SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤之欧阳引擎创编

1、【跑电泳的步骤】欧阳引擎(2021.01.01)1、取出电泳仪器和四个烧杯；2、将超纯水倒入烧杯中，保鲜膜封口；3、配制过硫酸披溶液(AP) : 0.1gAP+0.9g超纯水，保鲜膜封 口；4、取出所有药品。Tris-HCL(88,6.8), TEMED, SDS, Acry- bis,按次序排好；5、拿卷纸平铺，移液枪枪头：三个蓝，两个黄，一个白，移液枪3只；6、先配分离胶7、组装凝胶模具，插好板(1) 海绵用自来水润湿，插在下面槽里；(2) 板：Bio-Rad前后玻璃板，注意前后顺序,夹子夹好,塞枪头于夹子上。8、配胶见配方，用2号蓝混匀所有试剂；9、加液至支架上方，用超纯水液封(不能用气

2、泡)；10、待界廁清晰后，用滤纸将水吸干；11、配浓缩胶；12、插梳子：一个个斜着插，有字面朝向我；13、拔下梳子，转移(有字朝里，白色架子垫黄纸，将玻璃板卡在绿卡下，不要有空隙，装去离子水，不能漏（山），等 待。），样品煮沸3分钟；14、用10uL移液枪移液，移液，每个依次加入梳槽内；15、电压（浓缩胶）90V,电流20mV;16、盖上盖子：红对红，黑对黑；插上电源插头：红对红，黑 对黑。【附配方】分离胶 separating gel (5mL) ( 1 个板3.5mL)1板2板Prescription12%10%7.5%3.5 mL7.0 mLDel H2O1.6 mL1 9mL2.3 m

3、L1.3 3niL2.66mL1.5MTris-HCL pH8.81.3 mL1.3 mL1.3 mL0.91 mL1.82 mL30%Acry/bis单体胶(29.2g+0.8g/100mL2 mL1.7 mL1.3 mL1.19mL1.38 mL/10%SDS50uL50uL50uL35uL70uL10% AP50uL50uL50uL35uL70uLTEMED2uL2uL(5 uL)2uL3.5uL7uL(夏)8 uL浓缩胶Stacking gel ( 2板3mL)PrescriptionVolume(2 mL)(2 mL)Del H2O1.4mL2.1niL0.5M Tris-HCL p

4、H6.8250uL375uL30%单体胶330uL495uL10%SDS20uL30uL10% AP20uL30uLTEMED2uL(5 11L)3uL(8 uL冬，5 uL夏)【附所需试剂配制】1、30%单体胶（30%单体胶即30%T, 2.67%C）配制50mL:丙烯酰胺Aery: 14.6g,甲叉双丙烯酰胺bis: 0.4g;（100mL:Aery 29.2g, bis 0.8g）超纯水定容至 50mL, 0.45 uM 膜过滤， 牝保存（一个月）；说明：单体浓度T是指单体总质量（丙 烯酰胺+双丙烯酰胺）在溶液中的百分比（m/V）,可选择的范 围为3%30% ; %C是指双丙烯酰胺与单体

5、总质量的比值 (m/m),也指交联度。2、分离胶缓冲液 pH&8 配制 100mL(1.5M Tris-HCL pH8.8):Tris l&15g,部分去离子水溶解，并用HCL调pH8.8,最后定 容至100 mL,过0.45 uM膜,4G保存。3、浓缩胶缓冲液 pH6.8 配制 50mL(0.5M Tris-HCL pH6.8): Tris3.0g,部分去离子水溶解，并用HCL调pH6.8,最后定容至50 mL, 4C保存。4、10%SDS: 5g/50 mL H2O,配制后 保存。5、10%AP (过硫酸钱)：用时现配，溶解状态十分不稳定，O.lg/lmL H2Oo .6、电泳缓冲液：配1000 mLTris 3.0g,甘氨酸14.4g, SDSl.Og,去离子水定容至1000mLo7、染色液：(1) 原液：配制200 mL:考马斯亮蓝(R-250) : 2.0g+200 mL去离子水；(2) 染色液：配制500 mL:原液62.5mL,甲酹250mL,冰乙酸50mL,去离子水137.5mLo8、脱色液：1000mL甲0? 500 mL