DNA的定量测定(二苯胺法)实验报告

1、DNA的定量测定（二苯胺法）实验报告一、实验目的掌握用二苯胺法定量测定 DNA含量的基本原理和方法。二、实验原理?在酸性环境中加热，DNA被水解为嘌呤，脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸。其中脱氧核糖在酸性条件下，脱水生成3-羟基-y-酮基戊糖，后者与二苯胺作用呈现蓝色，在595nm处有最大光吸收。当样品 DVA的含量在40 400范围时，光密度与 DNA的浓度 成正比。样品中含有少量RNA不影响测定结果，但是蛋白质，脱氧核糖，阿拉伯糖和芳香醛等能 与二苯胺形成各种各样有色物质， 干扰结果。在反应中加入少量乙醛，可以提高反反应 灵敏度。三、试剂与仪器DNA标准液，二苯胺试剂，样品溶液试管与试管架，吸管与

2、洗耳球，可见分光光度计四、DNA标准液曲线的制作与样品DNA含量的测定1.取8支洁净干燥的试管，按下表操作:编号12345678标准DNA溶一0.40.81.21.62.0一一液蒸馏水2.01.61.20.80.4一一二苯胺试剂4.04.04.04.04.04.04.04.0样品DNA溶液一一一一一一2.02.0混合后，于60度水浴中保温1h冷却至室温中，用分光光度计测定吸光值A595nm以DNA浓度为横坐标吸光值 A595nm为纵坐标，绘制标准曲线，对照组标准曲线计算样品中DNA勺含量五、实验结果与讨论DNA标准试管123456试管1试管2Y:吸光度0.0000.1290.2600.3690

3、.5180.6760.3990.386X:总DNA浓013.326.74053.366.7X1X2度（）0.8DN标准曲线度光吸Y*系列1线性（系列1）由图可知，标准曲线为 y=0.0098x，则求出的Xi=40.71 /ml,X 2=39.39 用/ml平均 DNA浓度为 40.05 旧/ml，含量 n%=40.05/100%=40.05%分析：由实验的标准曲线求得的DNA浓度40.05 冯/ml，在40-400用范围内，光密度与DNA的浓度成正比，用标准曲线求得的浓度为准确值，另外，由DNA的标准曲线的线性关系 R2 =0.9966,证明DNA光密度的关系密切，则求出的浓度也就比比较精确。

4、但本实验测得的 DNA含量比整体水平偏低，造成的原因可能是： 在吸取DNA溶液样品时，未充分摇匀，便吸取2.0mlDNA样液，造成 DNA含量不均，造成实验存在误差，另外，在加完试剂后，未摇后便至于60度水浴保温，造成二苯胺与DNA的脱水物结合不充分，造成吸光值的偏低，从而造成后续的计算，样品DNA浓度偏低。 进行分光光度测量时，可能由于比色皿未充分洗涤，有少量自来水的残留， 相当于稀释了样品DNA浓度，使测得DNA吸光值偏低。 在吸取二苯胺试剂分别加入8支试管时，由于采用了不同试瓶的二苯胺溶液，造成试剂间存在部分差异， 导致DNA的脱水物结合情况有所差别，影响最后DNA吸光值的测六、思考题1.如何定何判断某些样品是否有核酸？答：取了4支试管，按下表操作（ ml ）：编号1234样液2 . 0一2 . 0一蒸馏水一2 . 0一2 . 0地衣酚一2 . 02 . 0一二苯酚2 . 0一一2 . 0沸水浴中加热10 min观察试管内颜色变化，若1管变蓝，4管不变，则样品中含DNA，若3管变变绿，2管无变化，则样品中含RNA, 若2, 3管不变绿，则样品中不含RNA, 若样品中不含RNA, 含1,4管不变蓝，则样品中不含DNA。2 .实验中加入乙醛的目的是什么？答：