平滑肌细胞表达。 结论：关节滑膜参与了骨关节炎的病理过程，滑膜产生的il-6、vegf很可能就是导致滑膜自身炎症慢性化、持续化的主要因素。滑液中vegf水平的持续升高可作为判断oa病情活动的一个指标。 第二部分 il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞生物学行为的影响 目的：观察il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞(fibroblastlike synoviocyte，fls)生物学行为的影响，探讨滑膜组织参与关节软骨破坏的作用机

4、制。 方法：首先对关节置换手术切除的oa滑膜组织作原代细胞培养，通过流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90抗原的表达情况对细胞进行鉴定。对3-5代的fls分别予以不同浓度的il-6、il-1以及il-6+il-1刺激，elisa法检测细胞上清液中vegf、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinases，mmp-13)的含量，逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，rt-pcr)检测il-6诱导的fls中vegf、mmp-13的mrna表达。 结果：流式细胞仪检测细胞表面cd3、c

5、d14、cd90表达，结果：cd90+为95.62，cd3+为2.64，cd14+为3.44，符合成纤维样细胞的特征。elisa和rt-pcr检测结果表明，单独应用il-6刺激fls，上清液中vegf的含量有所增加，而mmp-13的水平则无明显变化；单独应用il-1刺激fls，上清液中vegf、mmp-13的含量明显升高；二者联合使用，vegf、mmp-13的含量升高最显著。 结论：il-6本身诱导fls合成与分泌vegf、mmp-13的能力并不强，但是能协同il-1放大oa-fls的分泌功能。il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌mmp-13增加，从一个方面揭示了滑膜组织参与关节软骨降解

6、的途径；il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌vegf增加，则说明了滑膜组织的炎症反应能够持续性存在的部分原因。 第三部分 p38mapk抑制剂对滑膜成纤维样细胞表达vegf、mmp-13的影响及应用前景分析 目的：研究il-6参与oa关节病变的信号传导通路，探讨p38mapk选择性抑制剂应用于oa治疗的可能性。 方法：1.对il-6+il-1诱导的3-5代的fls分别予以不同浓度的p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen actived proteinkinase，p38mapk)选择性抑制剂sb220025进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达

7、。2.分别用sb220025、地塞米松、美洛昔康对il-1、il-6诱导的fls进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。 结果：0.25ug/ml的sb220025就己充分显示出其对vegf、mmp-13的表达的强烈抑制，而且随着剂量的增加效果更明显。sb-220025对vegf的表达的抑制效果强于美洛昔康、地塞米松；对mmp-13表达的抑制效果远远强于美洛昔康、地塞米松。 结论：il-6、il-1诱导的fls中vegf、mmp-13的表达需要p38mapk通路的激活，sb-220025可以剂量依赖方式阻断这一效应。体外试验支持p38mapk选择性抑制

8、剂可以应用于oa治疗，效果强于美洛昔康、地塞米松。正文内容 第一部分 il-6、vegf在膝骨关节炎患者关节滑膜和滑液中的表达及其意义 目的：检测不同阶段的膝骨关节炎(osteoarthritis，oa)患者关节滑膜组织和滑液中白细胞介素-6(interleukin-6，il-6)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，vegf)的表达情况，明确滑膜组织在oa发生发展过程中的作用，评价vegf作为进展期oa标志的可行性。 方法：临床收集膝关节镜或关节置换手术患者的关节滑液和滑膜组织，根据x线平片的k-l分级进行分组。以k-l分级均为0级的单

9、纯膝关节半月板损伤的患者作为对照组。酶联免疫吸附测定(erlzyme-linked immunosorbent assay，elisa)法检测各组关节液中il-6、vegf的含量，免疫组织化学染色方法检测il-6、vegf在滑膜组织中的原位表达。 结果：k-l ii、级的关节滑液中il-6水平显著增高，差异有统计学意义；而k-l iv级患者关节滑液中il-6水平下降接近对照组。各实验组的滑液中vegf水平逐级增高，明显高于对照组。oa滑膜组织普遍存在不同程度的炎症，滑膜色泽变暗红，组织增生，甚至呈绒毛样增生改变。免疫组织化学染色显示，il-6在滑膜衬里层及衬里下层细胞表达；vegf在在滑膜衬里

10、层及血管平滑肌细胞表达。 结论：关节滑膜参与了骨关节炎的病理过程，滑膜产生的il-6、vegf很可能就是导致滑膜自身炎症慢性化、持续化的主要因素。滑液中vegf水平的持续升高可作为判断oa病情活动的一个指标。 第二部分 il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞生物学行为的影响 目的：观察il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞(fibroblastlike synoviocyte，fls)生物学行为的影响，探讨滑膜组织参与关节软骨破坏的作用机制。 方法：首先对关节置换手术切除的oa滑膜组织作原代细胞培养，通过流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90抗原的表达情况对细胞进行鉴定。对3-5代的fl

11、s分别予以不同浓度的il-6、il-1以及il-6+il-1刺激，elisa法检测细胞上清液中vegf、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinases，mmp-13)的含量，逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，rt-pcr)检测il-6诱导的fls中vegf、mmp-13的mrna表达。 结果：流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90表达，结果：cd90+为95.62，cd3+为2.64，cd14+为3.44，符合成纤维样细胞的特征。elisa和rt-pcr检测结果表明，单独应

12、用il-6刺激fls，上清液中vegf的含量有所增加，而mmp-13的水平则无明显变化；单独应用il-1刺激fls，上清液中vegf、mmp-13的含量明显升高；二者联合使用，vegf、mmp-13的含量升高最显著。 结论：il-6本身诱导fls合成与分泌vegf、mmp-13的能力并不强，但是能协同il-1放大oa-fls的分泌功能。il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌mmp-13增加，从一个方面揭示了滑膜组织参与关节软骨降解的途径；il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌vegf增加，则说明了滑膜组织的炎症反应能够持续性存在的部分原因。 第三部分 p38mapk抑制剂对滑膜成纤维样

13、细胞表达vegf、mmp-13的影响及应用前景分析 目的：研究il-6参与oa关节病变的信号传导通路，探讨p38mapk选择性抑制剂应用于oa治疗的可能性。 方法：1.对il-6+il-1诱导的3-5代的fls分别予以不同浓度的p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen actived proteinkinase，p38mapk)选择性抑制剂sb220025进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。2.分别用sb220025、地塞米松、美洛昔康对il-1、il-6诱导的fls进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。

14、 结果：0.25ug/ml的sb220025就己充分显示出其对vegf、mmp-13的表达的强烈抑制，而且随着剂量的增加效果更明显。sb-220025对vegf的表达的抑制效果强于美洛昔康、地塞米松；对mmp-13表达的抑制效果远远强于美洛昔康、地塞米松。 结论：il-6、il-1诱导的fls中vegf、mmp-13的表达需要p38mapk通路的激活，sb-220025可以剂量依赖方式阻断这一效应。体外试验支持p38mapk选择性抑制剂可以应用于oa治疗，效果强于美洛昔康、地塞米松。第一部分 il-6、vegf在膝骨关节炎患者关节滑膜和滑液中的表达及其意义 目的：检测不同阶段的膝骨关节炎(os

15、teoarthritis，oa)患者关节滑膜组织和滑液中白细胞介素-6(interleukin-6，il-6)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，vegf)的表达情况，明确滑膜组织在oa发生发展过程中的作用，评价vegf作为进展期oa标志的可行性。 方法：临床收集膝关节镜或关节置换手术患者的关节滑液和滑膜组织，根据x线平片的k-l分级进行分组。以k-l分级均为0级的单纯膝关节半月板损伤的患者作为对照组。酶联免疫吸附测定(erlzyme-linked immunosorbent assay，elisa)法检测各组关节液中il-6、vegf

16、的含量，免疫组织化学染色方法检测il-6、vegf在滑膜组织中的原位表达。 结果：k-l ii、级的关节滑液中il-6水平显著增高，差异有统计学意义；而k-l iv级患者关节滑液中il-6水平下降接近对照组。各实验组的滑液中vegf水平逐级增高，明显高于对照组。oa滑膜组织普遍存在不同程度的炎症，滑膜色泽变暗红，组织增生，甚至呈绒毛样增生改变。免疫组织化学染色显示，il-6在滑膜衬里层及衬里下层细胞表达；vegf在在滑膜衬里层及血管平滑肌细胞表达。 结论：关节滑膜参与了骨关节炎的病理过程，滑膜产生的il-6、vegf很可能就是导致滑膜自身炎症慢性化、持续化的主要因素。滑液中vegf水平的持续升

17、高可作为判断oa病情活动的一个指标。 第二部分 il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞生物学行为的影响 目的：观察il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞(fibroblastlike synoviocyte，fls)生物学行为的影响，探讨滑膜组织参与关节软骨破坏的作用机制。 方法：首先对关节置换手术切除的oa滑膜组织作原代细胞培养，通过流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90抗原的表达情况对细胞进行鉴定。对3-5代的fls分别予以不同浓度的il-6、il-1以及il-6+il-1刺激，elisa法检测细胞上清液中vegf、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinas

18、es，mmp-13)的含量，逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，rt-pcr)检测il-6诱导的fls中vegf、mmp-13的mrna表达。 结果：流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90表达，结果：cd90+为95.62，cd3+为2.64，cd14+为3.44，符合成纤维样细胞的特征。elisa和rt-pcr检测结果表明，单独应用il-6刺激fls，上清液中vegf的含量有所增加，而mmp-13的水平则无明显变化；单独应用il-1刺激fls，上清液中vegf、mmp-13的含量明显升高；二者联合使

19、用，vegf、mmp-13的含量升高最显著。 结论：il-6本身诱导fls合成与分泌vegf、mmp-13的能力并不强，但是能协同il-1放大oa-fls的分泌功能。il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌mmp-13增加，从一个方面揭示了滑膜组织参与关节软骨降解的途径；il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌vegf增加，则说明了滑膜组织的炎症反应能够持续性存在的部分原因。 第三部分 p38mapk抑制剂对滑膜成纤维样细胞表达vegf、mmp-13的影响及应用前景分析 目的：研究il-6参与oa关节病变的信号传导通路，探讨p38mapk选择性抑制剂应用于oa治疗的可能性。 方法：1.对i

20、l-6+il-1诱导的3-5代的fls分别予以不同浓度的p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen actived proteinkinase，p38mapk)选择性抑制剂sb220025进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。2.分别用sb220025、地塞米松、美洛昔康对il-1、il-6诱导的fls进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。 结果：0.25ug/ml的sb220025就己充分显示出其对vegf、mmp-13的表达的强烈抑制，而且随着剂量的增加效果更明显。sb-220025对vegf的表达的抑制

21、效果强于美洛昔康、地塞米松；对mmp-13表达的抑制效果远远强于美洛昔康、地塞米松。 结论：il-6、il-1诱导的fls中vegf、mmp-13的表达需要p38mapk通路的激活，sb-220025可以剂量依赖方式阻断这一效应。体外试验支持p38mapk选择性抑制剂可以应用于oa治疗，效果强于美洛昔康、地塞米松。第一部分 il-6、vegf在膝骨关节炎患者关节滑膜和滑液中的表达及其意义 目的：检测不同阶段的膝骨关节炎(osteoarthritis，oa)患者关节滑膜组织和滑液中白细胞介素-6(interleukin-6，il-6)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelia

22、l growth factor，vegf)的表达情况，明确滑膜组织在oa发生发展过程中的作用，评价vegf作为进展期oa标志的可行性。 方法：临床收集膝关节镜或关节置换手术患者的关节滑液和滑膜组织，根据x线平片的k-l分级进行分组。以k-l分级均为0级的单纯膝关节半月板损伤的患者作为对照组。酶联免疫吸附测定(erlzyme-linked immunosorbent assay，elisa)法检测各组关节液中il-6、vegf的含量，免疫组织化学染色方法检测il-6、vegf在滑膜组织中的原位表达。 结果：k-l ii、级的关节滑液中il-6水平显著增高，差异有统计学意义；而k-l iv级患者关

23、节滑液中il-6水平下降接近对照组。各实验组的滑液中vegf水平逐级增高，明显高于对照组。oa滑膜组织普遍存在不同程度的炎症，滑膜色泽变暗红，组织增生，甚至呈绒毛样增生改变。免疫组织化学染色显示，il-6在滑膜衬里层及衬里下层细胞表达；vegf在在滑膜衬里层及血管平滑肌细胞表达。 结论：关节滑膜参与了骨关节炎的病理过程，滑膜产生的il-6、vegf很可能就是导致滑膜自身炎症慢性化、持续化的主要因素。滑液中vegf水平的持续升高可作为判断oa病情活动的一个指标。 第二部分 il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞生物学行为的影响 目的：观察il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞(fibroblastl

24、ike synoviocyte，fls)生物学行为的影响，探讨滑膜组织参与关节软骨破坏的作用机制。 方法：首先对关节置换手术切除的oa滑膜组织作原代细胞培养，通过流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90抗原的表达情况对细胞进行鉴定。对3-5代的fls分别予以不同浓度的il-6、il-1以及il-6+il-1刺激，elisa法检测细胞上清液中vegf、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinases，mmp-13)的含量，逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，rt-pcr)检测il-

25、6诱导的fls中vegf、mmp-13的mrna表达。 结果：流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90表达，结果：cd90+为95.62，cd3+为2.64，cd14+为3.44，符合成纤维样细胞的特征。elisa和rt-pcr检测结果表明，单独应用il-6刺激fls，上清液中vegf的含量有所增加，而mmp-13的水平则无明显变化；单独应用il-1刺激fls，上清液中vegf、mmp-13的含量明显升高；二者联合使用，vegf、mmp-13的含量升高最显著。 结论：il-6本身诱导fls合成与分泌vegf、mmp-13的能力并不强，但是能协同il-1放大oa-fls的分泌功能。il-

26、6促使il-1诱导的fls合成与分泌mmp-13增加，从一个方面揭示了滑膜组织参与关节软骨降解的途径；il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌vegf增加，则说明了滑膜组织的炎症反应能够持续性存在的部分原因。 第三部分 p38mapk抑制剂对滑膜成纤维样细胞表达vegf、mmp-13的影响及应用前景分析 目的：研究il-6参与oa关节病变的信号传导通路，探讨p38mapk选择性抑制剂应用于oa治疗的可能性。 方法：1.对il-6+il-1诱导的3-5代的fls分别予以不同浓度的p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen actived proteinkinase，p38mapk)选择性抑制剂s

27、b220025进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。2.分别用sb220025、地塞米松、美洛昔康对il-1、il-6诱导的fls进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。 结果：0.25ug/ml的sb220025就己充分显示出其对vegf、mmp-13的表达的强烈抑制，而且随着剂量的增加效果更明显。sb-220025对vegf的表达的抑制效果强于美洛昔康、地塞米松；对mmp-13表达的抑制效果远远强于美洛昔康、地塞米松。 结论：il-6、il-1诱导的fls中vegf、mmp-13的表达需要p38mapk通

28、路的激活，sb-220025可以剂量依赖方式阻断这一效应。体外试验支持p38mapk选择性抑制剂可以应用于oa治疗，效果强于美洛昔康、地塞米松。第一部分 il-6、vegf在膝骨关节炎患者关节滑膜和滑液中的表达及其意义 目的：检测不同阶段的膝骨关节炎(osteoarthritis，oa)患者关节滑膜组织和滑液中白细胞介素-6(interleukin-6，il-6)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，vegf)的表达情况，明确滑膜组织在oa发生发展过程中的作用，评价vegf作为进展期oa标志的可行性。 方法：临床收集膝关节镜或关节置换手术

29、患者的关节滑液和滑膜组织，根据x线平片的k-l分级进行分组。以k-l分级均为0级的单纯膝关节半月板损伤的患者作为对照组。酶联免疫吸附测定(erlzyme-linked immunosorbent assay，elisa)法检测各组关节液中il-6、vegf的含量，免疫组织化学染色方法检测il-6、vegf在滑膜组织中的原位表达。 结果：k-l ii、级的关节滑液中il-6水平显著增高，差异有统计学意义；而k-l iv级患者关节滑液中il-6水平下降接近对照组。各实验组的滑液中vegf水平逐级增高，明显高于对照组。oa滑膜组织普遍存在不同程度的炎症，滑膜色泽变暗红，组织增生，甚至呈绒毛样增生改变

30、。免疫组织化学染色显示，il-6在滑膜衬里层及衬里下层细胞表达；vegf在在滑膜衬里层及血管平滑肌细胞表达。 结论：关节滑膜参与了骨关节炎的病理过程，滑膜产生的il-6、vegf很可能就是导致滑膜自身炎症慢性化、持续化的主要因素。滑液中vegf水平的持续升高可作为判断oa病情活动的一个指标。 第二部分 il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞生物学行为的影响 目的：观察il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞(fibroblastlike synoviocyte，fls)生物学行为的影响，探讨滑膜组织参与关节软骨破坏的作用机制。 方法：首先对关节置换手术切除的oa滑膜组织作原代细胞培养，通过流式细胞仪

31、检测细胞表面cd3、cd14、cd90抗原的表达情况对细胞进行鉴定。对3-5代的fls分别予以不同浓度的il-6、il-1以及il-6+il-1刺激，elisa法检测细胞上清液中vegf、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinases，mmp-13)的含量，逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，rt-pcr)检测il-6诱导的fls中vegf、mmp-13的mrna表达。 结果：流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90表达，结果：cd90+为95.62，cd3+为2.64，cd1

32、4+为3.44，符合成纤维样细胞的特征。elisa和rt-pcr检测结果表明，单独应用il-6刺激fls，上清液中vegf的含量有所增加，而mmp-13的水平则无明显变化；单独应用il-1刺激fls，上清液中vegf、mmp-13的含量明显升高；二者联合使用，vegf、mmp-13的含量升高最显著。 结论：il-6本身诱导fls合成与分泌vegf、mmp-13的能力并不强，但是能协同il-1放大oa-fls的分泌功能。il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌mmp-13增加，从一个方面揭示了滑膜组织参与关节软骨降解的途径；il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌vegf增加，则说明了滑膜组

33、织的炎症反应能够持续性存在的部分原因。 第三部分 p38mapk抑制剂对滑膜成纤维样细胞表达vegf、mmp-13的影响及应用前景分析 目的：研究il-6参与oa关节病变的信号传导通路，探讨p38mapk选择性抑制剂应用于oa治疗的可能性。 方法：1.对il-6+il-1诱导的3-5代的fls分别予以不同浓度的p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen actived proteinkinase，p38mapk)选择性抑制剂sb220025进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。2.分别用sb220025、地塞米松、美洛昔康对il-1、il-6诱导的fl

34、s进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。 结果：0.25ug/ml的sb220025就己充分显示出其对vegf、mmp-13的表达的强烈抑制，而且随着剂量的增加效果更明显。sb-220025对vegf的表达的抑制效果强于美洛昔康、地塞米松；对mmp-13表达的抑制效果远远强于美洛昔康、地塞米松。 结论：il-6、il-1诱导的fls中vegf、mmp-13的表达需要p38mapk通路的激活，sb-220025可以剂量依赖方式阻断这一效应。体外试验支持p38mapk选择性抑制剂可以应用于oa治疗，效果强于美洛昔康、地塞米松。第一部分 il-6、vegf

35、在膝骨关节炎患者关节滑膜和滑液中的表达及其意义 目的：检测不同阶段的膝骨关节炎(osteoarthritis，oa)患者关节滑膜组织和滑液中白细胞介素-6(interleukin-6，il-6)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，vegf)的表达情况，明确滑膜组织在oa发生发展过程中的作用，评价vegf作为进展期oa标志的可行性。 方法：临床收集膝关节镜或关节置换手术患者的关节滑液和滑膜组织，根据x线平片的k-l分级进行分组。以k-l分级均为0级的单纯膝关节半月板损伤的患者作为对照组。酶联免疫吸附测定(erlzyme-linked im

36、munosorbent assay，elisa)法检测各组关节液中il-6、vegf的含量，免疫组织化学染色方法检测il-6、vegf在滑膜组织中的原位表达。 结果：k-l ii、级的关节滑液中il-6水平显著增高，差异有统计学意义；而k-l iv级患者关节滑液中il-6水平下降接近对照组。各实验组的滑液中vegf水平逐级增高，明显高于对照组。oa滑膜组织普遍存在不同程度的炎症，滑膜色泽变暗红，组织增生，甚至呈绒毛样增生改变。免疫组织化学染色显示，il-6在滑膜衬里层及衬里下层细胞表达；vegf在在滑膜衬里层及血管平滑肌细胞表达。 结论：关节滑膜参与了骨关节炎的病理过程，滑膜产生的il-6、v

37、egf很可能就是导致滑膜自身炎症慢性化、持续化的主要因素。滑液中vegf水平的持续升高可作为判断oa病情活动的一个指标。 第二部分 il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞生物学行为的影响 目的：观察il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞(fibroblastlike synoviocyte，fls)生物学行为的影响，探讨滑膜组织参与关节软骨破坏的作用机制。 方法：首先对关节置换手术切除的oa滑膜组织作原代细胞培养，通过流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90抗原的表达情况对细胞进行鉴定。对3-5代的fls分别予以不同浓度的il-6、il-1以及il-6+il-1刺激，elisa法检测细胞上

38、清液中vegf、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinases，mmp-13)的含量，逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，rt-pcr)检测il-6诱导的fls中vegf、mmp-13的mrna表达。 结果：流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90表达，结果：cd90+为95.62，cd3+为2.64，cd14+为3.44，符合成纤维样细胞的特征。elisa和rt-pcr检测结果表明，单独应用il-6刺激fls，上清液中vegf的含量有所增加，而mmp-13的水平则无明显变化；

39、单独应用il-1刺激fls，上清液中vegf、mmp-13的含量明显升高；二者联合使用，vegf、mmp-13的含量升高最显著。 结论：il-6本身诱导fls合成与分泌vegf、mmp-13的能力并不强，但是能协同il-1放大oa-fls的分泌功能。il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌mmp-13增加，从一个方面揭示了滑膜组织参与关节软骨降解的途径；il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌vegf增加，则说明了滑膜组织的炎症反应能够持续性存在的部分原因。 第三部分 p38mapk抑制剂对滑膜成纤维样细胞表达vegf、mmp-13的影响及应用前景分析 目的：研究il-6参与oa关节病变的

40、信号传导通路，探讨p38mapk选择性抑制剂应用于oa治疗的可能性。 方法：1.对il-6+il-1诱导的3-5代的fls分别予以不同浓度的p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen actived proteinkinase，p38mapk)选择性抑制剂sb220025进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。2.分别用sb220025、地塞米松、美洛昔康对il-1、il-6诱导的fls进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。 结果：0.25ug/ml的sb220025就己充分显示出其对vegf、mmp-13的表

41、达的强烈抑制，而且随着剂量的增加效果更明显。sb-220025对vegf的表达的抑制效果强于美洛昔康、地塞米松；对mmp-13表达的抑制效果远远强于美洛昔康、地塞米松。 结论：il-6、il-1诱导的fls中vegf、mmp-13的表达需要p38mapk通路的激活，sb-220025可以剂量依赖方式阻断这一效应。体外试验支持p38mapk选择性抑制剂可以应用于oa治疗，效果强于美洛昔康、地塞米松。第一部分 il-6、vegf在膝骨关节炎患者关节滑膜和滑液中的表达及其意义 目的：检测不同阶段的膝骨关节炎(osteoarthritis，oa)患者关节滑膜组织和滑液中白细胞介素-6(interleu

42、kin-6，il-6)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，vegf)的表达情况，明确滑膜组织在oa发生发展过程中的作用，评价vegf作为进展期oa标志的可行性。 方法：临床收集膝关节镜或关节置换手术患者的关节滑液和滑膜组织，根据x线平片的k-l分级进行分组。以k-l分级均为0级的单纯膝关节半月板损伤的患者作为对照组。酶联免疫吸附测定(erlzyme-linked immunosorbent assay，elisa)法检测各组关节液中il-6、vegf的含量，免疫组织化学染色方法检测il-6、vegf在滑膜组织中的原位表达。 结果：k-l

43、 ii、级的关节滑液中il-6水平显著增高，差异有统计学意义；而k-l iv级患者关节滑液中il-6水平下降接近对照组。各实验组的滑液中vegf水平逐级增高，明显高于对照组。oa滑膜组织普遍存在不同程度的炎症，滑膜色泽变暗红，组织增生，甚至呈绒毛样增生改变。免疫组织化学染色显示，il-6在滑膜衬里层及衬里下层细胞表达；vegf在在滑膜衬里层及血管平滑肌细胞表达。 结论：关节滑膜参与了骨关节炎的病理过程，滑膜产生的il-6、vegf很可能就是导致滑膜自身炎症慢性化、持续化的主要因素。滑液中vegf水平的持续升高可作为判断oa病情活动的一个指标。 第二部分 il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞生物

44、学行为的影响 目的：观察il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞(fibroblastlike synoviocyte，fls)生物学行为的影响，探讨滑膜组织参与关节软骨破坏的作用机制。 方法：首先对关节置换手术切除的oa滑膜组织作原代细胞培养，通过流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90抗原的表达情况对细胞进行鉴定。对3-5代的fls分别予以不同浓度的il-6、il-1以及il-6+il-1刺激，elisa法检测细胞上清液中vegf、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinases，mmp-13)的含量，逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcript

45、ion-polymerase chain reaction，rt-pcr)检测il-6诱导的fls中vegf、mmp-13的mrna表达。 结果：流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90表达，结果：cd90+为95.62，cd3+为2.64，cd14+为3.44，符合成纤维样细胞的特征。elisa和rt-pcr检测结果表明，单独应用il-6刺激fls，上清液中vegf的含量有所增加，而mmp-13的水平则无明显变化；单独应用il-1刺激fls，上清液中vegf、mmp-13的含量明显升高；二者联合使用，vegf、mmp-13的含量升高最显著。 结论：il-6本身诱导fls合成与分泌ve

46、gf、mmp-13的能力并不强，但是能协同il-1放大oa-fls的分泌功能。il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌mmp-13增加，从一个方面揭示了滑膜组织参与关节软骨降解的途径；il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌vegf增加，则说明了滑膜组织的炎症反应能够持续性存在的部分原因。 第三部分 p38mapk抑制剂对滑膜成纤维样细胞表达vegf、mmp-13的影响及应用前景分析 目的：研究il-6参与oa关节病变的信号传导通路，探讨p38mapk选择性抑制剂应用于oa治疗的可能性。 方法：1.对il-6+il-1诱导的3-5代的fls分别予以不同浓度的p38丝裂原活化蛋白激酶(mit

47、ogen actived proteinkinase，p38mapk)选择性抑制剂sb220025进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。2.分别用sb220025、地塞米松、美洛昔康对il-1、il-6诱导的fls进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。 结果：0.25ug/ml的sb220025就己充分显示出其对vegf、mmp-13的表达的强烈抑制，而且随着剂量的增加效果更明显。sb-220025对vegf的表达的抑制效果强于美洛昔康、地塞米松；对mmp-13表达的抑制效果远远强于美洛昔康、地塞米松。 结

48、论：il-6、il-1诱导的fls中vegf、mmp-13的表达需要p38mapk通路的激活，sb-220025可以剂量依赖方式阻断这一效应。体外试验支持p38mapk选择性抑制剂可以应用于oa治疗，效果强于美洛昔康、地塞米松。第一部分 il-6、vegf在膝骨关节炎患者关节滑膜和滑液中的表达及其意义 目的：检测不同阶段的膝骨关节炎(osteoarthritis，oa)患者关节滑膜组织和滑液中白细胞介素-6(interleukin-6，il-6)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，vegf)的表达情况，明确滑膜组织在oa发生发展过程中的

49、作用，评价vegf作为进展期oa标志的可行性。 方法：临床收集膝关节镜或关节置换手术患者的关节滑液和滑膜组织，根据x线平片的k-l分级进行分组。以k-l分级均为0级的单纯膝关节半月板损伤的患者作为对照组。酶联免疫吸附测定(erlzyme-linked immunosorbent assay，elisa)法检测各组关节液中il-6、vegf的含量，免疫组织化学染色方法检测il-6、vegf在滑膜组织中的原位表达。 结果：k-l ii、级的关节滑液中il-6水平显著增高，差异有统计学意义；而k-l iv级患者关节滑液中il-6水平下降接近对照组。各实验组的滑液中vegf水平逐级增高，明显高于对照组

50、。oa滑膜组织普遍存在不同程度的炎症，滑膜色泽变暗红，组织增生，甚至呈绒毛样增生改变。免疫组织化学染色显示，il-6在滑膜衬里层及衬里下层细胞表达；vegf在在滑膜衬里层及血管平滑肌细胞表达。 结论：关节滑膜参与了骨关节炎的病理过程，滑膜产生的il-6、vegf很可能就是导致滑膜自身炎症慢性化、持续化的主要因素。滑液中vegf水平的持续升高可作为判断oa病情活动的一个指标。 第二部分 il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞生物学行为的影响 目的：观察il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞(fibroblastlike synoviocyte，fls)生物学行为的影响，探讨滑膜组织参与关节软骨破坏的

51、作用机制。 方法：首先对关节置换手术切除的oa滑膜组织作原代细胞培养，通过流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90抗原的表达情况对细胞进行鉴定。对3-5代的fls分别予以不同浓度的il-6、il-1以及il-6+il-1刺激，elisa法检测细胞上清液中vegf、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinases，mmp-13)的含量，逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，rt-pcr)检测il-6诱导的fls中vegf、mmp-13的mrna表达。 结果：流式细胞仪检测细胞表面cd

52、3、cd14、cd90表达，结果：cd90+为95.62，cd3+为2.64，cd14+为3.44，符合成纤维样细胞的特征。elisa和rt-pcr检测结果表明，单独应用il-6刺激fls，上清液中vegf的含量有所增加，而mmp-13的水平则无明显变化；单独应用il-1刺激fls，上清液中vegf、mmp-13的含量明显升高；二者联合使用，vegf、mmp-13的含量升高最显著。 结论：il-6本身诱导fls合成与分泌vegf、mmp-13的能力并不强，但是能协同il-1放大oa-fls的分泌功能。il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌mmp-13增加，从一个方面揭示了滑膜组织参与关节软

53、骨降解的途径；il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌vegf增加，则说明了滑膜组织的炎症反应能够持续性存在的部分原因。 第三部分 p38mapk抑制剂对滑膜成纤维样细胞表达vegf、mmp-13的影响及应用前景分析 目的：研究il-6参与oa关节病变的信号传导通路，探讨p38mapk选择性抑制剂应用于oa治疗的可能性。 方法：1.对il-6+il-1诱导的3-5代的fls分别予以不同浓度的p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen actived proteinkinase，p38mapk)选择性抑制剂sb220025进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13

54、的表达。2.分别用sb220025、地塞米松、美洛昔康对il-1、il-6诱导的fls进行干预，rt-pcr、western-blot检测vegf、mmp-13的表达。 结果：0.25ug/ml的sb220025就己充分显示出其对vegf、mmp-13的表达的强烈抑制，而且随着剂量的增加效果更明显。sb-220025对vegf的表达的抑制效果强于美洛昔康、地塞米松；对mmp-13表达的抑制效果远远强于美洛昔康、地塞米松。 结论：il-6、il-1诱导的fls中vegf、mmp-13的表达需要p38mapk通路的激活，sb-220025可以剂量依赖方式阻断这一效应。体外试验支持p38mapk选择

55、性抑制剂可以应用于oa治疗，效果强于美洛昔康、地塞米松。第一部分 il-6、vegf在膝骨关节炎患者关节滑膜和滑液中的表达及其意义 目的：检测不同阶段的膝骨关节炎(osteoarthritis，oa)患者关节滑膜组织和滑液中白细胞介素-6(interleukin-6，il-6)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，vegf)的表达情况，明确滑膜组织在oa发生发展过程中的作用，评价vegf作为进展期oa标志的可行性。 方法：临床收集膝关节镜或关节置换手术患者的关节滑液和滑膜组织，根据x线平片的k-l分级进行分组。以k-l分级均为0级的单纯膝

56、关节半月板损伤的患者作为对照组。酶联免疫吸附测定(erlzyme-linked immunosorbent assay，elisa)法检测各组关节液中il-6、vegf的含量，免疫组织化学染色方法检测il-6、vegf在滑膜组织中的原位表达。 结果：k-l ii、级的关节滑液中il-6水平显著增高，差异有统计学意义；而k-l iv级患者关节滑液中il-6水平下降接近对照组。各实验组的滑液中vegf水平逐级增高，明显高于对照组。oa滑膜组织普遍存在不同程度的炎症，滑膜色泽变暗红，组织增生，甚至呈绒毛样增生改变。免疫组织化学染色显示，il-6在滑膜衬里层及衬里下层细胞表达；vegf在在滑膜衬里层及

57、血管平滑肌细胞表达。 结论：关节滑膜参与了骨关节炎的病理过程，滑膜产生的il-6、vegf很可能就是导致滑膜自身炎症慢性化、持续化的主要因素。滑液中vegf水平的持续升高可作为判断oa病情活动的一个指标。 第二部分 il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞生物学行为的影响 目的：观察il-6对体外培养的滑膜成纤维样细胞(fibroblastlike synoviocyte，fls)生物学行为的影响，探讨滑膜组织参与关节软骨破坏的作用机制。 方法：首先对关节置换手术切除的oa滑膜组织作原代细胞培养，通过流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90抗原的表达情况对细胞进行鉴定。对3-5代的fls分

58、别予以不同浓度的il-6、il-1以及il-6+il-1刺激，elisa法检测细胞上清液中vegf、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinases，mmp-13)的含量，逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，rt-pcr)检测il-6诱导的fls中vegf、mmp-13的mrna表达。 结果：流式细胞仪检测细胞表面cd3、cd14、cd90表达，结果：cd90+为95.62，cd3+为2.64，cd14+为3.44，符合成纤维样细胞的特征。elisa和rt-pcr检测结果表明，单独应用il-6刺激fls，上清液中vegf的含量有所增加，而mmp-13的水平则无明显变化；单独应用il-1刺激fls，上清液中vegf、mmp-13的含量明显升高；二者联合使用，vegf、mmp-13的含量升高最显著。 结论：il-6本身诱导fls合成与分泌vegf、mmp-13的能力并不强，但是能协同il-1放大oa-fls的分泌功能。il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌mmp-13增加，从一个方面揭示了滑膜组织参与关节软骨降解的途径；il-6促使il-1诱导的fls合成与分泌vegf增加，则说明了滑膜组织的炎症反应能够持续性存在的部分原因。 第三部分 p38map